在胃粘膜活检物中超快速检测幽门螺旋杆菌制造技术

在胃镜检查分析期间快速检测胃粘膜活检标本中幽门螺旋杆菌的存在的组合物和相关的试剂盒，其包含在pH等于4.8的盐水溶液中的5％尿素和0.5‑10％的溴百里酚蓝。

Rapid detection of Helicobacter pylori in gastric mucosa biopsy specimens

Analysis of composition exists during rapid detection of gastric mucosa in Helicobacter pylori and relevant kit in gastroscopy, it is included in the pH is equal to 5% urea saline solution in 4.8 and 10% of the 0.5 bromothymol blue.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在胃粘膜活检物中超快速检测幽门螺旋杆菌
本专利技术涉及一种水溶液形式的诊断组合物，用于在内窥镜检查分析期间获取的活检样品中极快速地检测幽门螺旋杆菌(HelicobacterPylori)的存在，以及用于评价其细菌载量。
技术介绍
一些胃肠道疾病(例如胃溃疡或十二指肠溃疡，尤其是活动性慢性胃炎)与幽门螺旋杆菌在胃粘膜的部分定植或弥漫性定植紧密相关。该细菌也被称为幽门弯曲杆菌(CampylobacterPylori)，其通过尿素酶降解尿素。几十年前就已经知道存在于人胃粘膜的活检片段的幽门螺旋杆菌(FreedbergA.S.和BarronL.E.“在人胃粘膜中存在螺旋菌”(Thepresenceofspirochetesinhumangastricmucosa),1940,Am.J.Dig.Dis.,7:443-5；MarshallB.J.“在活动性慢性胃炎中的上皮细胞上的未知的弯曲杆菌”(UnidentifiedCurvedbacillionGastricepitheliuminactivechronicgastritis),1983,Lancet,1:1273-5)，并且其与B型慢性胃炎的因果相关性被广泛记载(Rauws等人.1988,Gastroenterology,94:33-40)，以及其参与消化性溃疡的发病机制也被广泛记载(PetersonW.L.幽门“螺杆菌与消化性溃疡疾病”(Helicobacterpyloriandpepticulcerdisease),1991,NewEng.J.Med.,324:1042-8)。幽门螺旋杆菌还被认为是十二指肠溃疡复发的风险因素(CoghlanJ.G.等人,“幽门弯曲杆菌和十二指肠溃疡复发12个月随访研究”(Campylobacterpyloriandrecurrenceofduodenalulcersat12-monthfollow-upstudy).Lancet1987；2:1109-1111)。因此，根除该细菌使得胃炎的组织学得到了改进，增加了溃疡愈合的可能性并且对预防复发有效。诊断幽门螺旋杆菌在胃粘膜活检物中的存在的最佳方法由组织学培养观察结合细菌培养观察构成(PetersonW.L.,“幽门螺杆菌与消化性溃疡疾病”(HelicobacterpyloriandPepticUlcerDisease),1991N.Engl.J.Med.,324:1043-1048)，虽然，在一些研究中，细菌培养观察的价值受到广泛质疑(MartinezE.,Marcos,A.,“幽门螺杆菌与消化性溃疡疾病”(Helicobacterpyloriandpepticulcerdisease),1991,Lancet,325:737)。幽门螺旋杆菌的存在还可通过寻找血液抗体来确定。然而，在根除细菌后数月该测试可能仍然保持阳性，或者在与其他抗体交叉反应的情况中出现10-15％的假阳性。确定幽门螺旋杆菌存在的另一种方法为呼吸测试C13，该方法就同位素材料和必要的仪器而言均是昂贵的。有效的替代性的测试使用特定的细菌尿素酶活性。为此，将粘膜活检物在含有尿素和pH敏感颜色指示剂的介质中培养(OwenR.J.等人,“通过胃弯曲菌快速水解尿素”(Rapidureahydrolysisbygastriccampilobacters),1985,Lancet,1:111)。样品中的细菌尿素酶通过尿素的水解释放氨，并且当生成的尿素的量足以使介质的pH值上升时，指示剂改变了颜色。尿素酶不通过人体生成，事实上，仅偶尔地，活检片段可能含有源自其它细菌的尿素酶，然而，其它菌株(例如变形杆菌(Proteus)、假单胞菌(Pseudomonas)和大肠杆菌(E.coli))含有的尿素酶的水平要低得多(KasperG.,DickgiesserN.