结合CSF1R的抗体制造技术

本申请涉及结合CSF1R的抗体。提供了结合CSF1R的抗体。还提供了能够形成结合CSF1R的抗体的抗体重链和轻链。提供了编码针对CSF1R的抗体的多核苷酸。还提供了编码抗体重链和轻链的多核苷酸。提供了使用针对CSF1R的抗体的治疗方法。这些方法包括但不限于治疗类风湿性关节炎、骨质缺失和多发性硬化症的方法。

Antibodies combined with CSF1R

The present application relates to antibodies bound to CSF1R. Antibodies provided in combination with CSF1R are provided. Antibodies, heavy chains and light chains capable of forming antibodies bound to CSF1R are also provided. Polynucleotides for encoding antibodies against CSF1R are provided. Polynucleotides encoding antibodies, heavy chains, and light chains are also provided. Methods of treatment using antibodies directed against CSF1R are provided. These methods include, but are not limited to, methods for the treatment of rheumatoid arthritis, osteopenia, and multiple sclerosis.

【技术实现步骤摘要】
结合CSF1R的抗体本申请是申请日为2011年05月04日、中国申请号为201180022404.5、专利技术名称为“结合CSF1R的抗体”的专利技术申请的分案申请。本申请要求2010年5月4日提交的美国临时申请No.61/331,177的权益，所述美国临时申请在此以引用的方式全部并入本文以用于任何目的。
提供了结合CSF1R的抗体。还提供了能够形成结合CSF1R的抗体的抗体重链和轻链。此外，提供了包含一个或多个特定的互补决定区(CDR)的抗体、重链和轻链。提供了编码针对CSF1R的抗体的多核苷酸。还提供了编码抗体重链或轻链的多核苷酸。提供了使用针对CSF1R的抗体的治疗方法。这些方法包括但不限于治疗类风湿性关节炎、骨质缺失和多发性硬化症的方法。背景集落刺激因子1受体(本文中称为CSF1R；本领域还称为FMS、FIM2、C-FMS和CD115)是一种带有N端胞外结构域(ECD)和具有酪氨酸激酶活性的C端胞内结构域的单程跨膜受体。CSF1或白细胞介素34配体(本文中称为IL34；Lin等,Science320:807-11(2008))与CSF1R的配体结合导致受体二聚化、CSF1R蛋白酪氨酸激酶活性上调、CSF1R酪氨酸残基磷酸化和下游信号传导事件。CSF1和IL34两者都刺激单核细胞存活、增殖以及分化成巨噬细胞。已经发现许多肿瘤细胞分泌CSF1，CSF1通过CSF1R活化单核细胞/巨噬细胞。已经证明肿瘤内的CSF1水平与肿瘤内的肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)水平有关。已经发现高水平的TAM与较差的患者预后有关。此外，已经发现，例如在小鼠的人乳癌异种移植物中，CSF1促进肿瘤生长和发展成转移。参见，例如Paulus等,CancerRes.66:4349-56(2006)。此外，CSF1R似乎在骨转移(bonemetastasis)的溶骨性骨破坏(osteolyticbonedestruction)中作为抑制该破坏的受体酪氨酸激酶活性小分子抑制剂发挥作用。参见，例如Ohno等,Mol.CancerTher.5:2634-43(2006)。还发现CSF1和其受体涉及各种炎症性和自体免疫性疾病。参见，例如Hamilton,Nat.Rev.8:533-44(2008)。例如，已经发现来自患有类风湿性关节炎的关节的滑膜内皮细胞产生CSF1，表明CSF1和其受体在该疾病中具有作用。用抗体阻断CSF1R活性在关节炎小鼠模型中产生积极的临床效果，包含骨和软骨的破坏减少以及巨噬细胞数减少。参见，例如Kitaura等,J.Clin.Invest.115:3418-3427(2005)。成熟分化的骨髓系细胞如巨噬细胞、小神经胶质细胞和破骨细胞促进各种疾病(如类风湿性关节炎、多发性硬化症和骨质缺失疾病)的病理学。分化的骨髓系细胞来源于周边血液单核细胞中间体。