真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法技术

一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，抽取8.5ml血培养阳性液至8.5ml分离胶管中；把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；离心去上清后往EP管中加入1ml吐温Tween20进行反复吸吹，再在室温的条件下把EP管静置3min，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；用1ml无菌双蒸水反复吹吸沉淀，以此来让菌悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；获得的菌悬液通过化学试剂处理后进行直接MALDI‑TOF质谱鉴定，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷。

Fungal positive blood culture separation gel and pretreatment method of chemical reagent

A positive blood culture fungi separation gel and chemical reagent pretreatment methods, 8.5ml blood culture positive solution to 8.5ml separation hose; the hose is placed into a centrifuge separation effect, centrifuge centrifugal force in the 4000g under the centrifugal 10min; to join 1ml Twain Tween20 in EP supernatant after centrifugal tube to suck and blow repeatedly. Then at room temperature under the condition of EP pipe laying 3min, centrifuge centrifugal 2min at 13000rpm rpm, the EP do not touch the bottom of the pipe under the condition of suction precipitation supernatant; with 1ml sterile double distilled water repeatedly blowing and suction precipitation, in order to make the bacteria suspended bacteria suspension formed in sterile distilled water get; bacterial suspension by chemical reagent treatment for direct identification of MALDI TOF MS, effectively avoid the long time-consuming defect of the whole process in the prior art.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及真菌阳性血培养
，具体涉及一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法。
技术介绍
现有的真菌阳性血培养的鉴定方法是：血培养仪阳性报警后按传统流程处理，涂片革兰染色、显微镜观察、转种沙保弱平板在需氧条件下培养24-48h获得纯菌落后，再使用现有的基于生化反应或免疫学方法的商品化仪器如Vitek2Compact、API20C等进行鉴定。但是目前这样的方法需要将阳性血培养液转种至培养基上，培养孵育至肉眼可见的单个纯菌落后，再挑选单个纯菌落通过后续的方法进行鉴定，整个过程耗时较长(约48h-72h)。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷。为了克服现有技术中的不足，本专利技术提供了一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法的解决方案，具体如下：一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，具体步骤如下：步骤1：抽取血培养阳性液至8.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：抽取血培养阳性液至8.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；步骤4：用1ml无菌双蒸水反复吹吸分离胶管中分离胶表面的菌膜，以此来让菌膜悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；步骤5：将1ml菌悬液转移至1.5ml EP管中，将EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤6：再往EP管中加入1ml无菌双蒸水后进...

【技术特征摘要】
1.一种真菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：抽取血培养阳性液至8.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；步骤4：用1ml无菌双蒸水反复吹吸分离胶管中分离胶表面的菌膜，以此来让菌膜悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；步骤5：将1ml菌悬液转移至1.5mlEP管中，将EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤6：再往EP管中加入1ml无菌双蒸水后进行反复吹吸洗涤，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤7：接着往EP管中加入1ml吐温Tween20后进行反复吸吹，再在室温的条件下把EP管静置3min，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤8：往EP管中加入1ml无菌双蒸水及200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；步骤9：把EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤10：往EP管底的沉淀中加入浓度百分比为75％的乙醇700μl构成第一混合物，然后对该第一混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨启文，周梦兰，徐英春，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11