牛呼吸道合胞体病毒nano‑PCR检测试剂盒及其制备方法技术

牛呼吸道合胞体病毒nano‑PCR检测试剂盒及其制备方法，涉及牛呼吸道合胞体病毒检测领域，解决了现有牛呼吸道合胞体病毒检测方法灵敏性低、血清学检测假阳性高、成本高的问题。该试剂盒包括MightyAmp酶、2xBuffer Mix缓冲液、金纳米颗粒溶胶、无菌双蒸水、一对特异性引物和一个牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒；一对特异性引物分别为P1(5'‑TATGCTATGTCCCGATTGG‑3')和P2(5'‑ACTGATTTGGCTAGTACACCC‑3')，牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒的序列如序列表中的SEQ ID NO:2所示。该试剂盒灵敏度高、简便、成本低。

【技术实现步骤摘要】
牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及牛呼吸道合胞体病毒检测
，具体涉及一种牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
牛呼吸道合胞体病毒(bovineerspiartorysyneytialviurs，BRSV)是能够引起牛急性呼吸道疾病综合征(Bovinerespiratorydiseasecomplex，BRDC)的重要病原体之一，给养牛业带来巨大的经济损失。在规模化养殖厂2-6月龄犊牛感染发病率很高、死亡率低、易继发细菌感染，死亡率可达到20％以上，犊牛感染愈后再次感染症状不明显，在无临床症状的牛上也可分离到此病毒。本病在牛群中较长期存在，气温骤降或长途运输等应激条件下可引起疫情暴发，通常BRSV在某一牛群中能够较长的时间存在，但具体机制尚不清楚，有待系统研究。目前，针对牛呼吸道合胞体病毒的实验室诊断方法主要有ELISA和RT-PCR方法，由于病毒的滴度很低并且不稳定，导致上述方法灵敏度非常低，常呈假阴性结果，对疫病的诊断及治疗造成误判。在临床应用中，普通PCR较为常用，但其敏感性不显著，且目前PCR反应中普遍本文档来自技高网...

【技术保护点】
牛呼吸道合胞体病毒nano‑PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：MightyAmp酶、2xBuffer Mix缓冲液、金纳米颗粒溶胶、无菌双蒸水、一对特异性引物和一个牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒；所述一对特异性引物分别为：鉴定牛呼吸道合胞体病毒的引物P1和P2：P1：5'‑TATGCTATGTCCCGATTGG‑3'，P2：5'‑ACTGATTTGGCTAGTACACCC‑3'；所述牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒为含有596个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒，其序列如序列表中的SEQ ID NO:2所示。所述含有596个碱基的核苷酸片段构成的pMD18‑T重组质粒能够在大...

【技术特征摘要】
1.牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：MightyAmp酶、2xBufferMix缓冲液、金纳米颗粒溶胶、无菌双蒸水、一对特异性引物和一个牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒；所述一对特异性引物分别为：鉴定牛呼吸道合胞体病毒的引物P1和P2：P1：5'-TATGCTATGTCCCGATTGG-3'，P2：5'-ACTGATTTGGCTAGTACACCC-3'；所述牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒为含有596个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒，其序列如序列表中的SEQIDNO:2所示。所述含有596个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒能够在大肠杆菌DH5α感受态细胞中增殖。2.根据权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述含有596个碱基的核苷酸片段的序列如序列表中的SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为蒸馏水。4.制备权利要求1至3中任意一项所述的牛呼吸道合胞体病毒nano-PCR检测试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制nano-PCR反应液所述反应液包括：MightyAmp酶、2xBufferMix缓冲液、金纳米颗粒溶胶、无菌双蒸水和一对特异性引物；所述一对特异性引物分别为：鉴定牛呼吸道合胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭利，李建友，李家伟，杨艳玲，王超，王建科，程世鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22