CSF1R刺激促进单核细胞从骨髓前体的发育，促进单核细胞增殖和存活以及促进周边血液单核细胞分化成分化的骨髓系细胞如巨噬细胞、小神经胶质细胞和破骨细胞。因此，CSF1R刺激促进分化的骨髓系细胞的增殖、存活、活化和成熟，且在病理学环境中，CSF1R刺激促进分化的骨髓系细胞介导疾病病理学的能力。CSF1R信号传导的其它拮抗剂因此将可用于治疗各种CSF1R相关性疾病，如癌症、炎症性病状和自体免疫性疾病。概述本专利技术人专利技术了一组针对人CSF1R胞外结构域(CSF1RECD)的新抗体(包括人源化抗体)。Fab噬菌体展示库由经过人CSF1RECD-Fc融合蛋白免疫的小鼠脾脏制的。通过淘选该库分离出表达与CSF-1RECD-Fc结合的Fab的1056个噬菌体克隆。当1056个Fab被表达为纯化的蛋白质时，发现668个与CSF1RECD结合。在所述668个结合Fab中，只有121个Fab阻断CSF1和/或IL34与CSF1R的结合。这些Fab中只有33个同时阻断CSF1和IL34与CSF1R的结合。通过测序，所述33个Fab代表19组独特的序列。选择对人CSF1RECD具有低于纳摩尔浓度亲和力的11个Fab来制备嵌合抗体用于进一步研究。基于人和食蟹猴CSF1R结合亲和力、对CSF1和IL34与CSF1R结合的阻断以及对配体诱导的CSF1R磷酸化的抑制，选择三个嵌合抗体用于人源化，并且基于这三个嵌合抗体制备了十六个人源化抗体。十六个人源化抗体中的十四个对人CSF1RECD保持低于纳摩尔浓度的结合亲和力。参见，例如表5。这些人源化抗体同时阻断配体CSF1和IL34与人CSF1R的结合，并且许多还同时阻断CSF1和IL34与食蟹猴CSF1R的结合。参见，例如表4。对于治疗性药物开发，与人和食蟹猴抗原两者的结合具有相似的亲和力的抗体是有利的。选择所述三个嵌合抗体选用于人源化部分是因为它们对人和食蟹猴CSF1RECD具有相似的结合亲和力。然而，人源化之后，嵌合抗体之一(0302)的大部分人源化型式失去了对食蟹猴CSF1RECD的显著结合亲和力，不过它们保持对人CSF1RECD的强结合亲和力。参见，例如表3。0301和0311的人源化型式对人和食蟹猴CSF1RECD都保持相似的强结合，其中对两个物种的结合亲和力差异小于约2倍。基于CSF1R结合亲和力、配体抑制和免疫原性潜力，选择三个人源化抗体用于其它研究。所述三个人源化抗体是来源于人源化之后未显著丧失食蟹猴CSF1R结合亲和力的两个嵌合抗体。这三个人源化抗体抑制人CSF1R的配体诱导的磷酸化，并且还阻断原代人单核细胞中的配体诱导的增殖和存活反应。参见，例如表6和7，以及图10和11。因此，这些抗体可用于治疗涉及例如原代人单核细胞中的配体诱导的增殖和存活反应的疾病。用抗CSF1R抗体阻断CSF1R诱导的反应应该抑制分化的骨髓系细胞的增殖、存活、活化、成熟，并且减弱其介导疾病病理学的能力。此外，用抗CSF1R抗体阻断CSF1R诱导的反应应该抑制周边血液单核细胞中间体分化成分化的骨髓系细胞，降低介导病理学的分化的骨髓系细胞的数目。因此，本文中描述的人源化抗CSF1R抗体可用于通过抑制分化的骨髓系细胞介导疾病病理学的能力来治疗具有显著症状的慢性疾病。所述人源化抗体还可用于通过在疾病的缓解阶段期间抑制从周边血液单核细胞分化而来的新病理学介导性骨髓系细胞的发育，由此降低病理学介导性细胞的数目和其新的形成，从而治疗性质上为复发和缓解型的慢性疾病。在一些实施方案中，提供包含重链和轻链的分离的抗体，其中所述抗体与CSF1R结合。在一些实施方案中，所述重链和/或轻链具有以下结构。在一些实施方案中，重链包含与选自SEQIDNO:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些实施方案中，轻链包含与选自SEQIDNO:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些实施方案中，重链包含与选自SEQIDNO:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列，并且轻链包含与选自SEQIDNO:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体，其包含重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO:27的序列所示的重链(HC)CDR1、SEQ ID NO:28的序列所示的HC CDR2和SEQ ID NO:29的序列所示的HC CDR3，且轻链包含SEQ ID NO:30的序列所示的轻链(LC)CDR1、SEQ ID NO:31的序列所示的LC CDR2和SEQ ID NO:32的序列所示的LC CDR3；其中所述抗体与人CSF1R结合并阻断CSF1和IL34二者与CSF1R结合。

