用于大麦基因表达研究的内参基因及其应用制造技术

用于大麦基因表达研究的内参基因及其应用，其为泛素缀合酶E2、延长因子EF2和/或微管蛋白β‑tubulin 6的基因片段，其中，所述泛素缀合酶E2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述延长因子EF2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述微管蛋白β‑tubulin 6基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，该内参基因可以提高大麦相关基因(如低氮胁迫、抗旱胁迫)表达检测的准确性，表达量高，表达稳定，其Ct值在20‑30间。

【技术实现步骤摘要】
用于大麦基因表达研究的内参基因及其应用
本专利技术属于植物分子生物学领域，具体涉及一种大麦基因表达研究的内参基因及其应用。
技术介绍
荧光定量PCR已经被广泛用于植物基因表达变化的研究，从而来揭示植物相关机理。特别是近年来，全基因组水平的RNA测序技术的发展，利用该技术，可以大规模的发现表达差异基因，进而为相关机理研究服务，对于RNA测序的验证，也基本都是首先使用荧光定量PCR。而荧光定量PCR检测准确性的关键在于有一个或一组非常可靠的内参基因。大麦是世界上第四大禾谷类作物，分布广、适应性好、耐逆性强，而且也是研究禾谷类作物的模式植物。尽管有一些内参基因已经被用于大麦耐低氮定量PCR分析，但是，并没有对其稳定性进行研究，如果直接把一些所谓的内参基因拿来用，在低氮处理的样品中可能并不稳定，因此，用这样的内参基因来研究目标基因的表达情况也未必准确。尽管也有一些内参基因筛选的研究，但是，由于所基于的大麦基因型、实验条件、低氮胁迫程度并不一致，所以，筛选的内参基因也可能表现出不稳定或者不是最稳定、最佳的，因此，有必要对即将开展的大麦耐低氮基因表达研究筛选鉴定出稳定表达的内参基因。
技术实现思路
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【技术保护点】
用于大麦基因表达研究的内参基因，其为泛素缀合酶E2、延长因子EF2和/或微管蛋白β‑tubulin 6的基因片段，其中，所述泛素缀合酶E2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述延长因子EF2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述微管蛋白β‑tubulin 6基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

【技术特征摘要】
1.用于大麦基因表达研究的内参基因，其为泛素缀合酶E2、延长因子EF2和/或微管蛋白β-tubulin6的基因片段，其中，所述泛素缀合酶E2基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述延长因子EF2基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述微管蛋白β-tubulin6基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。2.如权利要求1所述的内参基因用于大麦的耐低氮基因表达研究。3.一种检测大麦耐低氮基因表达的方法，包括以下步骤：1)低氮胁迫处理及取样取培养至三叶一心期的大麦幼苗，置于低氮营养液中，进行低氮胁迫处理，分别取处理0小时、1～6小时和24小时后大麦的茎叶部分作为样品；其中，所述的低氮营养液中，NH4NO3的浓度为0.1～1.0mM；2)提取RNA、反转录合成cDNA提取样品RNA，进行反转录，合成cDNA；3)进行荧光定量PCR反应以步骤2)中获得的cDNA为模板，以扩增权利要求1所述内参基因的引物对和扩增目的基因的引物对，进行定量PCR扩增，扩增产物与荧光染料结合，由荧光强弱反映扩增情况，获得Ct值；4)表达分析利用Ct值和各引物对的扩增效率，根据以下公式得出耐低氮基因的标准化相对表达量NRQ；其中，NRQ即标准化相对表达量；Et为目的基因扩增效率，Er为内参基因扩增效率；Ct目的基因为目的基因Ct值，Ct内参基因为内参基因的Ct值；n为使用的内参基因个数及第n个内参基因。4.根据权利要求3所述检测大麦耐低氮基因表达的方法，其特征在于，所述内参基...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志伟，陆瑞菊，黄剑华，刘成洪，何婷，郭桂梅，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31