用于诊断活动性结核的方法和试剂盒技术

本发明专利技术属于分子生物学、免疫学以及疾病诊断领域。具体而言，本发明专利技术涉及，用于诊断受试者是否患有活动性结核的方法，用于判断一种疗法对活动性结核的治疗效果的方法，以及用于筛选能够治疗活动性结核的候选药物的方法。本发明专利技术还涉及含有特异性刺激原和检测IL‑6水平的试剂的试剂盒。

Methods and kits for the diagnosis of active tuberculosis

The present invention belongs to the field of molecular biology, immunology and disease diagnosis. Specifically, the invention relates to a method for the diagnosis of subjects suffering from active tuberculosis, a method for judging the efficacy of a therapy on the treatment of active tuberculosis, as well as for the screening method to drug candidate for the treatment of active tuberculosis. The invention also relates to a kit containing specific stimuli and the detection of IL 6 levels.

【技术实现步骤摘要】
用于诊断活动性结核的方法和试剂盒
本专利技术属于分子生物学、免疫学以及疾病诊断领域。具体而言，本专利技术涉及，用于诊断受试者是否患有活动性结核的方法，用于判断一种疗法对活动性结核的治疗效果的方法，以及用于筛选能够治疗活动性结核的候选药物的方法。本专利技术还涉及含有特异性刺激原和检测IL-6水平的试剂的试剂盒。
技术介绍
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，是一种非常严重的全球性健康问题，全球每年新增结核病人约有900万，因结核病死亡的人数高达170万。此外，据估计全球约有1/3人口为结核分枝杆菌潜伏感染者，这类人群为潜在的活动性结核病人来源。控制结核病，首要是发现并治愈传染性结核病病人。X射线应用于临床检测后，为发现结核病病人提供了一种简便、易行、快速、敏感性高的方法；然而，X射线检测设备要求高，特异性低，过诊、漏诊、误诊率较高；此外X射线检测只能发现肺部可疑阴影，达不到检测出传染性病人的目的，因此1974年WHO第9次结核病专家委员会报告明确指出采取团体胸部X射线主动发现病人的方法，不仅在发达国家，在发展中国家都是不可取的，必须废止。痰涂片检测可以检出传染性肺结核病病人，特异性高，设备要求简单，费用低，技术要求不高。但也存在取痰不易的问题，不少患者干咳无痰，或微量排菌不易检出。广泛应用的痰涂片检测灵敏度在34–80％之间，虽然痰培养检测灵敏度高于痰涂片，但是耗时长，对诊断实验室的要求高，在很多高结核负担国家无法满足该方法对实验室条件的要求。免疫检测技术在结核诊断上可能有很大的应用价值，尤其在实现快速诊断和床边诊断以后。IFN-γ释放实验(IGRAs)是一种广泛应用的TB免疫诊断方法，在结核分支杆菌感染检测上已经被证明具有应用价值，检测效果比TST(tuberculinskintest)有显著的优势。但是，IGRAs和TST方法均不能区分结核潜伏性感染(LTBI)和活动性结核；在高结核负担国家因有很高比例潜伏感染人群，IGRAs的应用价值受到限制，其仍然只能作为一种辅助诊断手段。目前临床普遍采用的结核诊断仍然主要依赖临床症状、影像学诊断和病原学诊断。如果能够在结核发病早期准确快速确诊并进行适当的化疗，对减轻结核病人的危害及结核传染的控制将有重要价值。因此，本领域需要简单、方便、快速且具有高准确性和特异性的活动性结核诊断方法。
技术实现思路
在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、生物化学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“RV0183”或“RV0183蛋白”是指，天然存在于结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)中的一种蛋白，属于单酰基甘油脂肪酶(monoacylglycerollipase，MAGL)或溶血磷脂酶(lysophospholipase)。RV0183蛋白的序列是本领域公知的，并且可参见各种公共数据库(例如NCBI数据库登录号CP009480.1,AIR12906.1,CCP42909.1,NP_214697.2，或WP_003401112.1)。在本专利技术中，当提及RV0183的氨基酸序列时，参照SEQIDNO：1所示的序列来进行描述。然而，本领域技术人员理解，结核分枝杆菌既包括标准株H37Rv，也可包括多种分离株，并且各种分离株的RV0183蛋白的氨基酸序列之间可能存在着差异。