获得和使用内胚层和肝细胞的组合物和方法技术

本发明专利技术提供用于产生内胚层细胞和/或来自内胚层细胞的分化细胞(例如，肝细胞、胰前体细胞、胰细胞、肠祖细胞、肠细胞、肺祖细胞、肺细胞等)的群体的有效方法。还提供了内胚层细胞和来自内胚层细胞的分化细胞(例如，肝细胞、胰前体细胞、胰细胞、肠祖细胞、肠细胞、肺祖细胞、肺细胞等)的组合物及使用此类细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】获得和使用内胚层和肝细胞的组合物和方法相关申请的交叉参考该申请要求2012年5月23日提交的美国临时专利申请号61/650,762的优先权，其内容以其整体并入本文作为参考。专利
本专利技术是干细胞、内胚层细胞、胰祖细胞、肝细胞和来自内胚层细胞的其他细胞的领域。一般地，本专利技术涉及制备和使用内胚层细胞、胰祖细胞、肝细胞和/或来自内胚层细胞的其他细胞的组合物和方法。专利技术背景使得干细胞独特适合于细胞疗法应用的两种性质是多能性和在培养物中长时间维持这些细胞的能力。多能性由干细胞分化成所有三个原始胚层(内胚层、中胚层、外胚层)的衍生物的能力定义，所述三个原始胚层的衍生物继而形成除胚外组织(例如胎盘)和生殖细胞外的成熟生物的所有体细胞类型。然而，干细胞的多能性也为研究和操作这些细胞及其衍生物提出了独特的挑战。由于可能在分化干细胞培养物中出现的大量细胞类型，大多数细胞类型以非常低的效率产生。为了使用干细胞作为起始材料产生在细胞中用于研究和治疗的细胞群体，将有利地克服至想要的最终群体的转化量以及转化速率方面的生产效率问题。例如，鉴定产生细胞类型，如中内胚层细胞、内胚层细胞和肝细胞的群体(其可以以增加的增殖速率在培养物中产生和/或维持)的方法将是有用的，由此提供更多并且更廉价的细胞供应。此外，为了使用多种细胞群体(例如肝细胞)用于治疗目的，拥有具有改善的性质，如成熟的细胞群体提供更好的治疗潜能将是有用的。因此，需要的是内胚层细胞的活力群体和肝细胞的群体以及用于实现干细胞有效、定向分化成这些细胞类型的方法。本文公开的组合物和方法解决了这些需要并且还提供了额外的益处。本文公开的全部参考文献、出版物、专利和专利申请以其整体并入本文作为参考。专利技术概述本专利技术尤其提供用于产生内胚层细胞、胰祖细胞、肝细胞和/或来自内胚层细胞的具有独特性质的其他细胞的组合物(例如，群体)和方法。这些细胞群体可用于多种筛选和/或治疗用途。因此，一方面，本专利技术提供内胚层细胞的分离群体，其中至少83％的细胞表达SOX17，至少77％的细胞表达FoxA2，或至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述内胚层细胞的分离群体的一些实施方案中，至少83％的细胞表达SOX17并且至少77％的细胞表达FoxA2。在根据(例如应用于)上述内胚层细胞的分离群体的一些实施方案中，至少77％的细胞表达FoxA2并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述内胚层细胞的分离群体的一些实施方案中，至少83％的细胞表达SOX17并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述内胚层细胞的分离群体的一些实施方案中，至少83％的细胞表达SOX17，至少77％的细胞表达FoxA2，并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述内胚层细胞的分离群体的一些实施方案中，内胚层细胞具有变成肝细胞、胰细胞、胰祖细胞、肝细胞或肺上皮细胞的能力。另一方面，本专利技术提供包含一个或多个内胚层细胞群体的稳定内胚层细胞库，其中至少83％的细胞表达SOX17，至少77％的细胞表达FoxA2，和/或至少76％的细胞表达CXCR4，其中所述群体维持该表型至少10代。在根据(例如应用于)上述稳定内胚层细胞库的一些实施方案中，内胚层细胞具有变成肝细胞、胰细胞、胰祖细胞、肝细胞或肺上皮细胞的能力。另一方面，本专利技术提供获得内胚层细胞群体的方法，所述方法包括：使干细胞群体与有效量的PI3Kα的选择性抑制剂以及有效量的激活蛋白A接触并在足以获得内胚层细胞群体的条件下培养所述细胞。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，内胚层细胞群体中至少83％的细胞表达SOX17、内胚层细胞群体中至少77％的细胞表达FoxA2，或内胚层细胞群体中至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，至少83％的细胞表达SOX17并且至少77％的细胞表达FoxA2。