The invention discloses a method for separating gram positive pathogenic bacteria in the blood of patients with septicemia, which provides the basis for the follow-up treatment of patients with sepsis, and relates to the field of biotechnology. The method includes magnetic nanoparticles with polyethylene glycol (PEG 2000) magnetic nanoparticles complex coupling, vancomycin coated magnetic nanoparticles conjugated with polyethylene glycol, polyethylene glycol and vancomycin were modified to capture gram positive pathogens in the blood in the external magnetic field, will capture gram positive pathogens and blood were isolated, and heavy suspension steps. Gram positive pathogens can be directly captured by magnetic separation was further analyzed, compared with the traditional blood plate culture method, the method can carry out the magnetic separation of gram positive pathogens in the blood, not only to improve the separation efficiency of gram positive pathogens in patients with septicemia, but also saves the time differential.
【技术实现步骤摘要】
一种新型的分离败血症中革兰氏阳性病原菌的方法革兰氏阳性病原菌
本专利技术涉及生物
,具体是涉及基于磁性纳米粒子的革兰氏阳性病原菌分离方法。
技术介绍
败血症是严重的全身性感染疾病,病情复杂多变,病死率高。败血症患者血液中的病原菌主要包括革兰氏阳性病原菌和革兰氏阴病原菌。在治疗过程中,革兰氏阳性病原菌和革兰氏阴性菌细胞壁结构差别较大,选用药物也有一定差别。传统的鉴别败血症患者血液中病原菌种类的方法主要是血平板培养法,但该方法周期长,大概需要5-7天,在这一过程中很可能会使病人的病情进一步加重。另外,如若不对血液中病原菌进行分类,就只能使用广谱的抗菌素。近年来,随着人类广谱和超广谱抗生素的大量生产和应用,导致多重耐药菌、条件病原菌引起的各类感染增加,抗生素的选择范围缩小。目前全球细菌耐药形势空前严峻,细菌耐药已被列为威胁人类健康的三大难题之一。同时,广谱和超广谱抗菌素还会对肠道中的益生菌产生抑制作用,从而对健康产生一定的危害。因此,为了提高对败血症患者的治疗效果,在治疗前对患者血液中的病原菌种类进行鉴别,能够指导临床更加科学合理使用抗菌药物。因此,建立一种高效、快速检测革兰氏阳性病原菌的新方法显得尤为迫切。鉴于需要建立一种高效,快速的检测方法,基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在病原菌监测中得到了迅速发展。磁分离技术是病原菌快速筛查技术的重要组成部分之一,该技术可高效捕获、浓缩增菌液中目标菌、提高病原菌检测的灵敏度,缩短检测时间。近年来,基于万古霉素修饰的磁性纳米粒子分离法将万古霉素连接到磁性纳米粒子上,然后将万古霉素修饰的磁性纳米粒子投入样品液中对目标 ...
【技术保护点】
革兰氏阳性病原菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL),加入到8mL pH=7.4的无菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁性纳米粒子进行洗涤,重复3次,将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中;(2)5.8mg EDC,溶于290μL无菌的PBS中,6.5mg NHSS,溶于325μL无菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中,活化1h;(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中;(4)称取聚乙二醇90mg,溶解到1.8mL无菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁性纳米粒子溶液中,反应3h,然后用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中,得到聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子;(5)称取91.3mg万古霉素,48.3mg EDC和54.8mg NHSS,分别溶于无菌的PBS溶液中,然后混合,通过碳化二亚胺法,活化万古霉素表面羧基,活化10min;(6)将活化后的万古霉素加入到聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子溶液中,孵育6h;(7)反应完毕后, ...
【技术特征摘要】
1.革兰氏阳性病原菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL),加入到8mLpH=7.4的无菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁性纳米粒子进行洗涤,重复3次,将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中;(2)5.8mgEDC,溶于290μL无菌的PBS中,6.5mgNHSS,溶于325μL无菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中,活化1h;(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中;(4)称取聚乙二醇90mg,溶解到1.8mL无菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁性纳米粒子溶液中,反应3h,然后用无菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL无菌的PBS溶液中,得到聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子;(5)称取91.3mg万古霉素,48.3mgEDC和54.8mgNHSS,分别溶于无菌的PB...
【专利技术属性】
技术研发人员:许恒毅,孟祥玉,刘洋,孔蕴源,曹翔宇,姚利阳,李盎,
申请(专利权)人:南昌大学,
类型:发明
国别省市:江西,36
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