进一步，本领域技术人员理解，尽管可能存在着序列差异，但是结核分枝杆菌的不同分离株的RV0183蛋白在氨基酸序列上具有极高的同一性，并且具有实质上相同的生物学功能。同时，本领域技术人员理解，在RV0183蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本专利技术中，术语“RV0183”不仅包括SEQIDNO:1所示的蛋白，而且应包括各种结核分枝杆菌分离株的RV0183蛋白(例如BAL64025.1,AOE34503.1,EGE52872.1，或CDM08372.1所示的RV0183蛋白)，以及其天然或人工的变体。并且，当描述RV0183蛋白的序列片段时，其不仅包括SEQIDNO：1的序列片段，还包括各种结核分枝杆菌分离株的RV0183蛋白中的相应序列片段，以及SEQIDNO：1的天然或人工变体中的相应序列片段。因此，表述“RV0183蛋白的第1-20位氨基酸残基”包括，SEQIDNO：1的第1-20位氨基酸残基，以及各种结核分枝杆菌分离株的RV0183蛋白中的相应片段，以及RV0183蛋白的变体(天然或人工)中的相应片段。在本专利技术中，表述“相应片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。在本专利技术中，术语“RV0183”或“RV0183蛋白”不受任何特定的合成蛋白的方法限制，可通过本领域技术人员已知的常规技术产生，例如DNA重组技术或化学合成技术。如本文中所使用的，术语“PlcD”或“PlcD蛋白”是指，天然存在于结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)中的一种蛋白，属于磷脂酶C(phospholipaseC)家族。PlcD蛋白的序列是本领域公知的，参见例如AndersenST,etal.，Nature,1998.393(6685):537-44(其通过引用并入本文)，以及NCBI数据库登录号CCP44521.1。在本专利技术中，当提及PlcD的氨基酸序列时，参照SEQIDNO：3所示的序列来进行描述。然而，本领域技术人员理解，结核分枝杆菌既包括标准株H37Rv，也可包括多种分离株，并且各种分离株的PlcD蛋白的氨基酸序列之间可能存在着差异。进一步，本领域技术人员理解，尽管可能存在着序列差异，但是结核分枝杆菌的不同分离株的PlcD蛋白在氨基酸序列上具有极高的同一性，并且具有实质上相同的生物学功能。同时，本领域技术人员理解，在PlcD蛋白的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响其生物学功能。因此，在本专利技术中，术语“PlcD”不仅包括SEQIDNO:3所示的蛋白，而且应包括各种结核分枝杆菌分离株的PlcD蛋白，以及其天然或人工的变体。并且，当描述PlcD蛋白的序列片段时，其不仅包括SEQIDNO：3的序列片段，还包括各种结核分枝杆菌分离株的PlcD蛋白中的相应序列片段，以及SEQIDNO：3的天然或人工变体中的相应序列片段。在本专利技术中，表述“相应序列片段”是指，当对序列进行最优比对时，即当序列进行比对以获得最高百分数同一性时，进行比较的序列中位于等同位置的片段。在本专利技术中，术语“PlcD”或“PlcD蛋白”不受任何特定的合成蛋白的方法限制，可通过本领域技术人员已知的常规技术产生，例如DNA重组技术或化学合成技术。如本文中所使用的，表述“RV0183或PlcD的抗原性片段”是指，RV0183或PlcD蛋白经过截短后得到的氨基酸序列片段(即，多肽)，该片段具有与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，其包括RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种，和能够检测IL‑6的试剂；优选地，所述RV0183具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；和/或，所述PlcD具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；优选地，所述试剂盒包含RV0183和/或PlcD；优选地，所述试剂盒包含一种或多种RV0183的抗原性片段；更优选地，所述抗原性片段具有选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NO:5‑25；优选地，所述试剂盒包含分别具有如SEQ ID NO:13、14和19所示的氨基酸序列的抗原性片段；任选地，所述试剂盒还包括下列抗原性片段的组合：1)分别具有如SEQ ID NO:5、11、22所示的氨基酸序列的抗原性片段，2)分别具有如SEQ ID NO:7‑8、11‑12所示的氨基酸序列的抗原性片段，3)分别具有如SEQ ID NO:5‑7、11‑12、22、24所示的氨基酸序列的抗原性片段，或4)分别具有如SEQ ID