一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，包括以下步骤：(一)脆性胚性愈伤组织诱导；(二)脆性胚性愈伤组织再生。该木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法具有脆性胚性愈伤组织诱导产生时间短，产生率高的优点，且木薯优选为华南8号和华南6号等常规栽培品种。

Method for culturing brittle embryogenic callus of Cassava

The invention discloses a method for culturing a brittle embryogenic callus of cassava, comprising the following steps: (1) induction of a brittle embryogenic callus; (two) regeneration of a brittle embryogenic callus. The method for culturing fragile embryogenic calli of cassava has the advantages of short induction time and high production rate of brittle embryogenic callus, and the cassava is preferred to be a conventional cultivar of Southern China 8 and Southern China 6.

【技术实现步骤摘要】
一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法
本专利技术属于脆性胚性愈伤组织培养
，具体涉及一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法。
技术介绍
木薯(ManihotesculentaCrantz)是大戟科木薯属植物，是一种重要的粮食与能源植物。人们通常采用传统育种方式来改良其品质，但是有些性状如抗病虫、降低氰化物含量等只有通过基因工程手段才能改良。而一个有效的再生体系是基因工程手段成功实施的先决条件。脆性胚性愈伤组织是一种直径≤1mm的组织，在液体培养过程中易分散，增殖快，绝大多数细胞具有全能性，由此可以获得的高质量的胚性悬浮培养物。因为其可以增大外源基因插入整合产生大量转化细胞的几率，所以是一种非常理想的基因转化目标组织。脆性胚性愈伤组织已被用来通过基因枪法，电转化法和农杆菌介导法获得转基因木薯植株。木薯胚性愈伤组织的诱导比较复杂。脆性胚性组织的诱导受基因型影响很大，而且发生频率很低，且诱导时间长。因此建立一种快速高效的木薯脆性胚性愈伤组织的诱导培养方法，对木薯转基因育种意义重大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，该方法快速高效。本专利技术的上述目的是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是包括以下步骤：(一)脆性胚性愈伤组织诱导(1.1)选取木薯体胚块，经预处理后，置于脆性胚性愈伤组织诱导培养基上黑暗培养，诱导产生初生脆性胚性愈伤组织；(1.2)将初生脆性胚性愈伤组织转接到新鲜的脆性胚性愈伤组织诱导培养基上增殖扩大培养，获得脆性胚性愈伤组织；(二)脆性胚性愈伤组织再生(2.1)将脆性胚性愈伤组织收集到液体体胚诱导培养基中，震荡培养后，去除多余的松软非胚性组织，然后倒掉液体体胚诱导培养基，再将脆性胚性愈伤组织置于体胚诱导培养基中继续诱导培养产生体胚；(2.2)将体胚转接到新鲜体胚诱导培养基上，黑暗条件下对体胚进行扩繁培养，获得扩繁培养后...

【技术特征摘要】
1.一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是包括以下步骤：(一)脆性胚性愈伤组织诱导(1.1)选取木薯体胚块，经预处理后，置于脆性胚性愈伤组织诱导培养基上黑暗培养，诱导产生初生脆性胚性愈伤组织；(1.2)将初生脆性胚性愈伤组织转接到新鲜的脆性胚性愈伤组织诱导培养基上增殖扩大培养，获得脆性胚性愈伤组织；(二)脆性胚性愈伤组织再生(2.1)将脆性胚性愈伤组织收集到液体体胚诱导培养基中，震荡培养后，去除多余的松软非胚性组织，然后倒掉液体体胚诱导培养基，再将脆性胚性愈伤组织置于体胚诱导培养基中继续诱导培养产生体胚；(2.2)将体胚转接到新鲜体胚诱导培养基上，黑暗条件下对体胚进行扩繁培养，获得扩繁培养后体胚；(2.3)将扩繁培养后体胚转接到体胚成熟培养基上培养，促进体胚成熟为绿色子叶型胚；(2.4)将绿色子叶型胚转接到体胚萌发培养基中培养，促进绿色子叶型胚萌发，进而再生成苗，获得木薯植株。2.根据权利要求1所述的木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是：步骤(1.1)中所述预处理包括将木薯体胚块置于含有甘露醇的容器中，用透气封口膜封口，然后将容器置于真空泵中，调节气压下降至0.08Mpa时开始计时，15～20min后取出，在灭菌过的工作台中，将上述处理过的木薯体胚块取出，用灭菌滤纸吸干水分后，放置在脆性胚性愈伤组织诱导培养基上黑暗培养20～30天，诱导产生初生脆性胚性愈伤组织，其中甘露醇的浓度为250～300mmol/L。3.根据权利要求1所述的木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是：步骤(1.1)～(1.2)中脆性胚性愈伤组织诱导培养基包括以下成分：GD、2,4-D、蔗糖和琼脂粉，其中1LGD中加入2,4-D8～12mg、蔗糖15～20g、琼脂粉10～15g。4.根据权利要求1所述的木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是：步骤(1.2)中将初生脆性胚性愈伤组织转接到脆性胚性愈伤组织诱导培养基上增殖扩大培养，2～3周继代一次可获得大量脆性胚...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞梅，郭建春，姚远，刘姣，段瑞军，符少萍，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46