一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法，该方法同时检测双特异性抗体的两个抗原结合位点，根据荧光的比值与标准品的浓度进行四参数拟合，得到标准曲线，根据标准曲线计算待测样品的浓度。该方法能够更有效地筛选出完整的抗体分子和高双特异性结合活性，高表达的细胞株；具有低反应体积的特点，能最大化节约了实验试剂成本；可大范围地推广应用在CLD克隆的高通量筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法及其应用
本专利技术涉及一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法，具体是涉及一种利用改进的均质性时间分辨荧光技术(HTRF)评价和筛选双特异性抗体的生物学活性与滴度检测的方法。
技术介绍
双特异性抗体是一类含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，除了Fc端，两价抗体中的Fab段具有不同特异性。现有技术中，双特异抗体生物学活性(结合活性)主要通过ELISA的方法，但ELISA方法的实验过程中需要反复的清洗，多步骤，比较繁琐耗时，而且不能用一个试验说明两种特异性结合活性。均质性时间分辨荧光技术(HomogeneousTimeResolvedFluorescence，HTRF)能够对荧光共振能量转移进行时间延迟测量，从而能够用于均质化样品的定量检测。FRET技术利用了两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为(能量)供体和(能量)受体，将供体和受体分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将受体和供体拉到足够近的距离，产生能量转移。受体受到激发，发出特定波长的发射光。由于受体分子的发射光来自于能量转移，所以在实验中不需要将未结合与已结合的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法，其特征在于，所述双特异性抗体能与两种抗原特异性结合，所述两种抗原分别是A抗原及B抗原，定义结合A抗原的轻链为Lambda链，结合B抗原的轻链为Kappa链，所述方法包括以下步骤：步骤1.在微孔板中加入细胞上清液或待测物；步骤2.加入供体和受体，其中，供体和受体的加入方式包括以下六种方案：方案一：加入的供体为Anti‑his‑Eu

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体生物学活性与滴度检测方法，其特征在于，所述双特异性抗体能与两种抗原特异性结合，所述两种抗原分别是A抗原及B抗原，定义结合A抗原的轻链为Lambda链，结合B抗原的轻链为Kappa链，所述方法包括以下步骤：步骤1.在微孔板中加入细胞上清液或待测物；步骤2.加入供体和受体，其中，供体和受体的加入方式包括以下六种方案：方案一：加入的供体为Anti-his-Eu3+cryptate，或Anti-his-Tb2+cryptate，或Streptavidin-Eu3+cryptate，或Streptavidin-Tb2+cryptate；加入的受体为Anti-Kappa-d2；还加入A抗原，混匀；方案二：加入的供体为Anti-Lambda-Eu3+cryptate；加入的受体为Anti-his-XL665，或Anti-his-d2，或Streptavidin-d2，或Streptavidin-XL665；还加入B抗原，混匀；方案三：加入的供体为Anti-his-Eu3+cryptate，或Anti-his-Tb2+cryptate，或Streptavidin-Eu3+cryptate，或Streptavidin-Tb2+cryptate；加入的受体为Streptavidin-d2，或Streptavidin-XL665，或Anti-his-XL665，或Anti-his-d2；还加入A抗原和B抗原，混匀；方案四：加入的供体为Anti-his-Eu3+cryptate，或Anti-his-Tb2+cryptate，或Streptavidin-Eu3+cryptate，或Streptavidin-Tb2+cryptate；加入的受体为Anti-(h)Fc-d2；还加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，贾晓青，周伟昌，陈智胜，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，无锡药明康德生物技术股份有限公司，苏州药明康德检测检验有限责任公司，
类型：发明
国别省市：上海,31