“从胃上皮分离与幽门弯曲杆菌不同的弯曲菌样细菌”(IsolationfromgastricepitheliumofCampylobacter-likebacteriathataredistinctfromCampylobacterpyloridis),1985Lancet8420:111-112)。与该机理一致的是，已经开发了各种关于粘膜活检物的诊断测试。这些诊断测试包括Marshall(第4,748,113号美国专利，1988年5月31日)和Jackson(第5,439,801号美国专利，1995年8月8日)要求的技术方案。二者均描述了一种测试组合物，该测试组合物含有尿素，所述尿素通过-幽门螺旋杆菌尿素酶生成氨。该反应造成介质的pH增加，这通过指示剂颜色变化来指示。在Marshall测试中，培养介质为含有酚红作为pH指示剂的凝胶，当从尿素中释放的氨使pH增加到至少6.9时，指示剂从黄色变为红色。缓冲反应系统以使受血液或肠液污染的片段不升高pH值而造成假阳性结果。该测试要求培养(incubation)时间在30-40℃下为3小时，并且在室温下再额外要求培养最高达21小时。约75％的受幽门螺旋杆菌感染的活检物在20分钟内示出了阳性结果，并且90％在3小时内示出了阳性结果。然而，为了验证阴性结果，需要24小时。Jackson测试也在琼脂凝胶中进行，在该测试中，在不存在缓冲系统的情况下，使用两种颜色指示剂(甲基红和溴百里酚蓝)以及防腐剂(对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)。超过95％的测试在20分钟内为阳性，一些测试可能花费一个小时，但是所有的测试在4小时内均变为阳性。因此，进行该方法不需要如Marshall测试一样等待24小时以保证最终的结果。此外，从桃色到浅绿、深绿、浅蓝和深蓝的宽泛的颜色范围还提供了感染水平的半定量。另外，尿素酶反应在pH低于6.2时发生，这增加了测试的特异性，因为除幽门螺旋杆菌外的微生物(例如变形杆菌、假单胞菌和大肠杆菌)在酸性pH下不反应。已经开发了其它测试：CLO-(美国犹他州，金佰利(Kimberly-Klark,Utah,USA))、MRU(JGastroenterolHepatol1992；7:569-71)、Pronto-(Eur.J.Gastroenterol.Hepatol2004年2月16/21195-9)和RUT(快速尿素酶测试(RapidUreaseTest))(S.Afr.Med.J.2007,97:1281-4)。然而，即使在这些测试中，主要限制基本上是关于它们的非最佳灵敏度，特别是非最佳灵敏度与在短时间内需要获得可靠的结果相关。具体地，示出的灵敏度对应：CLO-测试：在5分钟时15％；在30时60％；以及在24小时的88％；Pronto-Dry：在5分钟时30％；在10分钟时50％；以及在60分钟时90％；RUT：在5分钟时70％；在24小时的91％；MRU：在5分钟时85％；在30分钟时92％。因此，虽然这些测试的应答时间即使低于之前的应答时间，但是仍不能确保门诊的可执行性。具体地，上文提及的方法中确定的缺点可概括在以下几点中：1)Marshall测试具有高尿素酶活性的活检物不多久就在片段周围显出红颜色。然而，在存在低酶活性的情况中，低量的氨显著延长了获得颜色变化所必需的培养时间。这一缺陷是由于用作指示剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
在胃镜检查分析期间快速检测胃粘膜活检标本中幽门螺旋杆菌的存在的组合物，其特征在于，所述组合物包含在pH等于4.8的盐水溶液中的5％尿素和0.5‑10％的溴百里酚蓝。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.03 IT FR2015A0000021.在胃镜检查分析期间快速检测胃粘膜活检标本中幽门螺旋杆菌的存在的组合物，其特征在于，所述组合物包含在pH等于4.8的盐水溶液中的5％尿素和0.5-10％的溴百里酚蓝。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，在盐水中的溴百里酚蓝的浓度在2％至6％范围内。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，在盐水中的溴百里酚蓝的浓度为4％。4.组合物用于在胃镜检查分析期间诊断胃粘膜的活检物中幽门螺旋杆菌的细菌载量，所述组合物包含在pH等于4.8的盐水溶液中的5％尿素和0.5-10％的溴百里酚蓝。5.根据权利要求4所述的组合物用于在胃镜检查分析期间诊断胃粘膜的活检物中幽门螺旋杆菌的细菌载量，其中，在盐水溶液中的溴百里酚蓝为4％。6.根据权利要求4和5所述的组合物的用途，其包括以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：马可·卡诺尼，V·伊奥文，
申请(专利权)人：马可·卡诺尼，
类型：发明
国别省市：意大利,IT