The invention discloses a simple and rapid extraction method for plant DNA, belonging to the field of molecular biology. The method is as follows: cut a few leaves, with fast grinding to extract [20 was added to 50 mM (three Tris xymethylaminomethane), 13 ~ 25 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), pH 8.0], 70 ~ 90 DEG C and heated for 10 to 15 minutes, 1 minutes straight centrifugal. The extract of PCR is obtained for DNA. Compared with the existing DNA extraction method, the method has the advantages of simple, fast, low cost, high stability, safety, no pollution, high throughput operation, wide applicability, etc.. The invention discloses a simple extraction method for plant DNA, which has high applicability and practicability in large-scale genetic mapping, molecular marker assisted breeding, crop variety identification, etc..
【技术实现步骤摘要】
一种植物DNA的简便、快速提取方法
本专利技术公布了一种植物DNA的简便、快速提取方法,属于分子生物学领域。本专利技术极大地简化了植物DNA提取方法,该方法简便、快速、稳定性好,可广泛应用于提取分子鉴定所需的各种植物叶片DNA。
技术介绍
随着水稻、玉米、小麦等主要农作物全基因组测序的完成,这些经济作物的分子标记开发难度明显下降,利用分子标记进行辅助育种、品种鉴定开始被应用到实际生产之中。但分子鉴定和表观鉴定不同,必须通过DNA提取和鉴定等一系列程序,故而进行大样本筛选时,工作量极大,急需适应高通量筛选要求的方法体系,而这其中最需要优化的就是DNA的提取过程。现有DNA提取方法十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法(Doyleetal.ArapidDNAisolationprocedureforsmallquantitiesoffrexhleaftissue.PhytochemBull.1987,19:11-15.),需经过研磨、裂解、氯仿抽提、离心、沉淀和清洗等步骤,整个流程需要两小时,可同时操作二十个样品,平均耗时约六分钟,需要用去污剂CTAB、有毒有害的有机溶剂氯仿及大量的乙醇,其间需将样品转管三次,提取效率低,而且对操作的专业程度、细心程度要求较高,不适合高通量操作;现在应用于高通量DNA提取的DNA提取工作站(余婧等.自动化工作站批量提取烤后烟叶DNA方法的建立与应用.贵州农业科学.2015,5:217-219.),虽然简单便捷,但是需要昂贵的设备、专用试剂,对实验人员的操作要求也比较高;而直接PCR法(Rogersetal.DirectPCRamp ...
【技术保护点】
一种植物DNA的简便、快速提取方法,其特征在于按照下述步骤进行:(1)剪取1~2 cm
【技术特征摘要】
1.一种植物DNA的简便、快速提取方法,其特征在于按照下述步骤进行:(1)剪取1~2cm2植物叶片置于离心管中,用研磨棒快速研磨得到匀浆;(2)向所述植物匀浆中加入提取液,70~90℃加热10~15分钟,再经过10000~13000r/min离心1分钟,即得到可直接用于PCR的DNA提取物。2.根据权利要求1所述的一种植物DNA的简便、快速提取方法,其特征在于所述提取液由Tris溶液和EDTA溶液组成,其中Tris和EDTA的含量分别为20~50mM和13~25mM,pH8.0。3.根据权利要求1所述的一种植物DNA的简便、快速提取方法,其特征在于所述Tris溶液配制方法如下:0.5MTris-HCl(200ml):称取60.55gTris,溶于100ml蒸馏水中,再用浓盐酸调至pH8.0,定容至200ml,高温蒸汽灭菌(121℃,20分钟),低温(4℃)储存。4.根据权利要求1所述的一种植物DNA的简便、快速提取方法,其特征在于所述EDTA溶液配制方法如下:(2)0.5MEDTA(200ml):称取29.2gEDTA溶于100ml蒸馏水中,再用10MNaOH调至pH8.0,定容至200ml,高温蒸汽灭菌...
【专利技术属性】
技术研发人员:何华纲,纪耀勇,李淑梅,朱姗颖,别同德,
申请(专利权)人:江苏大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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