用于检测水解β‑内酰胺环抗微生物剂的酶活性的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测能够水解生物细胞中的β‑内酰胺环抗微生物剂的酶活性的方法，包括：在电化学电池中，使所述生物细胞与包含β‑内酰胺环的所述酶活性的至少一种底物接触，以及利用监测装置检测所述电化学电池中的阻抗变化。本发明专利技术特别适用于检测产生碳青霉烯酶的肠杆菌科(CPE)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测水解β-内酰胺环抗微生物剂的酶活性的方法
本专利技术涉及抗生素抗性检测领域。特别地，本专利技术涉及一种用于检测β-内酰胺酶活性的方法，包括在电化学电池中使疑似含有所述酶活性的样品与至少一种包含β-内酰胺环的底物接触，以及测量电化学电池中的阻抗参数细胞。本专利技术特别用于检测产生产生碳青霉烯酶的肠杆菌科(CPE)。专利技术背景存在对快速检测生物细胞中的β-内酰胺酶活性的需求，特别是用于诊断导致感染的病原体介质或用于检测耐药性病原体的传感器和方法。碳青霉烯目前是用于治疗由产生广谱β-内酰胺酶(ESBL)的多重耐药肠杆菌科菌株引起的严重感染的首选药物。最近在肠杆菌科中出现的碳青霉烯抗性越来越多地被报道，如今成为重大临床关注点。肠杆菌科的碳青霉烯抗性或降低的易感性的最常见机制，包括具有低碳青霉烯水解活性的β-内酰胺酶(头孢菌素酶或ESBL)的存在，以及由于孔蛋白丢失或改变导致的通透性降低。碳青霉烯抗性也越来越多地源自于AmblerA类(主要是KPC)、B类(主要是VIM、IMP、NDM)或D类(主要是OXA-48)碳青霉烯酶的生产。考虑到碳青霉烯类抗性扩散的风险，因此强烈地需要能本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在样品中检测β‑内酰胺酶活性的方法，其特征在于，所述方法是阻抗测定法，包括以下步骤：(i)在至少一个电化学电池中，使所述样品与具有所述β‑内酰胺酶活性的至少一种底物接触；和(ii)通过收集数据点来检测所述电化学电池中的阻抗变化；其中所述至少一种底物包含β‑内酰胺环。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.19 EP 14173161.21.用于在样品中检测β-内酰胺酶活性的方法，其特征在于，所述方法是阻抗测定法，包括以下步骤：(i)在至少一个电化学电池中，使所述样品与具有所述β-内酰胺酶活性的至少一种底物接触；和(ii)通过收集数据点来检测所述电化学电池中的阻抗变化；其中所述至少一种底物包含β-内酰胺环。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)和(ii)同时进行。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-内酰胺酶活性是碳青霉烯酶活性或头孢菌素酶活性。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包含游离酶。5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包含生物细胞，优选为细菌。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细菌是选自肠细菌细胞和非发酵性革兰氏阴性细菌细胞的革兰氏阴性细菌。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述底物选自青霉烷、头孢烯、单环β-内酰胺、碳青霉烯、碳青霉烷、氧青霉烷、青霉烯，碳头孢烯和氧头孢烯，或其组合，优选地，其中所述底物是亚胺培南。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一步骤在至少一种辅因子盐，优选为ZnSO4的存在下进行。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一步骤在至少一种副盐，优选为CaCl2、MnCl2、MgCl2、NaCl或KCl或其任何组合的存在下进行，所述组合例如为CaCl2和MnCl2或者CaCl2和MgCl2。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，还包括裂解所述生物细胞的步骤。11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法不包括裂解所述生物细胞的步骤。12.用于鉴定β-内酰胺酶活性的方法，包括以下步骤：(i)在含有所述β-内酰胺酶活性的至少一种可能抑制剂的至少一个电化学电池中，使疑似具有所述β-内酰胺酶活性的样品与其至少一种底物接触；(ii)在不含所述至少一种可能抑制剂的至少一个电化学电池中，使所述样品与所述至少一种底物接触；(iii)通过收集数据点来检测步骤(i)和(ii)的所述电化学电池中的阻抗变化；和(iv)比较在步骤(iii)中检测到的所述阻抗变化；其中，所述至少一种底物包含β-内酰胺环。13.用于筛选抑制β-内酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：皮埃尔·博盖尔特斯，萨米·尤努斯，
申请(专利权)人：鲁汶天主教大学，那慕尔迪南戈迪讷UCL大学中心医院，
类型：发明
国别省市：比利时,BE