一种腈水解酶及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种腈水解酶及其应用，所述腈水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，本发明专利技术提供的腈水解酶可在12h反应时间里，共将600mM的底物完全水解，由于底物流加和pH调控的稀释作用，累计产生了112g/L的产物邻氯扁桃酸。整个反应过程中反应转化率保持在90％以上。反应10h后停止流加，继续反应2h后底物全部转化完。反应速率非常快，反应转化率也很高。

A nitrile hydrolase and its application

The present invention relates to the field of biotechnology, in particular, relates to a nitrilase and its application, the nitrilase amino acid sequence of SEQ ID NO:1 shows, nitrilase provided by the invention can be in the 12h reaction time, there will be complete hydrolysis of 600mM substrate, due to the dilution effect of substrate feeding and pH regulation the total product o-chloromandelic acid 112g/L. The reaction conversion rate kept above 90% in the whole reaction process. The reaction was stopped after 10h, and the substrate was completely converted after 2H reaction. The reaction rate is very fast and the reaction conversion rate is also high.

【技术实现步骤摘要】
一种腈水解酶及其应用
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种腈水解酶及其应用。
技术介绍
(R)-(-)-邻氯扁桃酸是一种具有广泛用途的医药中间体和精细化工品，主要用于抗血小板凝集药物氯吡格雷的合成。氯吡格雷作为全球重磅级药物，2010年全球销售额近100亿美元，2011和2012年的销售额也都在90亿美元以上。随着2012年5月17号氯吡格雷专利到期，全球掀起了一股仿制热潮。而作为其重要中间体的(R)-(-)-邻氯扁桃酸随之也水涨船高，国内外需求不断增长，因此研究如何获得高浓度、高纯度的(R)-(-)-邻氯扁桃酸将具有重要的市场意义。国内外通过腈水解酶酶法制备(R)-(-)-邻氯扁桃酸已有报道，但数量不多。张陈胜通过传统的基因组探矿技术从Stappiaaggregata中筛选到对邻氯扁桃腈具有对映体选择性的腈水解酶LaN，产物(R)-(-)-邻氯扁桃酸的ee值为96.5％，但活力不高。BASF公司构建了来源于A.faecalisATCC8750的腈水解酶Y296位的不同突变体，其中Y296A突变体对外消旋的邻氯扁桃腈的相对比活力为Y296野生型的近10倍。Y296C突变体对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种腈水解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种腈水解酶，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。2.权利要求1所述的腈水解酶在催化合成R-邻氯扁桃酸中的应用。3.权利要求1所述的腈水解酶在催化合成R-邻氯扁桃酸的中间产物中的应用。4.编码权利要求1所述的腈水解酶的基因。5.根据权利要求4所述的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。6.一种表达载...

【专利技术属性】
技术研发人员：许向阳，刘可春，楚杰，何秋霞，宋在伟，栗建中，
申请(专利权)人：枣庄市杰诺生物酶有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37