原始肠内胚层细胞及其制作方法技术

本发明专利技术提供用于廉价稳定并且大量地诱导人器官细胞的基盘技术。也提供在使多能性干细胞分化之后，实施至少1次以上传代之后诱导的细胞，其中，作为未分化(多能性)细胞标志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是阴性，作为内胚层细胞标志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是阴性，作为肠内胚层细胞标志物的CDX2，HOXB9是阳性，再者，作为间充质细胞标志物的Brachyury(T)是阴性，作为胰腺细胞标志物的PDX1是阴性，可至少分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞的细胞。上述细胞的制作方法及扩增方法、使用上述细胞制作器官细胞的方法、冷冻－保存上述细胞，构建用于制造器官细胞的工作细胞库的方法。

Primitive intestinal endoderm cell and method for making the same

The present invention provides a substrate technique for inexpensive, stable, and large induction of human organ cells. After the stem cell differentiation can also provide implementation, at least after more than 1 passages induced cell, which is undifferentiated (pluripotency) cell markers NANOG, OCT4, MYC, LIN28A is negative, as endodermal cell markers CXCR4, CER1, HHEX, GATA4 is negative, as intestinal endoderm cell markers CDX2, HOXB9 is positive, moreover, as mesenchymal cell marker Brachyury (T) is negative, as pancreatic cell marker PDX1 was negative, can at least differentiate into liver cells and pancreatic cells and intestinal cells. The invention relates to a method for making cells and an amplifying method, a method for making organ cells by using the above cells, and a method for cryopreservation and preservation of the cells, and a method for constructing a working cell bank for making organ cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】原始肠内胚层细胞及其制作方法
本专利技术涉及原始肠内胚层细胞及其制作方法，更具体而言，涉及能分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞的内胚层细胞及其制作方法。
技术介绍
近年，关注利用自iPS/ES细胞等的多能性干细胞诱导的组织－器官而开发新的药品的药物开发筛选或补救丧失的器官的功能的再生医疗实现化(Takebe，etal.Nature，499：481-484，2013(非专利文献1)、WO2013/047639：组织及器官的制作方法(专利文献1))。为了实现对于使用人iPS细胞的肝疾病的再生治疗，“超大量”的人肝细胞的GMP等级的制造技术变得必要。例如，为了使人成体肝脏的约30％的功能替代成为可能，对于1名患者，作为肝细胞数，移植6×1010个细胞植活是必须条件。一方面，对于这些超大量的人肝细胞制造，在通过由既有的现有技术的分化诱导流程尝试细胞调制时，如果考虑到移植效率，则1人的肝移植待机患者的治疗需要约95亿日元的莫大的成本，由我们的成本试算确证。【现有技术文献】【非专利文献】非专利文献1：Takebe，etal.Nature，499：481-484，2013【专利文献】专利文献1本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞，其为在使多能性干细胞分化之后，实施至少1次以上传代之后诱导的细胞，其中作为未分化(多能性)细胞标志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是阴性，作为内胚层细胞标志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是阴性，作为肠内胚层细胞标志物的CDX2，HOXB9是阳性，此外，作为间充质细胞标志物的Brachyury(T)是阴性，作为胰腺细胞标志物的PDX1是阴性，且所述细胞至少可分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.09 JP 2014-2486941.细胞，其为在使多能性干细胞分化之后，实施至少1次以上传代之后诱导的细胞，其中作为未分化(多能性)细胞标志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是阴性，作为内胚层细胞标志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是阴性，作为肠内胚层细胞标志物的CDX2，HOXB9是阳性，此外，作为间充质细胞标志物的Brachyury(T)是阴性，作为胰腺细胞标志物的PDX1是阴性，且所述细胞至少可分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞。2.权利要求1所述的细胞的制作方法，其包括：在第1阶段，在Rock抑制物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：武部贵则，谷口英树，张冉冉，
申请(专利权)人：公立大学法人横滨市立大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP