引起免疫原性反应降低的被修饰细胞制造技术

本申请描述了与遗传性修饰的干细胞相关的组合物，方法和系统。与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的主要组织相容性复合体II(MHC II)较少。同时，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性。

A modified cell that causes a decrease in immune response

The present application describes compositions, methods, and systems related to genetically modified stem cells. Compared with the wild type cells of the corresponding tissue, major histocompatibility complex modified cells II (MHC II) less. At the same time, the modified cells exhibited reduced immunogenicity compared with the corresponding wild-type cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】引起免疫原性反应降低的被修饰细胞相关专利申请的交叉引用本申请要求2015年1月17日提交的题目为“引起免疫原性反应降低的被修饰细胞”的美国临时专利申请号62/104,709的优先权，所述临时专利申请通过全文引用并入本文。
本公开涉及细胞治疗。更具体地，本公开涉及引起免疫原性反应降低的被修饰细胞。
技术介绍
干细胞具有自我更新和分化的能力。在某些条件下，干细胞可以分化成多种功能细胞。根据发育阶段，干细胞可以分为胚胎干细胞(ES细胞)和成体干细胞两类：根据发展的潜力，干细胞可分为三类：全能干细胞(TSC)，多能干细胞和单能干细胞。干细胞未分化和未成熟，具有再生人类各种组织和器官的能力。自20世纪90年代以来，人们已经尝试了几种涉及干细胞的治疗策略从而来治愈疾病。然而，对于临床应用基于干细胞的细胞替代疗法，主要障碍仍然没有克服(例如同种异体移植免疫排斥)。
技术实现思路
本文的实施方案涉及被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的主要组织相容性复合体II(MHCII)较少。在此情况下，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该干细胞的细胞。本文的实施方案进一步涉及制造被修饰干细胞用于生物移植的方法。该方法包括在培养基中培养该被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII较少。在此情况下，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该被修饰的干细胞的细胞。本文的实施方案进一步涉及治疗病症的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的该被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII较少。在此情况下，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该干细胞的细胞。在一些实施方案中，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII的生物合成或转运途径的一个或多个基因的表达有所降低。在一些实施方案中，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞上累积的MHCII量减少。在一些实施方案中，被修饰干细胞的与MHCII的生物合成或运输途径相关的内源基因有破坏。在一些实施方案中，该破坏包括MHCII类反式激活因子(CIITA)的破坏。在一些实施方案中，该破坏源于至少部分CIITA的缺失。在一些实施方案中，MHCII包含人白细胞抗原II(HLAII)。在一些实施方案中，修饰的干细胞包括全能干细胞，多能干细胞，胚胎干细胞，诱导多能干细胞或多能干细胞中的至少一种。在一些实施方案中，修饰的干细胞包含人胚胎干细胞。在一些实施方案中，与相应的野生型细胞相比，降低的免疫原性包括由被修饰细胞诱导的炎症反应的死亡水平。在一些实施方案中，被修饰细胞的核型与相应野生型细胞的核型相同。在一些实施方案中，被修饰细胞的多能性水平与相应野生型细胞的多能性水平基本相同。提供该
技术实现思路
以用简化的形式介绍以下具体实施方式中进一步描述的精选概念。该
技术实现思路
并不旨在标识所要求保护的主题的关键特征或必要特征，也不旨在用于限制所要求保护的主题的范围。附图说明参照附图描述具体实施方式。在不同附图中使用相同的参考数字表示类似或相同的项目。根据与hESCs中CIITA的破坏相关的实施方案，图1示出了TALENs针对人CIITA外显子2的序列(A)，以及用TALENX1制造的CIITA缺陷型人胚胎干细胞(hESC)的效率(B)。根据在与CIITA靶向hESCs的多能性相关的实施方案，图2a显示了在CIITA-/-hESCs中多能标记Nanog，Oct4，SSEA3和Tra-1-60的免疫染色。根据CIITA靶向hESC的多能性相关的实施方案，图2b显示了由CIITA-/-hESCs形成的畸胎瘤中HE染色鉴定出三个胚层[(中胚层(左)，外胚层(中)和内胚层(右)]，比例尺为100μm。根据与CIITA靶向hESC的多能性相关的实施方案，图2c显示了CIITA靶向的hESC衍生的EB中分化的标志物表达的RT-PCR分析。根据与CIITA靶向hESC的多能性相关的实施方案，图2d示了CIITA杂合和纯合的hESC的核型分析。两组均有两个样本分析，无异常核型。根据与来自CIITA靶向hESCs的成纤维细胞中CIITA和HLAII类表达相关的实施方案，图3a显示了hESCs衍生的成纤维细胞中β2M，CIITA，HLAII(DRA，DQA，DPA)和Ii的RT-PCR分析。用IFN-γ(500U/mL)处理5天。对照组无IFN-γ。将所有组与CIITA+/+IFN-γ游离组进行比较。通过t检验评估显着性。数据表示为平均值±SEM.n≥3.***p<0.001，**P<0.01。根据与来自CIITA靶向hESC的成纤维细胞中CIITA和HLAII类表达相关的实施方案，图3b显示了经过处理的成纤维细胞(如上所述治疗的成纤维细胞)中HLAII和CIITA蛋白表达的蛋白质印迹。比例尺100μm。根据与来自CIITA靶向hESC的成纤维细胞中CIITA和HLAII类表达相关的实施方案，图3c显示了处理的成纤维细胞(如上所述治疗的成纤维细胞)中HLAII和CIITA蛋白表达的免疫染色分析。比例尺100μm。根据与来自CIITA靶向hESC的成纤维细胞中CIITA和HLAII类表达相关的实施方案，图3d显示了处理的成纤维细胞中HLAI和II蛋白表达在细胞表面的FACS分析。根据与衍生自CIITA靶向hESC的DCs中的HLAII类表达相关的实施方案，图4a显示涉及的来自CIITA靶向hESC的DC中CD83，CD86，CD11c，DRA，DPA，DQA，Ii，CIITA，HLA-E和β2M的RT-PCR分析。将所有组与CIITA+/+hESCs组进行比较。根据来自CIITA靶向hESC的DCs中HLAII类表达相关实施方案，图4b示出了DCs中HLAII表达的FACS分析，其由的CD83和CD86的共表达来定义，并比较HLAII+的百分比。通过t检验评估显着性。数据表示为平均值±SEM，n≥3，***p<0.001，**P<0.01，*P<0.05。根据与来自Teratomas的人成纤维细胞的衍生相关的实施方案，图5显示了源自hESC的成纤维细胞和源自hESC的成纤维细胞表达波形蛋白的形态(A)。将所有组与CIITA+/+成纤维细胞组进行比较(GB)。具体实施方式除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有如本公开所属的领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然在本公开的实践或测试中可以使用与本文描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但是描述了优选的方法和材料。对于本公开的目的，下列术语定义如下。本文使用冠词“一(a)”和“一个(an)”指的是一个或多于一个(即，指的是至少一个)该冠词的语法对象。举例来说，“元件”表示一个元件或多于一个元件。“约”是指与参考量、水平、值、数量、频率、百分比、量纲、大小、用量、重量或长度相比，量、水平、值、数量、频率、百分比、量纲、大小、用量、重量或长度的变化高达30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％。“编码序列”指的是导致基因多肽产物编码的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的主要组织相容性复合体(MHC II)较少，同时与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该被修饰的干细胞的细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.17 US 62/104,7091.一个被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的主要组织相容性复合体(MHCII)较少，同时与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该被修饰的干细胞的细胞。2.一种产生用于移植的被修饰干细胞的方法，该方法包括在培养基中培养该被修饰细胞，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII较少，同时与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该被修饰的干细胞的细胞。3.被修饰细胞用于制备治疗帕金森病，亨廷顿舞蹈病，阿尔茨海默病，肌萎缩性侧索硬化，脊髓性肌萎缩，神经变性疾病精神病以及脊髓损伤，中风，烧伤，心脏病，肝脏疾病，糖尿病，血癌，器官移植缺损和损伤再生的至少一种疾病药物中的应用，其特征在于，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII较少，同时与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞具有降低的免疫原性，而且被修饰细胞是被修饰的干细胞或源于该被修饰的干细胞的细胞。4.根据权利要求1所述的被修饰细胞，其特征在于，与相应的野生型细胞相比，被修饰细胞的MHCII的生物合成或转运途径的一个或多个基...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖磊，陈海德，崔春，李阳，崔迪，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33