成体心脏干细胞群制造技术

本发明专利技术涉及一种特异的多能心脏干细胞的鉴定，分离扩增和特性的阐明。阐明这些成体干细胞的特性是由于它们天然地表达一类特异性的可以被用于辅助其分离和扩增的分子标记。特别地，所述细胞表达SOX17和GATA4，但不表达Oct4，Nanog，c-kit和端粒酶逆转录酶。这些细胞能够分化成为以下以细胞类型中的一种或多种：脂肪细胞，骨细胞，内皮细胞和/或平滑肌细胞。它们在免疫调节以及提供，激活和/或诱导损伤的心脏组织的修复上表现出前所未有的能力。这些成体干细胞可被用作治疗试剂治疗，包括但不限于，组织再生，特别是损伤心脏组织如心肌的再生。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】成体心脏干细胞群 专利
本专利技术涉及一类特异的成体心脏干细胞的鉴定、分离、扩增和特性的阐明。阐明这 些成体干细胞的特性是由于它们天然地表达一类特异性的可以被用于辅助其分离和扩增 的分子标记。本专利技术细胞在提供、激活和/或诱导损伤心脏组织的修复上表现出前所未有的 能力。这些成体干细胞可被作为治疗试剂用于包括，但不限于，组织再生，特别是损伤的心 脏组织如心肌再生。 专利技术背景 现有技术中已描述过多种不同的心脏干细胞系，包括在WO 99/49015，W0 2005/ 012510,W02006/052925,ff002/09650,ff002/13760,ff003/103611,ff02007/100530,ff02009/ 073616，W02011/057249，W02011/057251，W02012/048010,W02006/093276和，W02009/ 136283中描述的细胞系。 尽管这些干细胞系已通过不同的手段被分离，它们都共有很多相同的特性，实际 上可能是相同的或实质上一样的干细胞群。特别地，所述已知的成体心脏干细胞群都共有 某些特性、分子标记和形态学特点。所述已知的细胞共有同样的起源(心脏组织）、贴壁培养 时的形态，表达成体干细胞表面的分子标记CD90或CD44,并且大部分在扩增过程中的某些 时间点也表达c-kit，主要是在所述干细胞培养启示时。端粒酶也被表明在这些细胞中是活 跃的。此外，所有这些细胞都具有分化为心脏谱系细胞的能力，如平滑肌、内皮细胞或心肌 细胞。 尽管现有技术中已经知道有多种不同的心脏干细胞系，仍然存在鉴定并阐明一种 能够被用作治疗用途的心脏干细胞系需要。在治疗的背景下，与接受者遗传上不一致的干 细胞系常常在疗效可见之前因对所述干细胞的免疫排斥而引发问题。另一成体来源的多能 干细胞所经常经历的问题是在注射到成体动物中时会有形成畸胎瘤的倾向，因此其作为治 疗药物的应用受到限制。因此目前仍存在需要鉴定一具有治疗用途的潜力，但注射到病人体内时不具有形 成畸胎瘤倾向的成体心脏干细胞群。更进一步，需要不会引起免疫排斥风险的细胞。 专利技术概要 本专利技术提供一新成体心脏干细胞群，其与已知细胞群在分子标记表达谱和形态上 不同，并且由于其低免疫原性及对同种异体、同源或免疫缺陷宿主施用时不会形成畸胎瘤 而适于治疗应用。本专利技术所述心脏干细胞还能调节接受者的对异源细胞的免疫应答并能诱 导血管发生。本专利技术所述细胞可分离自心脏组织，优选地分离自心肌组织，并在体外附着于 通常用于制备细胞库的表面上扩增。与其他前述细胞不同，本专利技术所述细胞为端粒酶逆转 录酶阴性，所以其扩增能力有限，预防了肿瘤形成。 本专利技术所述成体心脏干细胞的心脏保护、免疫调节能力和心脏再生潜能使其成为 治疗诸如缺血性心脏病、自身免疫疾病、伤口愈合过程或再生治疗等不同疾病的合适的治 疗工具。特别地，下述由本专利技术所述成体心脏干细胞所介导的现象使其成为治疗与细胞死 亡和炎症过程有关的疾病的有用的治疗工具：-由这些细胞产物所介导的心脏保护信号将限制创伤之后细胞的损失。-所述成体心脏干细胞的免疫调节能力将调节T细胞和巨噬细胞介导的炎症过程。 尽管创伤后启始阶段的免疫应答对去除细胞碎片和启始伤疤形成是关键的，延长的炎症过 程将不会使伤疤消除和组织再生。 -最后，大鼠模型的体内实验表明所述成体心脏干细胞具有诱导新生组织形成、减 少伤疤的尺寸和增加新生肌纤维存在的能力。这将通过所述成体心脏干细胞激活内源干细 胞的能力被介导。 因此，所有这些由本专利技术成体心脏干细胞介导的活性是它们称为治疗与细胞死亡 和炎症过程有关的疾病的有用的治疗试剂。