磁珠法与测序相结合筛选并鉴定表面含特定抗原肠道菌的方法技术
【技术实现步骤摘要】
磁珠法与测序相结合筛选并鉴定表面含特定抗原肠道菌的方法
本专利技术涉及一种磁珠法与测序相结合筛选并鉴定表面含特定抗原肠道菌种类的方法。
技术介绍
人体肠道中存在1000多种肠道菌，这些肠道菌构成了一个极其复杂的微生态系统。研究发现这个微生态系统与我们的身体健康存在密切关系。虽然近年来对于肠道微生态系统的研究得到了越来越多的重视，但是对于肠道菌表面抗原的研究还处于初始阶段，已知在肠道菌表面存在多种糖抗原和鞭毛蛋白等，研究发现这些肠道菌抗原与肠道菌定殖和肠道稳态有重要联系，因此研究这些肠道菌表面抗原就成为研究的热点，而对于含有这些抗原的肠道菌的筛选就成为了研究肠道菌表面抗原的基础工作，所以有必要将含特定抗原的肠道菌筛选出来，并鉴定其种类。免疫磁珠技术是以高均一性的磁性微球为固相支持物，将免疫配基(如抗体,抗原等)功能基团结合到磁性载体上形成免疫磁性微球，利用特异性的免疫学反应，在磁力作用下发生力学移动，从混合溶液中分离出特异性的靶物质。免疫磁珠技术目前多用于致病菌的分离，例如小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单等...
【技术保护点】
一种磁珠法与测序相结合筛选并鉴定表面含特定抗原肠道菌的方法，包括肠道菌样品的处理和提取、含相应抗体磁珠的制备、利用磁珠分选表面含特定抗原的肠道菌、16S rDNA测序分析判定肠道菌的物种种类，其特征在于：所述肠道菌样品的处理和提取方法是：称取粪便0.5g放置于15ml离心管中，加5ml PBS(磷酸盐缓冲溶液)，漩涡振荡10分钟；200～500rpm离心3分钟，把上清液转移到50ml离心管中，加10ml PBS后10000rpm离心10分钟；弃掉上清液，加2ml PBS悬浮菌体，再加10ml PBS后10000rpm离心10分钟，如此过程重复至离心后上清液无色；用1ml P...
【技术特征摘要】
1.一种磁珠法与测序相结合筛选并鉴定表面含特定抗原肠道菌的方法，包括肠道菌样品的处理和提取、含相应抗体磁珠的制备、利用磁珠分选表面含特定抗原的肠道菌、16SrDNA测序分析判定肠道菌的物种种类，其特征在于：所述肠道菌样品的处理和提取方法是：称取粪便0.5g放置于15ml离心管中，加5mlPBS(磷酸盐缓冲溶液)，漩涡振荡10分钟；200～500rpm离心3分钟，把上清液转移到50ml离心管中，加10mlPBS后10000rpm离心10分钟；弃掉上清液，加2mlPBS悬浮菌体，再加10mlPBS后10000rpm离心10分钟，如此过程重复至离心后上清液无色；用1mlPBS悬浮菌体，每管加入4ml固定液，室温放置12个小时；每管加入20mlPBS，7000rpm离心10分钟，倒掉上清，加入1ml6％封闭液悬浮菌体，再将其吸到1.5ml离心管中，7000rpm离心10分钟，倒掉上清，再用0.6％封闭液洗涤菌体2次，然后用PBS稀释肠道菌，使其OD600＝0.6；所述含相应抗体磁珠的制备方法是：以常规方法或委托北京市科学器材公司将相应抗体连接到磁珠上；所述利用磁珠分选表面含特定抗原的肠道菌：用PBS将含相应抗体的磁珠稀释至1mg/ml，吸取100ul此磁珠溶液，加入到提取到的OD600＝0.6的900ul肠道菌溶液中，共放置于1.5ml离心管中并在混匀器上振荡混匀30分钟，然后快速离心去除溶液层；将含有磁珠的样品溶液放在磁力架装置上，静置30±10分钟至管内液体澄清，轻轻吸取上清液弃掉，避免吸到磁珠，如吸取的上...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，吴其征，张厚程，王鹏，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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