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，至少77％的细胞表达FoxA2并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，83％的细胞表达SOX17并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，至少83％的细胞表达SOX17，至少77％的细胞表达FoxA2，并且至少76％的细胞表达CXCR4。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，内胚层细胞具有变成肝细胞、胰细胞、胰祖细胞、肝细胞或肺上皮细胞的能力。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，与不曾与PI3Kα的选择性抑制剂和激活蛋白A接触的干细胞相比，内胚层细胞具有更强的生活力和/或增殖。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，干细胞是成人干细胞、胚胎干细胞、或诱导型多能干细胞。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，在合格的基质胶中培养干细胞。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，在悬浮液中培养干细胞。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，PI3Kα的选择性抑制剂是这样的化合物，其是式(I)的稠合嘧啶：其中A代表噻吩或呋喃环；n是1或2；R1是下式的基团：其中m是0或1；R30是H或C1-C6烷基；R4和R5与其附着的N原子一起形成5-或6元饱和含N杂环基团，其包括选自N、S和O的0或1个额外杂原子，其可以稠合到苯环上并且其是未被取代或被取代的；或R4和R5之一是烷基，而另一个是如上定义的5-或6元饱和含N杂环基团或被如上定义的5-或6元饱和含N杂环基团取代的烷基；R2选自：其中R6和R7与其附着的氮原子一起形成未被取代或被取代的吗啉、硫代吗啉、哌啶、哌嗪、氧氮杂环庚烷(oxazepane)或硫氮杂环庚烷(thiazepane)基团；和其中Y是C2–C4亚烷基链，其在链的组成碳原子之间和/或链的一端或两端含有选自O、N和S的1个或2个杂原子，并且其是未被取代或被取代的；并且R3是未被取代或取代的吲唑基团；或其药学上可接受的盐。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，稠合的嘧啶是式(Ia)：其中X是S或O，并且R1、R2、R3和n如上定义。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，稠合的嘧啶是式(Ib)：其中X是S或O，并且R1、R2、R3和n如上定义。在根据(例如应用于)上述任何一种方法的一些实施方案中，化合物选自：2-(1H-吲唑-4-基)-6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶；4-[2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-磺酸二甲基酰胺；{4-[2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-吗啉-4-基-甲酮；4-[2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-甲酸(2-甲氧基-乙基)-甲基-酰胺；{4-[2-(1H-吲唑-4-基)-4-吗啉-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基]-哌嗪-1-基}-N,N-二本文档来自技高网...

【技术保护点】
内胚层细胞的分离群体，其中至少83％的细胞表达SOX17，至少77％的细胞表达FoxA2，或至少76％的细胞表达CXCR4。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.23 US 61/650,7621.获得肝细胞群体的方法，所述方法包括：使干细胞群体与有效量的如下结构式所示的化合物A和有效量的激活蛋白A接触以产生内胚层细胞群体并在足以获得肝细胞群体的条件下培养所述内胚层细胞，包括在含有有效量激活蛋白A并且缺少其他生长因子的培养基中培养所述内胚层细胞的步骤化合物A。2.权利要求1的方法，其中所述其他生长因子选自：FGF2、...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·杜代蒙特，H·乌帕尔，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH