一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏的新方法技术

本发明专利技术公开了一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏(DDVP)的新方法，主要是基于无荧光染料Amplex Red(10‑acetyl‑3,7‑dihydroxyphenoxazine，AR)在硫化铜纳米粒子(CuSNPs)存在情况下加入敌敌畏引起其荧光的变化进行检测。将AR分别与CuSNPs和敌敌畏混合，检测不到明显荧光变化。在AR与CuSNPs共同存在情况下，加入敌敌畏可引起AR荧光的增强，其荧光增强与加入敌敌畏的浓度呈线性相关。本发明专利技术提供的方法非常简单、特异性强、稳定性好、检测速度快，可进一步研制相应的试剂盒和试纸条，能够满足现场快速、准确的检测要求。

A new method for rapid detection of dichlorvos by low cost enzyme free label

The invention discloses a low cost non standard enzyme immunoassay for rapid detection of dichlorvos (DDVP) of the new method is mainly based on Red Amplex fluorescent dye (acetyl 3,7 10 dihydroxyphenoxazine, AR) in copper sulfide nanoparticles (CuSNPs) were detected with fluorescence change caused by the case of dichlorvos. When AR was mixed with CuSNPs and dichlorvos, no obvious fluorescence changes were detected. In the presence of AR and CuSNPs, the addition of dichlorvos could lead to the enhancement of AR fluorescence, and the fluorescence enhancement was linearly related to the concentration of dichlorvos. The method provided by the invention has the advantages of simple, strong specificity, good stability and fast detection speed, and further development of the corresponding reagent box and test paper strip can satisfy the fast and accurate detection requirements in the field.

【技术实现步骤摘要】
一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏的新方法
本专利技术涉及化学分析领域，具体涉及一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏(DDVP)的新方法，本专利技术属于检测

