一种嗜热中性蛋白酶基因、工程菌、酶及其应用制造技术

一种嗜热中性蛋白酶基因、生产该嗜热中性蛋白酶的工程菌JD‑TP(大肠埃希氏菌Escherichia coli)、利用该基因工程菌发酵生产的嗜热中性蛋白酶、自催化剪切后获得的成熟的嗜热中性蛋白酶、该嗜热中性蛋白酶及成熟的嗜热中性蛋白酶在降解蛋白质中的应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术通过PCR从嗜热细菌Thermus thermophilus HB8基因组中扩增得到嗜热中性蛋白酶基因，将其连入表达载体，在大肠杆菌中成功表达；嗜热中性蛋白酶的最适反应温度85℃，在85℃的半衰期为8d，成熟的嗜热中性蛋白酶的最适反应温度为75℃；嗜热中性蛋白酶的最适pH为7.5至10.0，成熟的嗜热中性蛋白酶最适反应pH为6.5；嗜热中性蛋白酶和成熟的嗜热中性蛋白酶有很高的最适反应温度、热稳定性和较宽的反应pH值，具有很好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种嗜热中性蛋白酶基因、工程菌、酶及其应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种嗜热中性蛋白酶基因、生产该嗜热中性蛋白酶的工程菌JD-TP(大肠埃希氏菌Escherichiacoli)、利用该基因工程菌发酵生产的嗜热中性蛋白酶、自催化剪切后获得的成熟的嗜热中性蛋白酶、该嗜热中性蛋白酶及成熟的嗜热中性蛋白酶在降解蛋白质中的应用。
技术介绍
蛋白酶，是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质或多肽的一类水解酶。按活性中心氨基酸残基的种类可分成丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。按反应的pH值可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。蛋白酶在工业中有广泛的应用。在医药领域中，蛋白酶是临床上使用最早、用途最广的药用酶之一，可用于治疗消化不良、消炎、活化血管及高血压的治疗。在食品工业中，蛋白酶可用于肉软化、生产乳酪、啤酒去污及制备蛋白胨等。蛋白酶是加酶洗涤剂添加的主要酶类之一，用于清除蛋白污垢。除了可添加于日用洗涤剂中，蛋白酶还可用于医用多酶洗涤剂中，用于降解手术器械上的血红蛋白等。目前国内市场的医用多酶洗涤剂中添加的蛋白酶主要依靠进口，价格较高，因此开发高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嗜热中性蛋白酶基因，其核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

【技术特征摘要】
1.一种嗜热中性蛋白酶基因，其核苷酸序列是SEQIDNO.1所示的序列。2.一种嗜热中性蛋白酶，其氨基酸序列是SEQIDNO.2所示的第21～434位氨基酸序列。3.一种成熟的嗜热中性蛋白酶，其氨基酸序列是SEQIDNO.3所示的序列。4.一种制备权利要求2所述的嗜热中性蛋白酶的工程菌JD-TP，其于2017年4月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.14072，分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)。5.一种权利要求2所述的嗜热中性蛋白酶的制备方法，其步骤如下：(1)根据通过NCBIGenBank检索得到的来自嗜热细菌的嗜热中性蛋白酶基因TTHA0724设计引物；培养嗜热菌ThermusthermophilusHB8，提取其基因组作为嗜热中性蛋白酶基因的模板PCR扩增目的基因片段，并将其连接到质粒表达载体pET22b上；(2)将嗜热中性蛋白酶基因连接到表达载体pET22b上，构建含有所述嗜热中性蛋白酶基因的重组表达质粒；(3)...

【专利技术属性】
技术研发人员：解桂秋，高仁钧，李杏杏，宗利，霍锐，陈曼利，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22