革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法技术

一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，抽取3.5ml血培养阳性液至3.5ml分离胶管中；把分离胶管放置到离心机中，离心机在4000g的离心力的作用下离心10min；在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；将1ml菌悬液转移至1.5mlEP管中，往EP管中加入200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；获得的菌悬液通过化学试剂处理后进行直接MALDI‑TOF质谱鉴定，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷。

Gram negative bacteria positive blood culture separation gel and pretreatment method of chemical reagent

A gram negative bacteria positive blood culture separation gel and chemical reagent pretreatment methods, 3.5ml blood culture positive solution to 3.5ml separation hose; the hose is placed into a centrifuge separation effect, centrifuge centrifugal force in the 4000g under the centrifugal 10min in biofilm; don't touch the rubber hose separation conditions the positive blood culture supernatant liquid absorption; 1ml bacterial suspension was transferred to the 1.5mlEP tube, EP tube to add 200 mu L and concentration percentage was 10% SDS, the EP tube was placed in the vortex oscillation apparatus for vortex 1min, then at room temperature under the condition of EP tube static 5min get; bacterial suspension by chemical reagent treatment for direct identification of MALDI TOF MS, effectively avoid the long time-consuming defect of the whole process in the prior art.

【技术实现步骤摘要】
革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法
本专利技术涉及革兰氏阴性菌阳性血培养
，具体涉及一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法。
技术介绍
现有的革兰氏阴性菌阳性血培养的鉴定方法是：血培养仪阳性报警后按传统流程处理，涂片革兰染色、显微镜观察、转种血或巧克力平板在厌氧或需氧条件下培养24-48h获得纯菌落后，再使用现有的基于生化反应或免疫学方法的商品化仪器如Vitek2Compact、API20C和BDPhoenixTM-100等进行鉴定。但是目前这样的方法需要将阳性血培养液转种至培养基上，培养孵育至肉眼可见的单个纯菌落后，再挑选单个纯菌落通过后续的方法进行鉴定，整个过程耗时较长(约24h-48h)。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，有效避免了现有技术中整个过程耗时长的缺陷。为了克服现有技术中的不足，本专利技术提供了一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法的解决方案，具体如下：一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，具体步骤如下：步骤1：抽取3.5ml血培养阳性液至3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：抽取3.5ml血培养阳性液至3.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；步骤4：用1ml无菌双蒸水反复吹吸分离胶表面的菌膜，以此来让菌膜悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；步骤5：将1ml菌悬液转移至1.5ml EP管中，往EP管中加入200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；步骤6：把EP管放入离心...

【技术特征摘要】
1.一种革兰氏阴性菌阳性血培养分离胶及化学试剂前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：抽取3.5ml血培养阳性液至3.5ml分离胶管中；步骤2：把分离胶管放置到离心机中，离心机在离心力的作用下离心10min；步骤3：在勿碰触分离胶管中的分离胶的表面菌膜的条件下对血培养阳性液进行吸弃上清；步骤4：用1ml无菌双蒸水反复吹吸分离胶表面的菌膜，以此来让菌膜悬浮在无菌双蒸水中形成菌悬液；步骤5：将1ml菌悬液转移至1.5mlEP管中，往EP管中加入200μl且浓度百分比为10％的SDS，把EP管放置在涡旋振荡仪上进行涡旋震荡1min后，再在室温的条件下把EP管静置5min；步骤6：把EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤7：往EP管底的沉淀中加入浓度百分比为75％的乙醇700μl构成第一混合物，然后对该第一混合物进行吹吸混匀；步骤8：接着在室温条件下把该EP管静置10min；步骤9：将EP管放入离心机中，离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心2min，在勿触碰EP管底的沉淀的条件下吸弃上清；步骤10：继续让离心机在13000rpm的转速的条件下进行离心1min，在勿触碰EP...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨启文，周梦兰，徐英春，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11