NO:5、8‑10、12、15、22‑25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述试剂盒包含分别具有如SEQ ID NO:5‑25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述能够检测IL‑6的试剂为能够和IL‑6特异性结合的物质，例如抗体、靶向多肽或核酸适体；任选地，所述试剂还带有可检测的标记；优选地，所述试剂通过免疫学检测来测定所述样品中IL‑6的水平；更优选地，所述免疫学检测选自ELISA检测、Elispot检测、Western印迹或表面等离子共振法；优选地，所述试剂包括抗IL‑6的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述试剂通过ELISA来测定IL‑6的水平；优选地，所述抗IL‑6的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；优选地，所述抗IL‑6的抗体为IgG抗体或IgM抗体；优选地，所述试剂盒还包含一种或多种选自1)‑5)的装置或试剂：1)采血装置，例如无热原真空采血管；2)抗凝剂，例如肝素；3)培养液或培养基；4)非特异性刺激原，例如植物凝集素或刀豆球蛋白A；5)稀释液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水；优选地，所述试剂盒用于诊断活动性结核、判断一种疗法对活动性结核的治疗效果或筛选能够治疗活动性结核的候选药物。...

【技术特征摘要】
2016.01.20 CN 20161003447661.一种试剂盒，其包括RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种，和能够检测IL-6的试剂；优选地，所述RV0183具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；和/或，所述PlcD具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；优选地，所述试剂盒包含RV0183和/或PlcD；优选地，所述试剂盒包含一种或多种RV0183的抗原性片段；更优选地，所述抗原性片段具有选自下列的氨基酸序列：SEQIDNO:5-25；优选地，所述试剂盒包含分别具有如SEQIDNO:13、14和19所示的氨基酸序列的抗原性片段；任选地，所述试剂盒还包括下列抗原性片段的组合：1)分别具有如SEQIDNO:5、11、22所示的氨基酸序列的抗原性片段，2)分别具有如SEQIDNO:7-8、11-12所示的氨基酸序列的抗原性片段，3)分别具有如SEQIDNO:5-7、11-12、22、24所示的氨基酸序列的抗原性片段，或4)分别具有如SEQIDNO:5、8-10、12、15、22-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述试剂盒包含分别具有如SEQIDNO:5-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述能够检测IL-6的试剂为能够和IL-6特异性结合的物质，例如抗体、靶向多肽或核酸适体；任选地，所述试剂还带有可检测的标记；优选地，所述试剂通过免疫学检测来测定所述样品中IL-6的水平；更优选地，所述免疫学检测选自ELISA检测、Elispot检测、Western印迹或表面等离子共振法；优选地，所述试剂包括抗IL-6的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述试剂通过ELISA来测定IL-6的水平；优选地，所述抗IL-6的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；优选地，所述抗IL-6的抗体为IgG抗体或IgM抗体；优选地，所述试剂盒还包含一种或多种选自1)-5)的装置或试剂：1)采血装置，例如无热原真空采血管；2)抗凝剂，例如肝素；3)培养液或培养基；4)非特异性刺激原，例如植物凝集素或刀豆球蛋白A；5)稀释液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水；优选地，所述试剂盒用于诊断活动性结核、判断一种疗法对活动性结核的治疗效果或筛选能够治疗活动性结核的候选药物。2.