此外，这些细胞在需要形成新生组织的疾病中 可被用于促进组织再生。在这个意义上，人缺血性心脏病可使用这些细胞进行治疗。所述成 体心脏干细胞在该疾病的急性阶段将会限制细胞的丧失，调节免疫应答以使再生更快，最 后还将激活内源组织的常驻细胞促进新生组织形成。 成体心脏干细胞和成体心脏干细胞群 本专利技术提供成体心脏干细胞，特别地以一大体上纯的成体心脏干细胞群的形式提 供，其中所述成体心脏干细胞(CSCs)或所述大体上纯的成体心脏干细胞群表达分子标记 S0X17和GATA4,并且其中所述成体心脏干细胞或所述大体上纯的成体心脏干细胞群不表达 分子标记 0ct4，Nanog 和 c_ki t 〇 "成体"是指所述干细胞不是来源于胚胎的。在一种实施方案中，"成体"意为胚胎 后或"出生后"。对于本专利技术的干细胞，术语"成体干细胞"意为所述干细胞分离自生长阶段 在胚胎期之后的动物的组织或器官。在一些情况下，本专利技术的干细胞也可能分离自出生后 阶段。所述细胞可分离自哺乳动物，如大鼠、小鼠、猪或人。成体干细胞不像胚胎干细胞，后 者通过其起源-胚囊的内细胞团来界定。根据本专利技术的成体干细胞可分离自任何非胚胎的 组织，并将包括初生儿、少年、青年和成人个体。通常本专利技术所述干细胞会分离自一非新生 哺乳动物，例如分离自一个非新生的人、大鼠、小鼠或猪。优选地，本专利技术所述干细胞分离自 人，因此是人成体心脏干细胞或以大体上纯的人成体心脏干细胞群。 本专利技术所述成体心脏干细胞及所述大体上纯的人成体心脏干细胞群可被分离获 得。 术语"分离"表示其所指的细胞或细胞群不在天然的环境中。所述细胞或细胞群大 体上从周边的组织被分离出来。在一些实施方案中，如果样品包括至少大约75%，在一些实 施方案中至少大约85%，在一些实施方案中至少大约90%，在一些实施方案中至少大约 95 %的成体干细胞，则所述细胞或细胞群被大体上从周边的组织中被分离出来。换言之，如 果样品包括少于大约25%，在一些实施方案中少于大约15 %，在一些方案中少于大约5 %的 物质不是成体干细胞，则所述样品大体上从周边的组织中被分离出来。所述百分比值指重 量或细胞数百分比。该术语包括取自其自身来源的生物体、随后又再次植入某生物体的细 胞。所述包括再次植入的细胞的生物体可以是所述细胞所取自的同样的生物体，或者可以 是不同的生物体，即相同物种的不同个体。 所述新成体心脏干细胞和所述新成体心脏干细胞群的分子标记表达谱可以通过 额外的分子标记的存在和/或不存在，或通过特定的存在或不存在的分子标记组合的表达 谱来进一步界定。在每种情况下，所述特定的分子标记组合可作为在一群细胞内的特定表 达谱和/或群内的单个细胞的特定分子标记表达谱存在。 因此，在一种实施方案中本专利技术提供了一种分离的多能成体心脏干细胞，其中所 述细胞表达以下分子标记：（a) SOX 17和GATA4，并且其中所述细胞不表达以下分子标记：（b) 0ct4，Nanog，c-ki t和端粒酶逆转录酶，其中所述细胞能够分化为以下细胞类型中的一种或 多种:脂肪细胞，骨细胞，内皮细胞和/或平滑肌细胞。本专利技术还提供了一大体上纯的成体心 脏多能干细胞群，其中所述细胞群表达以下分子标记：（a)S0X17和GATA4;和/或其中所述细 胞群不表达以下分子标记：（b)0ct4,Nanog，c-kit和端粒酶逆转录酶，其中所述细胞能分化 为以下细胞类型中的一种或多种:脂肪细胞，骨细胞，内皮细胞和/或平滑肌细胞。 在一特定实施方案中，本专利技术所述成体心脏干细胞和/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多能成体心脏干细胞，其中所述细胞表达以下分子标记：(a)SOX17和GATA4其中所述细胞不表达以下分子标记：(b)Oct4，Nanog，c‑kit和端粒酶逆转录酶，其中所述细胞能分化为以下细胞类型中的一种或多种：脂肪细胞，骨细胞，内皮细胞和/或平滑肌细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：路易斯·罗德里格斯博尔拉多，意驰尔·帕拉西奥斯，约瑟·路易斯·阿瓦德，贝伦·桑切斯，弗吉尼亚·阿尔瓦雷斯，罗萨尔芭·罗萨多，
申请(专利权)人：科特拉匹克斯公司，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES