一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法
本专利技术涉及一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法。
技术介绍
髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）是一群骨髓来源的异质性的细胞，根据其形态和表面标志的差异可以划分为两个亚群：粒细胞样髓源抑制细胞（PMN-MDSCs）和单核样髓源抑制细胞（mo-MDSCs）。其中，mo-MDSCs具有较强的免疫抑制能力1，机体内存在的mo-MDSCs会影响乳腺癌等疾病的进展和恶化。基于此，对于mo-MDSCs的筛选和检测是十分必要的。由于MDSCs细胞群缺乏特异性的识别标记物，因此现有的筛选和检测的方法十分混杂。ALMANDB等人通过多种癌症样本的分析认为Lin−HLA-DR−可以作为标志物来筛选检测MDSCs细胞群2，DIAZ-MONTEROCM等人的工作则认为可以通过Lin−/lowHLA-DR−CD33+CD11b+标志组合进行筛选检测3，还有通过CD15+从粒细胞群中检测MDSCs细胞群的研究工作等等4。但是，现有的MDSCs及mo-MDSCs的检测方法多依赖操作者具有丰富的经验和理论背景基础，未给出mo-MDSCs明确...
【技术保护点】
一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法，其特征、步骤和条件如下：A、所用的抗体(101) 抗体APC anti‑human CD33，简称CD33；(102) 抗体PE anti‑human CD15，简称CD15；(103) 抗体PE‑CF594 anti‑human HLA‑DR，简称HLA‑DR；(104) 抗体 APC‑H7 anti‑human CD14，简称CD14；(105) 抗体PE‑Cy7 anti‑human CD45，简称CD45；(106) 抗体FITC anti‑mouse CD11b，简称CD11b；B、所用溶液的制备(201) PBS溶液...
【技术特征摘要】
1.一种人体外周血中单核样髓源抑制细胞的检测方法，其特征、步骤和条件如下：A、所用的抗体(101)抗体APCanti-humanCD33，简称CD33；(102)抗体PEanti-humanCD15，简称CD15；(103)抗体PE-CF594anti-humanHLA-DR，简称HLA-DR；(104)抗体APC-H7anti-humanCD14，简称CD14；(105)抗体PE-Cy7anti-humanCD45，简称CD45；(106)抗体FITCanti-mouseCD11b，简称CD11b；B、所用溶液的制备(201)PBS溶液的制备：称取NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.44g及KH2PO40.24g溶于1L超纯水中，高压灭菌，得到PBS溶液，4℃冰箱保存；(202)缓冲液的制备：取新生牛血清1mL，加入到9mL的PBS溶液中得到10mL的缓冲液；所述的新生牛是出生6小时内的小牛；(203)红细胞裂解液的制备：称取NH4Cl7.47g、Tris2.06g溶于500mL超纯水中，将溶液调节pH至7.2，继续加入超纯水直至总体积为1L，得到红细胞裂解液，4℃冰箱保存；(204)固定液的制备：量取10mL甲醛溶液加入至1L步骤(201)制备的PBS溶液中，再加入葡萄糖20g，NaNO30.2g，完全溶解，得到固定液，室温备用；(205)抗体混合溶液的制备：在步骤(202)制备的200μL缓冲液中加入4μL的HLA-DR抗体，6μL的CD15抗体，6μL的CD45抗体，6μL的CD33抗体，8μL的CD14抗体和1μL的CD11b抗体，混匀，得到抗体混合溶液，4℃冰箱避光保存；C、流式样本溶液的制备(301)取受试者外周血血液样本10μL加入到1mL红细胞裂解液中，于冰上裂解30min，每10min震荡一次，得到外周血悬液；(302)将步骤(301)得到的外周血悬液用离心机，4℃低温下18...
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