The invention provides a method for high density fermentation of a recombinant interferon gene engineering bacteria, which belongs to the field of fermentation engineering, the specific method is to construct the recombinant gene engineering seed stored in liquid nitrogen, after activation, shake flask, stirring to expand training ventilation in the fermentor, when the cell growth of OD600 between 5 to add inducer then, in the fermentation tank according to the growth curve of bacteria, nutritional needs and PH changes of feeding and stirring speed, ventilation, to stop the growth of the bacteria enter the decline phase tank, after extraction and concentration of coarse pure crude enzyme complex. The invention of dissolved oxygen, through the optimization of fermentation medium, feeding medium and feeding method, ensure the nutritional conditions and the external environment was rapid growth and metabolism needs, greatly improving the tank when bacteria content and yield, so that the cell content from existing 25g/L to 45g/L.
【技术实现步骤摘要】
一种重组干扰素的基因工程菌的高密度发酵方法
本专利技术属于发酵过程
,主要涉及一种重组干扰素的基因工程菌的高密度发酵方法。
技术介绍
干扰素(Interferon,IFN),是由英国科学家Isaacs于1957年利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感病毒干扰现象时首先发现的,是一种细胞因子,具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。其本质是蛋白质,类型可分为α、β、γ、ω等几种。IFN能诱导细胞对病毒感染产生抗性,它通过干扰病毒基因转录或病毒蛋白组分的翻译,从而阻止或限制病毒感染,是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤生物制品。干扰素是一种很时髦的新药。据报道,干扰素越来越神奇了,开始还只是治愈一些流感、肝炎、水痘之类的小毛病,有点小家子气的味道。现在对付许多肿瘤、癌症还有白血病都用上了干扰素,不再是小打小闹。不但如此,由于它的越来越现代的生产方式,基因工程干扰素也已上市多年了。但是,要使干扰素成为药品,进入实际应用当中,必须有足够的量。那么,如何获得大量的干扰素呢?人们首先想到,用病毒刺激老鼠,让它们产生干扰素,再提取出来供人使用,但是这种方法失败了。原因是干扰素的活动场所很专一,老鼠体内产生的干扰素对人不管用。所以最理想的办法是用人自身产生的干扰素。人们最初想到的是,通过血液制取干扰素。可惜,干扰素在血液中的含量实在是太少了,用大量的血液才能制得微量的干扰素,这种生产方式产量低得可怜,自然价格也就十分昂贵。治疗一个病人的费用高达几万美元,一般百姓只能望“药”兴叹,是名副其实的“贵族药”,干扰素无法得到普及、推广。其实,我们生活的环境是被微生物包围着的, ...
【技术保护点】
一种重组干扰素的基因工程菌的高密度发酵方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)种子菌活化:将液氮中保存的工作种子菌于37°水浴解冻,然后KaNa/菌以1∶1000比例接种于15ml离心管中,使用回转恒温调速摇床进行培养;控制转速220rpm/min,培养温度为30°,培养时间为8‑9h;(2)种子菌培养:将活化好的菌种扩大转接至500ml三角摇瓶中,继续使用回转恒温调速摇床进行培养;控制转速220rpm/min,培养温度为30°,培养时间为16‑17h;(3)发酵:将培养好的种子液按1∶1000接入发酵罐进行发酵,发酵培养基是3L,通气量为9L/min,设定培养温度为37°,机械搅拌转速为400rpm/min,控制PH为6.8‑7.2;(4)诱导:在步骤(3)发酵2.5‑4小时之间,紫外分光光度计测定OD600,在4‑6之间,以1∶500加入IPTG 10ml;(5)补料:上罐时补料200ml,诱导后一小时补料500ml,诱导后5小时补料400ml,诱导后21小时补料200ml;(6)消泡剂:不定时查看罐内状态,有泡沫产生加入几滴消泡剂,诱导后5小时加入100ml;(7)生长状态:自诱导 ...
【技术特征摘要】
1.一种重组干扰素的基因工程菌的高密度发酵方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)种子菌活化:将液氮中保存的工作种子菌于37°水浴解冻,然后KaNa/菌以1∶1000比例接种于15ml离心管中,使用回转恒温调速摇床进行培养;控制转速220rpm/min,培养温度为30°,培养时间为8-9h;(2)种子菌培养:将活化好的菌种扩大转接至500ml三角摇瓶中,继续使用回转恒温调速摇床进行培养;控制转速220rpm/min,培养温度为30°,培养时间为16-17h;(3)发酵:将培养好的种子液按1∶1000接入发酵罐进行发酵,发酵培养基是3L,通气量为9L/min,设定培养温度为37°,机械搅拌转速为400rpm/min,控制PH为6.8-7.2;(4)诱导:在步骤(3)发酵2.5-4小时之间,紫外分光光度计测定OD600,在4-6之间,以1∶500加入IPTG10ml;(5)补料:上罐时补料200ml,诱导后一小时补料500ml,诱导后5小时补料400ml,诱导后21小时补料200ml;(6)消泡剂:不定时查看罐内状态,有泡沫产生加入几滴消泡剂,诱导后5小时加入100ml;(7)生长状态:自诱导后每隔一小时取样测定OD600,培养24~27小时,待0D值开始下降便下罐;(8)湿菌收集:8500rpm/min,4°离心15min,弃上清流沉淀,称出湿菌重量,正常大概45g/L左右;(9)破碎菌体:湿菌中加入破碎液,体积为菌重总数的六倍,匀质完全后超声机破碎,工作7s,停5s,55%,工作25min,然后8500rpm/min离心30min,弃上清留沉淀;(10)湿菌中加入洗液,体积为菌重总数的五倍,匀质完全后超声机破碎,工作7s,停5s,55%,工作25min,然后8500rpm/min离心30min,弃上清留沉淀;(11)湿...
【专利技术属性】
技术研发人员:李振义,
申请(专利权)人:北京宝易生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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