特异性刺激原在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断活动性结核；其中，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或多种；优选地，所述RV0183具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；和/或，所述PlcD具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；优选地，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其组合；优选地，所述特异性刺激原选自一种或多种RV0183的抗原性片段；更优选地，所述抗原性片段具有选自下列的氨基酸序列：SEQIDNO:5-25；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:13、14和19所示的氨基酸序列的抗原性片段；任选地，所述特异性刺激原还包括下列抗原性片段的组合：1)分别具有如SEQIDNO:5、11、22所示的氨基酸序列的抗原性片段，2)分别具有如SEQIDNO:7-8、11-12所示的氨基酸序列的抗原性片段，3)分别具有如SEQIDNO:5-7、11-12、22、24所示的氨基酸序列的抗原性片段，或4)分别具有如SEQIDNO:5、8-10、12、15、22-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:5-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述试剂盒包括能够检测IL-6的试剂，例如能够和IL-6特异性结合的抗体、靶向多肽或核酸适体；任选地，所述试剂还带有可检测的标记；优选地，所述试剂通过免疫学检测来测定所述样品中IL-6的水平；更优选地，所述免疫学检测选自ELISA检测、Elispot检测、Western印迹或表面等离子共振法；优选地，所述试剂包括抗IL-6的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述试剂通过ELISA来测定IL-6的水平；优选地，所述抗IL-6的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；优选地，所述抗IL-6的抗体为IgG抗体或IgM抗体；优选地，所述试剂盒还包含一种或多种选自1)-5)的装置或试剂：1)采血装置，例如无热原真空采血管；2)抗凝剂，例如肝素；3)培养液或培养基；4)非特异性刺激原，例如植物凝集素或刀豆球蛋白A；5)稀释液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水；优选地，所述试剂盒通过包括下述步骤的方法来诊断所述受试者是否患有活动性结核：(1)使用特异性刺激原刺激来自所述受试者的至少一份样品作为待测样品，同时将来自所述受试者的未经刺激的样品作为阴性对照样品，其中所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种；(2)使用能够检测IL-6的试剂测定步骤(1)中各个样品的IL-6水平，并计算所述待测样品与阴性对照样品的IL-6水平的差值；和(3)将所述差值与参考值进行比较，或对所述差值进行统计学分析以获得统计分析值，并将该统计分析值与参考值进行比较，并判断所述受试者是否患有活动性结核；其中，所述样品包含外周血单个核细胞(PBMC)，例如全血(例如抗凝全血)、外周血单个核细胞(PBMC)、或外周血白膜层；优选地，在步骤(3)中，利用选自下列的统计模型对所述差值进行统计分析：线性组合、线性回归模型、Logistic回归模型、线性判别分析(LDA)模型、最近邻模型或微阵列预测分析(PAM)；更优选地，在步骤(3)中，使用Logistic回归模型对所述差值进行统计分析；优选地，在步骤(1)中，使用至少两种特异性刺激原共同或分别刺激一份或多份来自所述受试者的样品作为待测样品，其中所述特异性刺激原各自独立地选自RV0183、PlcD或其抗原性片段；更优选地，在步骤(1)中，使用RV0183、和PlcD分别刺激至少两份样品作为待测样品；或，在步骤(1)中，使用一种或多种RV0183的抗原性片段共同刺激至少一份样品作为待测样品；优选地，步骤(1)还包括使用非特异性刺激原刺激至少一份样品作为阳性对照样品；更优选地，所述非特异性刺激原包括植物凝集素或刀豆球蛋白A；优选地，在步骤(1)之前，所述方法还包括下列步骤中的一项或多项：(a)使用采血装置从所述受试者获得样品；(b)使用抗凝剂处理采血装置或来自所述受试者的样品；(c)使用培养液或培养基处理来自所述受试者的样品；和，(d)使用稀释液稀释来自所述受试者的样品。3.特异性刺激原在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于判断一种疗法对活动性结核的治疗效果；其中，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或多种；优选地，所述RV0183具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；和/或，所述PlcD具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；优选地，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其组合；优选地，所述特异性刺激原选自一种或多种RV0183的抗原性片段；更优选地，所述抗原性片段具有选自下列的氨基酸序列：SEQIDNO:5-25；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:13、14和19所示的氨基酸序列的抗原性片段；任选地，所述特异性刺激原还包括下列抗原性片段的组合：1)分别具有如SEQIDNO:5、11、22所示的氨基酸序列的抗原性片段，2)分别具有如SEQIDNO:7-8、11-12所示的氨基酸序列的抗原性片段，3)分别具有如SEQIDNO:5-7、11-12、22、24所示的氨基酸序列的抗原性片段，或4)分别具有如SEQIDNO:5、8-10、12、15、22-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:5-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述试剂盒包括能够检测IL-6的试剂，例如能够和IL-6特异性结合的抗体、靶向多肽或核酸适体；任选地，所述试剂还带有可检测的标记；优选地，所述试剂通过免疫学检测来测定所述样品中IL-6的水平；更优选地，所述免疫学检测选自ELISA检测、Elispot检测、Western印迹或表面等离子共振法；优选地，所述试剂包括抗IL-6的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述试剂通过ELISA来测定IL-6的水平；优选地，所述抗IL-6的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；优选地，所述抗IL-6的抗体为IgG抗体或IgM抗体；优选地，所述试剂盒还包含一种或多种选自1)-5)的装置或试剂：1)采血装置，例如无热原真空采血管；2)抗凝剂，例如肝素；3)培养液或培养基；4)非特异性刺激原，例如植物凝集素或刀豆球蛋白A；5)稀释液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水；优选地，所述试剂盒通过包括下述步骤的方法来判断一种疗法对活动性结核的治疗效果：(1)在对受试者进行所述疗法之前，获得来自所述受试者的至少两份样品，作为治疗前样品；(2)使用特异性刺激原刺激来自所述受试者的至少一份治疗前样品作为待测样品，同时将来自所述受试者的未经刺激的至少一份治疗前样品作为阴性对照样品，其中所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种；(3)使用能够检测IL-6的试剂测定步骤(2)中各个样品的IL-6水平，并计算所述待测样品与阴性对照样品的IL-6水平的差值，作为第一差值；(4)对所述受试者进行所述疗法；(5)在对所述受试者进行所述疗法之后，获得来自所述受试者的至少两份样品，作为治疗后样品；(6)使用特异性刺激原刺激来自所述受试者的至少一份治疗后样品作为待测样品，同时将来自所述受试者的未经刺激的至少一份治疗后样品作为阴性对照样品，其中所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种；(7)使用能够检测IL-6的试剂测定步骤(6)中各个样品的IL-6水平，并计算所述待测样品与阴性对照样品的IL-6水平的差值，作为第二差值；和(8)将所述第二差值与第一差值进行比较，或对所述第一差值和第二差值分别进行统计学分析以获得第一差值的统计分析值和第二差值的统计分析值，并将所述第二差值的统计分析值与所述第一差值的统计分析值进行比较，并判断所述疗法对活动性结核的治疗是否有效；其中，所述样品包含外周血单个核细胞(PBMC)，例如全血(例如抗凝全血)、外周血单个核细胞(PBMC)、或外周血白膜层；优选地，在步骤(8)中，利用选自下列的统计模型对所述所述第一差值和第二差值进行统计分析：线性组合、线性回归模型、Logistic回归模型、线性判别分析(LDA)模型、最近邻模型或微阵列预测分析(PAM)；更优选地，在步骤(8)中，使用Logistic回归模型对所述第一差值和第二差值进行统计分析；优选地，在步骤(2)和(6)中，对治疗前样品和治疗后样品进行相同的处理；优选地，在步骤(2)和(6)中，使用至少两种特异性刺激原共同或分别刺激一份或多份来自所述受试者的样品作为待测样品，其中所述特异性刺激原各自独立地选自RV0183、PlcD或其抗原性片段；更优选地，在步骤(2)和(6)中，使用RV0183、和PlcD分别刺激至少两份样品作为待测样品；或，在步骤(2)和(6)中，使用一种或多种RV0183的抗原性片段共同刺激至少一份样品作为待测样品；优选地，所述受试者为哺乳动物，例如人；优选地，所述疗法包括对受试者施用抗结核药物，例如异烟肼、利福平、链霉素、吡嗪酰胺、乙胺丁醇或其任何组合；优选地，步骤(2)和(6)还包括使用非特异性刺激原刺激至少一份样品作为阳性对照样品；更优选地，所述非特异性刺激原包括植物凝集素或刀豆球蛋白A；优选地，在步骤(1)中，使用采血装置获得来自所述受试者的治疗前样品；优选地，在步骤(5)中，使用采血装置获得来自所述受试者的治疗后样品；优选地，在进行步骤(1)之前，所述方法还包括下列步骤中的一项或多项：(a)使用抗凝剂处理采血装置或来自所述受试者的样品；(b)使用培养液或培养基处理来自所述受试者的样品；和，(c)使用稀释液稀释来自所述受试者的样品；优选地，在进行步骤(5)之前，所述方法还包括下列步骤中的一项或多项：(a)使用抗凝剂处理采血装置或来自所述受试者的样品；(b)使用培养液或培养基处理来自所述受试者的样品；和，(c)使用稀释液稀释来自所述受试者的样品。4.特异性刺激原在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于筛选能够治疗活动性结核的候选药物；其中，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或多种；优选地，所述RV0183具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；和/或，所述PlcD具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；优选地，所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其组合；优选地，所述特异性刺激原选自一种或多种RV0183的抗原性片段；更优选地，所述抗原性片段具有选自下列的氨基酸序列：SEQIDNO:5-25；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:13、14和19所示的氨基酸序列的抗原性片段；任选地，所述特异性刺激原还包括下列抗原性片段的组合：1)分别具有如SEQIDNO:5、11、22所示的氨基酸序列的抗原性片段，2)分别具有如SEQIDNO:7-8、11-12所示的氨基酸序列的抗原性片段，3)分别具有如SEQIDNO:5-7、11-12、22、24所示的氨基酸序列的抗原性片段，或4)分别具有如SEQIDNO:5、8-10、12、15、22-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述特异性刺激原包含分别具有如SEQIDNO:5-25所示的氨基酸序列的抗原性片段；优选地，所述试剂盒包括能够检测IL-6的试剂，例如能够和IL-6特异性结合的抗体、靶向多肽或核酸适体；任选地，所述试剂还带有可检测的标记；优选地，所述试剂通过免疫学检测来测定所述样品中IL-6的水平；更优选地，所述免疫学检测选自ELISA检测、Elispot检测、Western印迹或表面等离子共振法；优选地，所述试剂包括抗IL-6的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述试剂通过ELISA来测定IL-6的水平；优选地，所述抗IL-6的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；优选地，所述抗IL-6的抗体为IgG抗体或IgM抗体；优选地，所述试剂盒还包含一种或多种选自1)-5)的装置或试剂：1)采血装置，例如无热原真空采血管；2)抗凝剂，例如肝素；3)培养液或培养基；4)非特异性刺激原，例如植物凝集素或刀豆球蛋白A；5)稀释液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水；优选地，所述试剂盒通过包括下述步骤的方法来筛选能够治疗活动性结核的候选药物：(1)在给模型动物施用候选药物之前，获得来自所述动物的至少两份样品，作为治疗前样品；(2)使用特异性刺激原刺激来自所述动物的至少一份治疗前样品作为待测样品，同时将来自所述动物的未经刺激的至少一份治疗前样品作为阴性对照样品，其中所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种；(3)使用检测IL-6的试剂测定步骤(2)中各个样品的IL-6水平，并计算所述待测样品与阴性对照样品的IL-6水平的差值，作为第一差值；(4)给所述动物施用候选药物；(5)在给所述动物施用所述候选药物之后，获得来自所述动物的至少两份样品，作为治疗后样品；(6)使用特异性刺激原刺激来自所述动物的至少一份治疗后样品作为待测样品，同时将来自所述动物的未经刺激的至少一份治疗后样品作为阴性对照样品，其中所述特异性刺激原选自RV0183、PlcD或其抗原性片段中的一种或数种；(7)使用能够检测IL-6的试剂测定步骤(6)中各个样品的IL-6水平，并计算所述待测样品与阴性对照样品的IL-6水平的差值，作为第二差值；和(8)将所述第二差值与第一差值进行比较，或对所述第一差值和第二差值分别进行统计学分析以获得第一差值的统计分析值和第二差值的统计分析值，并将所述第二差值的统计分析值与所述第一差值的统计分析值进行比较，并判断所述疗法对活动性结核的治疗是否有效；其中，所述样品包含外周血单个核细胞(PBMC)，例如全血(例如抗凝全血)、外周血单个核细胞(PBMC)、或外周血白膜层；优选地，在步骤(8)中，利用选自下列的统计模型对所述第一差值和第二差值进行统计...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛胜祥，刘永亮，陈梦媛，张军，夏宁邵，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35