一种样本直接加入的EBV DNA一步法测定试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种样本直接加入的EBV DNA一步法测定试剂盒，属于医学分子生物检测技术。试剂盒主要包括(1)预先包装在PCR扩增八联管中的核酸扩增试剂(包括EBV‑PCR反应液和酶混合液)；(2)核酸释放剂；(3)定量校准品和质控品(包括临界阳性质控品、强阳性质控品及阴性质控品)。本发明专利技术将检测试剂预先分装到PCR扩增八联管中，使用时加入核酸释放剂和待测样品进行实时荧光定量PCR。本发明专利技术可检测包括但不限于血清、血浆及尿液等多种样本中的EB病毒载量，且特异性的在EBV‑PCR反应液中加入内标，保证检测结果的真实有效。本发明专利技术操作简单，重复性和稳定性良好，适合在各阶层医疗科研单位使用。

【技术实现步骤摘要】
一种样本直接加入的EBVDNA一步法测定试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及一种样本直接加入的EBVDNA一步法测定试剂盒。
技术介绍
EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)是一种常见的人类疱疹病毒，是传染性单核细胞增多症的主要病原，与多种人类疾病有关。全球约超过90％的人群均感染过EBV。EBV可累计全身多个系统，包括肝、脾、淋巴结、肾、心脏、肺、骨髓及脑等，且临床状多样化。EBV的感染率高，与多种疾病的发生发展密不可分，常见的疾病有肝炎、特发性血小板减少性紫癜、器官移植后感染、造血干细胞移植后感染等。因此，检测EBV的含量对疾病的筛查和辅助诊断具有重要意义。聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)是一种根据生物体内DNA复制性质而设计的体外快速扩增特定DNA序列的技术。PCR反应体系主要由核酸引物、4种dNTPs、DNA聚合酶、模板DNA和PCR反应缓冲液体系组成。自美国Cetus公司人类遗传室KaryMullis及其同事于1985年专利技术聚合酶链式反应(PCR)以来，PCR技术及其衍生技术就被快速开发出来，并在多种核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种样本直接加入的EBV DNA一步法测定试剂盒，其特征在于试剂盒主要包括(1)预先包装在PCR扩增八联管中的核酸扩增试剂(包括EBV‑PCR反应液和酶混合液)；(2)核酸释放剂；(3)定量校准品和质控品(包括临界阳性质控品、强阳性质控品及阴性质控品)。

【技术特征摘要】
1.一种样本直接加入的EBVDNA一步法测定试剂盒，其特征在于试剂盒主要包括(1)预先包装在PCR扩增八联管中的核酸扩增试剂(包括EBV-PCR反应液和酶混合液)；(2)核酸释放剂；(3)定量校准品和质控品(包括临界阳性质控品、强阳性质控品及阴性质控品)。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于将核酸扩增试剂(主要包括EBV-PCR反应液和酶混合液)预先分装到PCR扩增八联管中，使用时加入核酸释放剂和待测样品进行实时荧光定量PCR。3.根据权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于所述的EBV-PCR反应液中包括EBV的引物和探针及特异性内标的引物和探针，序列如下：EBV-F：5’-CCCGTCACGGTGACGTAGTCTGTCT-3’(SEQIDNO：1)EBV-R：5’-CTAGCAAAACCTCTAGGGCA-3’(SEQIDNO：2)EBV-probe：5’-HEX-TAGACACTGCAAAACCTCAGGACCTAC-BHQ1-3’(SEQIDNO：3)IC-F：5’-CAGCGAAGGCCGAAAAGA-3’(SEQIDNO：4)IC-R：5’-CATCCAACGAACTCACCACTGT-3’(SEQIDNO：5)IC-probe：5’-FAM-AGCCATGCCCTTAGTAG-BHQ2-3’(SEQIDNO：6)由上述EB病毒的引物及探针扩增出的DNA序列为：CCCGTCACGGTGACGTAGTCTGTCTTGAGGAGATGTAGACTTGTAGACACTGCAAAACCTCAGGACCTACGCTGCCCTAGAGGTTTTGCTAG(SEQIDNO：7)；由上述内标(IC)的引物及探针扩增出的DNA序列为：CAGCGAAGGCCGAAAAGAGGCTAGCCATGCCCTTAGTAGGACTAGCAAATTGAGGGGGGTAGCAACAGTGGTGAGTCGTTGGATG(SEQIDNO：8)。其中，EBV及内标IC的5’端标...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海滨，
申请(专利权)人：王洋，
类型：发明
国别省市：北京,11