技术介绍
敌敌畏(DDVP)，学名O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯，有机磷杀虫剂的一种，分子式C4H7Cl2O4P。敌敌畏为广谱性杀虫、杀螨剂。具有触杀、胃毒和熏蒸作用，对害虫等击倒力强而快，其主要机理是在体内与胆碱酯酶形成磷酰化胆碱酯酶，胆碱酯酶活性受抑制，使酶不能起到分解乙酰胆碱的作用，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积，胆碱使得神经过度兴奋，引起毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统症状。有机磷农药(OPs)是我国常用农药之一，主要用于防治植物病、虫、害等，对农作物的丰产丰收起着重要的作用。目前，OPs仍是农作物病虫害防治的主要措施。由于农药具有毒性高、持久性长的特点,过多使用农药导致农产品中农药残留不仅会引发了严重的饮食安全问题，其所引起的环境污染问题也日益严重。但是，目前所用检测方法已无法满足大批量农产品和国内外有关食品的现场快速检测需要。亟需开发出简便、快捷、灵敏的检测技术。目前对于有机磷农药敌敌畏的检测方法的文献报道较多(AnalyticalChemistry,2009，82，290-296.；AnalyticalandBioanalyticalChemistry,2007，389,1663-1683.；AnalyticalChemistry，2012，84，5816-5822.；AnalyticalChemistry,2014，86，11727-11733.；BiosensorsandBioelectronics,2015,68,168-174.)，但是多是基于有机磷对乙酰胆碱酶的抑制作用，酶易变性不易保存，酶的使用不仅增加检测成本对检测结果的准确度也有一定的影响。
技术实现思路
对目标物实现高灵敏、高精准、简单的快速检测方法是分析化学的一个重要发展方向。针对以上存在的问题，我们开发了一种无酶、免标、成本低的快速检测敌敌畏的新方法。其操作过程简单，成本低，检测结果具有良好的重现性，确保了检测结果的准确度。为达到上述目的，本专利技术创造的技术方案如下：本专利技术提供了一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏(DDVP)的新方法。本方法将AmplexRed(AR)，硫化铜纳米材料(CuSNPs)与DDVP三者共同混合，在室温孵育2.5h，AR被氧化产生荧光，其荧光增强与DDVP浓度呈线性相关，通过检测AR荧光强度即可实现对DDVP的快速检测。本专利技术具体包括以下步骤：(1)制备1μMAR和180μg/mLCuSNPs的混合溶液，加入0-0.1μg/mL不同浓度的DDVP，室温下孵育2.5小时，然后用荧光分光光度仪检测AR的荧光强度，激发波长为540nm，发射波长为584nm，AmplexRed(AR)，硫化铜纳米材料(CuSNPs)与DDVP三者浓度是三者在反应体系中的最终浓度，反应的体系包括AR，硫化铜材料和不同浓度的DDVP。(2)以AR荧光响应为纵坐标，以DDVP浓度为横坐标对检测数据进行处理，然后进行线性拟合，得到线性回归方程；(3)在检测实际样品时，在待测样品溶液中同时加入1μMAR和180μg/mLCuSNPs溶液，室温孵育2.5小时后，用荧光分光光度仪检测非标记荧光染料AmplexRed的荧光强度，激发波长为540nm，发射波长为584nm；根据步骤(2)得到的线性回归方程计算待测溶液中DDVP的浓度。i进一步，本专利技术所述硫化铜纳米材料制备方法为：分别量取0.02M/L的硝酸铜2mL和0.01M/L的硫化铜2mL，将两者迅速混合后，溶液呈现墨绿色，并充分的涡旋30mins再超声30mins后离心，转速为10000rpm/min，离心30mins后，将上清液弃掉，沉淀用乙醇清洗，并离心，反复三次；将得到的沉淀硫化铜纳米颗粒真空干燥，之后称量质量为0.0072g，并再次将其溶解在4mL的水中超声溶解，溶液呈现墨绿色，得到硫化铜纳米颗粒的浓度为1800μg/mL。本专利技术所述的方法是一种快速检测敌敌畏的新方法。相对于现有技术，本专利技术创造所述的DDVP的检测方法具有以下优势：本专利技术利用DDVP，AR和CuSNPs的共同作用，具有操作简单、无酶、免标记、灵敏度高、方法简单和特异性强且成本低的优势。附图说明构成本专利技术创造的附图用来提供对本专利技术创造的进一步理解，本专利技术创造的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术创造，并不构成对本专利技术创造的不当限定。在附图中：图1为本专利技术创造实施例所述的CuSNPs的紫外光谱图。图2为本专利技术创造实施例所述的DDVP，CuSNPs增强AR荧光，检测DDVP的原理验证相关实验数据。图3为本专利技术创造实施例所述的优化CuSNPs所用检测浓度的AR的荧光响应数据。图4为本专利技术创造实施例所述的为检测DDVP的反应时间优化数据。图5为本专利技术创造实施例所述的AR荧光强度随DDVP浓度变化的荧光曲线。图6为本专利技术创造实施例所述的AR荧光强度随DDVP浓度变化在584nm处荧光值的线性拟合曲线及方程。图7为本专利技术创造实施例所述的检测敌敌畏特异性干扰实验数据。具体实施方式为了使本专利技术上述特征和专利技术创造中优化条件更加清楚和容易理解，下面将结合附图对本专利技术的实施方式作进一步详细描述。以下AmplexRed(AR)，硫化铜纳米材料(CuSNPs)与DDVP三者反应的体系是500μL(包括AR，硫化铜材料和不同浓度的DDVP)，下面给出的三者的浓度都是在500μL体系下的浓度。实施例1硝酸铜(0.02M/L，2mL与硫化铜(0.01M/L，2mL)分别溶解在水中，分别混匀后，将两者迅速混合后，溶液呈现墨绿色，并充分的涡旋30mins再超声30mins后离心转速为10000rpm/min，30mins后，将上清液弃掉；沉淀用乙醇清洗，并离心，反复三次；将沉淀硫化铜纳米颗粒真空干燥，之后称量质量为0.0072g，并再次将其溶解在4mL的水中超声溶解，溶液呈现墨绿色，硫化铜纳米颗粒的浓度为1800μg/mL。紫外可见分光光度计测定其紫外吸收光谱。实施例21μMAR荧光染料(a)；1μMAR荧光染料与180μg/mLCuSNPs混合后(b)；1μMAR荧光染料与0.05μg/mLDDVP混合后(c)；1μMAR荧光染料,180μg/mLCuSNPs与0.05μg/mLDDVP混合后(d)，利用荧光分光光度仪测AR荧光强度(如图1所示)。激发波长为540nm，发射波长为584nm。实施例31μMAR，0.05μg/mLDDVP与不同浓度的CuSNPs(0，3.6，18，36，72，144，180，216，288，360μg/mL)混合反应，测定AR的荧光强度。激发波长540nm，发射波长为584nm。实施例41μMAR，180μg/mL的CuSNPs与0.05μg/mLDDVP混合孵育不同的时间(0，0.5，1，1.5，2，2.5，3h)，测定AR的荧光强度。激发波长540nm，发射波长为584nm。实施例51μMAR，180μg/mLCuSNPs与0-0.1μg/mL的DDVP混合反应2.5h，测定AR的荧光强度。激发波长540nm，发射波长为584nm。实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏的新方法，其特征在于：将硫化铜纳米材料，Amplex Red和DDVP同时混合，通过检测AR荧光强度实现对DDVP浓度的检测。

【技术特征摘要】
1.一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏的新方法，其特征在于：将硫化铜纳米材料，AmplexRed和DDVP同时混合，通过检测AR荧光强度实现对DDVP浓度的检测。2.根据权利要求1所述一种低成本无酶免标快速检测敌敌畏的新方法，其特征在于：具体操作方法如下：(1)在1μMAmplexRed和180μg/mL硫化铜纳米材料的混合溶液中，加入0-0.1μg/mL不同浓度的DDVP溶液，反应2.5h后，用荧光分光光度仪器检测AmplexRed的荧光强度，其激发波长为540nm，发射波长为584nm；(2)以AmplexRed荧光响应为纵坐标，以DDVP浓度为横坐标对检测数据进行处理，然后进行线性拟合，得到线性回归方程；(3)在检测实际样品时，在待测样品溶液中同时加入1μMAmplexRed和180μg/mL硫化铜纳米材料...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚青，林晓东，王硕，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12