一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法，操作如下：将重组人干扰素α2b表达菌体裂解后的菌体裂解液依次用pH不低于7.0的第一透析液和pH低于4的第二透析液进行透析，透析后分离纯化得到天然构象含率高的重组人干扰素α2b。通过采用两步透析法对干扰素α2b进行复性，其中，第二步采用低pH透析的方案，其最初目的在于将进一步降低盐酸胍浓度并更换缓冲体系，同时与去除酸不稳定的杂蛋白。但是通过实验意外发现，这种两步复性法在未降低复性率的同时，可以极大地提高天然构象干扰素的得率，促使SMM及聚集体或中间态向天然构象转化，降低SMM及聚集体含量。

【技术实现步骤摘要】
一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的制备工艺
本专利技术涉及蛋白质药物生产领域，具体涉及一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法。
技术介绍
干扰素（Interferon，IFN）由英国科学家Isaacs和LinderMann于1957年发现，是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质。根据其氨基酸结构、抗原性和细胞来源，可将其分为三类：α干扰素、β干扰素以及γ干扰素。其中α干扰素是应用较为广泛的一类干扰素，临床上主要用于治疗乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性疾病；也用于一些肿瘤化疗药物的联合用药。α干扰素至少有20种以上的不同亚型，其家族成员具有相似的结构特点：氨基酸数目为165或166，氨基酸成分相似，不同亚型间氨基酸序列同源性为70%，第1、29、98/99和138/139位上的半胱氨酸非常保守，形成两个二硫键（C1-C98、C29-C138，或C1-C99、C29-C139），二硫键对干扰素α的正确折叠、维持干扰素的立体结构和生物学活性十分重要。干扰素中两对二硫键的形成是正确折叠的关键。两对二硫键的形成需要不同的氧化还原条件，其中C29-C139容易形成，而Cl-C99则需要更强的氧化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法，操作如下：将重组人干扰素α2b表达菌体裂解后的菌体裂解液依次用pH不低于7.0的第一透析液和pH低于4的第二透析液进行透析，透析后分离纯化得到天然构象含率高的重组人干扰素α2b。

【技术特征摘要】
1.一种提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法，操作如下：将重组人干扰素α2b表达菌体裂解后的菌体裂解液依次用pH为7.0～8.0的第一透析液和pH为2.0～3.6的第二透析液进行透析，透析后分离纯化得到天然构象含率高的重组人干扰素α2b；第一透析液透析的温度为4～10℃、时间为12～24h；第二透析液透析的温度为20～37℃、时间为12～24h。2.如权利要求1所述的提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法，其特征在于：第一透析液为Tris-盐酸、巴比妥钠-盐酸、硼酸-硼砂、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠中一种或几种配制的碱性缓冲液，或者第一透析液为饮用水或纯净水。3.如权利要求1所述的提高重组人干扰素α2b天然构象含率的方法，其特征在于：第二透析液为醋酸-醋酸钠、甘氨酸-盐酸、邻苯二甲酸-盐酸、磷酸氢二钠-柠檬酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋礼华，王荣海，许培，董世建，周乐春，李增礼，沈毅，
申请(专利权)人：安徽安科生物工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：