PEDV、TGEV和PoRV的三重实时RT-PCR引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了PEDV、TGEV和PoRV的三重实时RT‑PCR引物组、试剂盒及方法。本发明专利技术设计了三对特异性引物和探针，彼此之间同源性低，应用本发明专利技术的特异性引物和探针的三重Real‑Time RT‑PCR方法和试剂盒能够实现同时鉴别PEDV、TGEV和PoRV，检测最低浓度为10copies/μL数量级，具有特异性强，扩增效率高和灵敏度高的优点。

Triple real-time RT-PCR primers, kits and methods for PEDV, TGEV and PORV

The invention discloses a triple real-time RT_PCR primer group, a kit and a method for PEDV, TGEV and PORV. The invention designs three pairs of specific primers and probes, which have low homology with each other. Using the triple Real Time RT PCR method and kit of the specific primers and probes of the invention, the simultaneous identification of PEDV, TGEV and PORV can be realized. The detection minimum concentration is 10 copies/mu L, which has the advantages of strong specificity, high amplification efficiency and high sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
PEDV、TGEV和PoRV的三重实时RT-PCR引物组、试剂盒及方法
本专利技术涉及一种RT-PCR检测
，具体涉及PEDV、TGEV和PoRV的三重实时RT-PCR引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissiblegastroenteritisvirus，TGEV)和猪轮状病毒(Porcinerotavirus，PoRV)是传统上引起猪病毒性腹泻的主要病原，其中PEDV与TGEV同为冠状病毒，在电镜下外观相似；PoRV为呼肠孤病毒科成员，是引起人及幼畜腹泻的重要的人畜共患病原。此三种病毒在抗原性上无任何关系，但三个病原感染易感动物后在外部表现上存在诸多共同特征：主要通过粪-口途径传播，各年龄段的猪都可感染，以产房新生哺乳仔猪感染后症状最为严重；新生仔猪死亡率高，随着日龄增长，死亡率逐渐下降；一年四季可发病，在寒冷的冬、春两季发病最为普遍；发病仔猪临床症状非常相似，均表现为腹泻、呕吐、脱水和酸中毒，病理变化均呈现肠壁变薄、绒毛萎缩；三种病原既可单一感染，也可相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测PEDV、TGEV和PoRV的三重Real‑Time RT‑PCR引物组，其特征在于，包括用于检测PEDV的引物对和探针，其序列为：上游引物PEDV85F：5'‑GGGTGTTTTCTGGGTTGCTA‑3'(SEQ ID NO:1)，下游引物PEDV85R：5'‑AATAATTGGCTTTTCAGACGC‑3'(SEQ ID NO:2)，探针PEDV85P：5'‑AGAAGGCGCAAAGACTGAACCCA‑3'(SEQ ID NO:3)；和，用于检测TGEV的引物对和探针，其序列为：上游引物TGEV76F：5'‑CTCACCACCTACTACCACC‑3'(SEQ ID NO...

【技术特征摘要】
1.一种检测PEDV、TGEV和PoRV的三重Real-TimeRT-PCR引物组，其特征在于，包括用于检测PEDV的引物对和探针，其序列为：上游引物PEDV85F：5'-GGGTGTTTTCTGGGTTGCTA-3'(SEQIDNO:1)，下游引物PEDV85R：5'-AATAATTGGCTTTTCAGACGC-3'(SEQIDNO:2)，探针PEDV85P：5'-AGAAGGCGCAAAGACTGAACCCA-3'(SEQIDNO:3)；和，用于检测TGEV的引物对和探针，其序列为：上游引物TGEV76F：5'-CTCACCACCTACTACCACC-3'(SEQIDNO:4)，下游引物TGEV76R：5'-GAACTTATGGTTTAACCTGCACTCA-3'(SEQIDNO:5)，探针TGEV76P：5'-TACCCCAATTGCAAGTCAAACTAGAT-3'(SEQIDNO:6)；和，用于检测PoRV的引物对和探针，其序列为：上游引物PoRV106F：5'-AATGTCGCTGTAATTCAGG-3'(SEQIDNO:7)，下游引物PoRV106R：5'-ATCTCTTCCAATTTATACGCATC-3'(SEQIDNO:8)，探针PoRV106P：5'-ACTCGACATAACAGCTGACCCAAC-3'(SEQIDNO:9)。2.根据权利要求1所述的一种检测PEDV、TGEV和PoRV的三重Real-TimeRT-PCR引物组，其特征在于，所述PEDV85P使用FAM为荧光基团，BHQ1为荧光猝灭基团；所述TGEV76P使用VIC为荧光基团，BHQ1为荧光猝灭基团；所述PoRV106P使用ROX为荧光基团，BHQ2为荧光猝灭基团。3.权利要求1或2所述的三重Real-Ti...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗宝正，李儒曙，苏惠龙，邓湘辉，黄铮，赵福振，廖秀云，
申请(专利权)人：珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44