一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与目的基因同时表达，但彼此独立形成各自的蛋白；所形成的能同时表达红、绿两种荧光蛋白的细胞用于对影响目的基因表达的外部因素进行筛选；用流式细胞仪定量检测细胞的绿色荧光信号的强弱，再用其红色荧光信号值进行均一化，从而对外部因素对目的基因表达的影响进行定量比较，定量检测出影响目的基因表达的外部因素。本方法能同时比较细胞在多种处理条件下，特定基因的表达量差异，在较高通量和较短时间内对基因表达的影响因素进行高灵敏度的筛选。

Method for quantitative detection of target gene expression by flow cytometry

The present invention provides a method using flow cytometry to gene expression method for quantitative detection of target gene expression in the cells, in the red fluorescent protein gene; gene in the reading frame, type of green fluorescent protein gene; the red and green fluorescent protein gene and target gene expression at the same time. But independent of each other and form their protein; which can simultaneously express two kinds of red and green fluorescent protein were used for the external factors on the effect of the expression of target gene were screened; with the green fluorescence signal of flow cytometry cell intensity, using the red fluorescence signal values were normalized, which has affected the external factors on gene expression by quantitative comparison, quantitative detection of external factors affecting gene expression. This method can compare the expression of specific genes of cells under different processing conditions at the same time, and highly sensitive screening of factors affecting gene expression in higher flux and shorter time.

【技术实现步骤摘要】
一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法
本专利技术涉及一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，属于分子生物学

技术介绍
流式细胞术是一种对快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速的定性、定量分析或分选的技术，具有检测速度快、测量参数多、采集数据量大、分析全面、分选纯度高、方法灵活等特点，流式细胞仪(flowcytometer，FCM)是以流式细胞术为核心技术，集物理、化学、生物学，以及激光和计算机等多学科理论和技术于一体的技术设备，被广泛应用于医学检验，细胞生物学，药物筛选等多学科领域，随着技术的进步和仪器的普及，其应用领域在不断被拓展。基于流式细胞仪的检测原理，待检测细胞被荧光标记后被制成单细胞悬液，在鞘液包被下，单行排列，依次通过待检测区域，被荧光染色的细胞在激光的照射下，产生散射光和激发荧光，它们被检测器收集后，分别可以反映细胞的大小和细胞内颗粒的复杂程度，以及所标记的被测细胞内部颗粒的信息，这些光信号转化成电信号，被传送到计算机转换成数据文件被保存和处理。数据经处理后，可得出细胞大小、活性、DNA、RNA含量和细胞周期等信息。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，其特征在于，步骤为：步骤1：在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在所述目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与所述目的基因同时表达，但彼此独立形成各自的蛋白；所形成的这种能同时表达红、绿两种荧光蛋白的细胞用于对影响目的基因表达的外部因素进行筛选；步骤2：外部因素进入步骤1所形成的细胞后，对目的基因的表达会产生上调或下调的影响，所述影响会反映在绿色荧光蛋白的表达量上；用流式细胞仪定量检测细胞的绿色荧光信号的强弱，再用其红色荧光信号值进行均一化，从而对所述外部因素对目的基因表达的影响进行定量比较，定量检测...

【技术特征摘要】
1.一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，其特征在于，步骤为：步骤1：在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在所述目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与所述目的基因同时表达，但彼此独立形成各自的蛋白；所形成的这种能同时表达红、绿两种荧光蛋白的细胞用于对影响目的基因表达的外部因素进行筛选；步骤2：外部因素进入步骤1所形成的细胞后，对目的基因的表达会产生上调或下调的影响，所述影响会反映在绿色荧光蛋白的表达量上；用流式细胞仪定量检测细胞的绿色荧光信号的强弱，再用其红色荧光信号值进行均一化，从而对所述外部因素对目的基因表达的影响进行定量...

【专利技术属性】
技术研发人员：周宇荀，李晓宁，王斯佳，肖君华，李凯，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：上海,31