【技术特征摘要】
2010.05.04 US 61/331,1771.一种分离的抗体，其包含重链和轻链，其中重链包含SEQIDNO:27的序列所示的重链(HC)CDR1、SEQIDNO:28的序列所示的HCCDR2和SEQIDNO:29的序列所示的HCCDR3，且轻链包含SEQIDNO:30的序列所示的轻链(LC)CDR1、SEQIDNO:31的序列所示的LCCDR2和SEQIDNO:32的序列所示的LCCDR3；其中所述抗体与人CSF1R结合并阻断CSF1和IL34二者与CSF1R结合。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)SEQIDNO:44的序列所示的重链可变区和SEQIDNO:51的序列所示的轻链可变区；(b)SEQIDNO:44的序列所示的重链可变区和SEQIDNO:52的序列所示的轻链可变区；(c)SEQIDNO:45的序列所示的重链可变区和SEQIDNO:51的序列所示的轻链可变区；或(d)SEQIDNO:45的序列所示的重链可变区和SEQIDNO:52的序列所示的轻链可变区。3.如权利要求2所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)由SEQIDNO:58的序列组成的重链和由SEQIDNO:65的序列组成的轻链；(b)由SEQIDNO:58的序列组成的重链和由SEQIDNO:66的序列组成的轻链；(c)由SEQIDNO:59的序列组成的重链和由SEQIDNO:65的序列组成的轻链；或(d)由SEQIDNO:59的序列组成的重链和由SEQIDNO:66的序列组成的轻链。4.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体(a)与食蟹猴CSF1R结合；(b)阻断配体与CSF1R结合；(c)抑制配体诱导的CSF1R磷酸化；(d)抑制CSF1诱导的CSF1R磷酸化；(e)抑制IL34诱导的CSF1R磷酸化；(f)以小于1nM的亲和力(KD)与人CSF1R结合；和/或(g)抑制CSF1或IL34存在下的单核细胞增殖和/或存活反应。5.如权利要求2所述的抗体，其中所述抗体(a)与食蟹猴CSF1R结合；(b)阻断配体与CSF1R结合；(c)抑制配体诱导的CSF1R磷酸化；(d)抑制CSF1诱导的CSF1R磷酸化；(e)抑制IL34诱导的CSF1R磷酸化；(f)以小于1nM的亲和力(KD)与人CSF1R结合；和/或(g)抑制CSF1或IL34存在下的单核细胞增殖和/或存活反应。6.如权利要求3所述的抗体，其中所述抗体(a)与食蟹猴CSF1R结合；(b)阻断配体与CSF1R结合；(c)抑制配体诱导的CSF1R磷酸化；(d)抑制CSF1诱导的CSF1R磷酸化；(e)抑制IL34诱导的CSF1R磷酸化；(f)以小于1nM的亲和力(KD)与人CSF1R结合；和/或(g)抑制CSF1或IL34存在下的单核细胞增殖和/或存活反应。7.如权利要求1-6任一项所述的抗体，其中所述抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·王，M·瓦斯克兹，
申请(专利权)人：戊瑞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US