一种燕麦花叶病毒的RT‑PCR检测方法、引物和试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物物种分子诊断领域，公开了一种燕麦花叶病毒的RT‑PCR检测方法、引物和试剂盒。检测方法包括以下步骤：S1、取待测样品提取植物组织总RNA；S2、以总RNA为模板，引入下游引物OMV‑R2进行反转录模板cDNA的合成；S3、将上游引物OMV‑F2、下游引物OMV‑R2置于PCR仪中进行PCR扩增反应；S4、对扩增产物进行电泳分离，鉴定样品中是否含有燕麦花叶病毒。本发明专利技术针对检疫性有害生物燕麦花叶病毒，设计了特异性引物，建立了RT‑PCR快速检测OMV的方法，具有检测方法快速简单、特异性强、灵敏度高、稳定性强等优点，适用于我国各大检验检疫机构针对检疫性有害生物燕麦花叶病毒的鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种燕麦花叶病毒的RT-PCR检测方法、引物和试剂盒
本专利技术涉及生物物种分子诊断领域，具体地说，涉及一种燕麦花叶病毒的RT-PCR检测方法、引物和试剂盒。
技术介绍
燕麦花叶病毒(Oatmosaicvirus，OMV)为马铃薯Y病毒科(Potyviridae)，大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)，为线状，常弯曲，无包膜，具有明显的形态长度，长约600～750nm，宽12～14nm。OMV主要侵染燕麦属植物，引起秋季播种的燕麦发病，可以引起39～60％的减产。OMV的传播主要依赖禾谷多粘菌以持久性方式传播，长距离扩散则随感病植株的无性繁殖材料传播。目前，OMV主要分布于美国、加拿大、新西兰、英国、法国、爱尔兰等国，在我国尚未见发生，2007年农业部862号公文《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》将其列为重要的对外检疫性有害生物。因此，建立该病毒的快速检疫鉴定技术及相关检测标准具有非常重要的经济价值和社会价值。半个世纪来，现代病毒学研究水平不断提高，病毒的检测技术也在不断发展和改进。目前病毒的检测方法主要包括枯斑和指示植物检测法，酶标免疫吸附法(ELISA)，电镜负染检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于燕麦花叶病毒的RT‑PCR检测的引物，包括上游引物OMV‑F2、下游引物OMV‑R2，其序列分别如下：OMV‑F2：5′‑CCTCGGATGGTGCGTCAATA‑3′；OMV‑R2：5′‑AACCCTGTGGTGGGTTGTTT‑3′。

【技术特征摘要】
1.一种用于燕麦花叶病毒的RT-PCR检测的引物，包括上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2，其序列分别如下：OMV-F2：5′-CCTCGGATGGTGCGTCAATA-3′；OMV-R2：5′-AACCCTGTGGTGGGTTGTTT-3′。2.一种燕麦花叶病毒的RT-PCR检测方法，其特征在于，包括使用权利要求1所述引物进行PCR扩增的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取待测样品提取植物组织总RNA；S2、以总RNA为模板，引入下游引物OMV-R2进行反转录模板cDNA的合成；S3、将上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2置于PCR仪中进行PCR扩增反应；S4、对扩增产物进行电泳分离，鉴定样品中是否含有燕麦花叶病毒。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中进行反转录模板cDNA的合成时，其反应体系为：总RNA1μL5×PCR缓冲液2.5μLdNTP0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫东，黄永辉，权永兵，廖力，徐淼锋，迟远丽，
申请(专利权)人：珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44