一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法，选择健壮沾冬2号冬枣枝干，截枝处理，在截面上放一圈脱脂棉覆盖形成层，用含有细胞分裂素的药剂润湿脱脂棉，用塑料袋包住截口并系紧，12‑14h后，去除覆盖物，并用湿泥覆盖截口，再覆盖塑料布系紧保湿，进行愈伤组织和丛生芽诱导，诱导植株的倍性鉴定，将纯四倍体枣树苗经过继代、生根培养后，移栽入大田纯四倍体种植园；经筛选后选育出优良的四倍体冬枣苗木。本方法生根培养后可直接移栽入大田，可以快速评价田间再生材料，提高了沾冬2号的纯化效率，加速获得纯四倍体冬枣。

Method for obtaining pure tetraploid winter jujube plant through regeneration and purification of callus, adventitious bud and adventitious bud of stem branch

The invention discloses a section through the branches of adventitious bud regeneration of callus and purification method of chimeras obtained pure tetraploid plants with strong jujube, winter jujube selection No. 2 branches, branch cutting processing, put a circle of cotton in the section covering layer is formed, with the cytokinin containing medicament wetting cotton, wrap with plastic section and fasten, 12 14h after the removal of the covering, and covered with wet section mud, then covered with plastic sheeting to fasten moisture, callus and adventitious bud induction, plantlet ploidy identification, the pure tetraploid jujube seedlings after the subculture, rooting culture, transplanting into the field of pure tetraploid plantations; after screening out the excellent tetraploid jujube seedling breeding. The method can be directly transplanted into the field after rooting and culture, and can rapidly evaluate field regeneration materials, improve the purification efficiency of winter 2, and accelerate the obtaining of pure tetraploid winter jujube.

【技术实现步骤摘要】
一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法
本专利技术涉及植株的繁育方法，具体涉及一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法。
技术介绍
枣原产中国，是中国最具特色和优势的果树树种之一，栽培面积近3000万亩，产量多600万吨，占世界99%。近年来，随着枣产业的发展，栽培品种结构不断调整优化，鲜食枣的栽培越来越受到重视。‘冬枣’是目前我国第一大主栽优良鲜食枣品种，除了山东沾化以外，在河北、山西和陕西等地也都形成了一定的规模。但‘冬枣’果个偏小、栽培管理要求高，进行‘冬枣’遗传改良不仅是‘冬枣’，也是当前鲜食枣产业发展的必然需要。果树多倍体常表现出果实巨大性等优良性状，在果树育种中一直受到高度重视。枣树的多倍性育种开始于20世纪70年代末期，但枣树人工诱变多倍体常常是获得嵌合体，嵌合体纯化仍是枣树人工多倍体诱变中需要面对的重要问题。当前田间大面积种植的‘沾冬2号’是源自‘冬枣’自然变异的倍性嵌合体材料（二、四混倍体），其生长特性不稳定，‘冬枣’果实偏小，枝条中每年会出现相当比例的二倍体‘冬枣’，并且其抗性低，近几年冻害严重，这增加了管理难本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法，其特征在于步骤如下：（1）从5月中旬到8月中旬选择健壮‘沾冬2号’冬枣枝干，进行截枝处理，在截面上放一圈脱脂棉覆盖形成层，用含有细胞分裂素的药剂润湿脱脂棉，用塑料袋包住截口并系紧，12‑14h后，去除覆盖物，并用湿泥覆盖截口，再覆盖塑料布系紧保湿，进行愈伤组织和丛生芽诱导；（2）诱导植株的倍性鉴定：叶形指数，节间作为指标进行形态学上的鉴定，利用常规压片法鉴定诱导植株的染色体数目，利用荧光显微镜观测保卫细胞叶绿体数目，气轧大小及密度，利用流式细胞仪检测诱导植株细胞的DNA含量，区分为纯四倍体枝条或纯四倍体枣树苗；（3）纯四倍体枣...

【技术特征摘要】
1.一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法，其特征在于步骤如下：（1）从5月中旬到8月中旬选择健壮‘沾冬2号’冬枣枝干，进行截枝处理，在截面上放一圈脱脂棉覆盖形成层，用含有细胞分裂素的药剂润湿脱脂棉，用塑料袋包住截口并系紧，12-14h后，去除覆盖物，并用湿泥覆盖截口，再覆盖塑料布系紧保湿，进行愈伤组织和丛生芽诱导；（2）诱导植株的倍性鉴定：叶形指数，节间作为指标进行形态学上的鉴定，利用常规压片法鉴定诱导植株的染色体数目，利用荧光显微镜观测保卫细胞叶绿体数目，气轧大小及密度，利用流式细胞仪检测诱导植株细胞的DNA含量，区分为纯四倍体枝条或纯四倍体枣树苗；（3）纯四倍体枣树苗经过继代、生根培养后，移栽入大田纯四倍体种植园；将步骤（2）中得到的纯四倍体枝条采接穗嫁接到性状稳定纯合四倍体优株或优枝上；（4）进行四倍体植株的盆栽抗性试验、大田抗性试验，选择抗性水平高、性状优良的株系，果实品质的测定，从而选育出优良的四倍体冬枣苗木。2.如权利要求1所述的一种通过枝干截面愈伤不定芽再生纯化嵌合体获得纯四倍体冬枣植株的方法，其特征在于步骤（3）中继代、生根培养步骤为：将鉴定后的纯四倍体枣树苗培养新抽出的...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹魁林，王志爱，
申请(专利权)人：滨州市沾化区冬枣实业总公司，
类型：发明
国别省市：山东,37