快速磁分离蜡样芽孢杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种致病菌的分离方法，主要涉及蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的分离方法，该方法为目的菌更好地进行后续研究提供基础，涉及生物技术领域。方法包括磁珠与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联、再用万古霉素修饰牛血清白蛋白包被的磁珠复合物、牛血清白蛋白和万古霉素共修饰的磁珠复合物捕获样品液中的目的菌，通过外加磁场的作用，将被捕获目标菌与样品液进行分离及重悬等步骤。通过磁分离捕获到的目的菌可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法可以对食品基质和血液中的革兰氏阳性菌进行磁分离，提高了样品中目的菌分离效率，同时降低了成本。

Method for rapid magnetic separation of Bacillus cereus

The invention discloses a method for the separation of pathogenic bacteria, mainly involving Bacillus cereus (Bacillus cereus) separation method, the method for the purpose of bacteria better provide the basis for further research, relates to the field of biotechnology. The method includes magnetic beads with bovine serum albumin (BSA), and then the coupling of vancomycin modified bovine serum albumin complexes, the bead bag of bovine serum albumin and vancomycin modified bead complex bacteria in liquid samples to capture, through the magnetic field, will be captured the target bacteria were isolated and resuspended with other steps liquid sample. Through the magnetic separation to objective bacterium captured can be directly carried out further analysis, compared with the traditional bacterial magnetic separation method, the method can carry out the magnetic separation of gram positive bacteria and food matrix in the blood, improve the separation efficiency of target bacteria in the sample, while reducing the cost.

【技术实现步骤摘要】
快速磁分离蜡样芽孢杆菌的方法
本专利技术涉及生物
，具体是涉及基于磁珠的蜡样芽孢杆菌分离方法。
技术介绍
蜡样芽孢杆菌是一种产芽孢的革兰氏阳性菌，广泛分布于土壤、灰尘和水中，因此很容易污染各类食品，是常见的食品污染菌和条件致病菌。食品在20℃以上的条件下放至时，蜡样芽孢杆菌能迅速繁殖并产生肠毒素，同时，由于本菌不分解蛋白质，因此，食品在感官上无明显变化，无异味，很容易误食而发生食物中毒。因蜡样芽孢杆菌污染引起食物中毒事件显示，多数是由剩米饭、米粉、剩菜、甜点、肉类制品等富含碳水化合物的食物造成，最常见可导致两种不同类型的食物中毒：腹泻型和呕吐型。鉴于需要建立一种高效，快速的检测方法，基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在致病菌监测中得到了迅速发展。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的是提供一种捕获效率高、简便、分离时间短，低梯度磁场下从复杂基质中快速、特异分离目的菌蜡样芽孢杆菌的方法。蜡样芽孢杆菌的快速分离方法，包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁珠，加入到8mLpH＝7.4的灭菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，将对磁珠进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁珠重悬于1本文档来自技高网...

【技术保护点】
蜡样芽孢杆菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁珠，加入到8mL pH＝7.4的灭菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁珠进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液；(2)5.8mg EDC，溶于290μL灭菌的PBS中，6.5mg NHSS，溶于325μL灭菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中，活化1h；(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中；(4)称取牛血清白蛋白24mg，溶解到3mL灭菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁珠溶液中，反应2h，然后用灭菌的PBS洗涤3次，重悬...

【技术特征摘要】
1.蜡样芽孢杆菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁珠，加入到8mLpH＝7.4的灭菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁珠进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液；(2)5.8mgEDC，溶于290μL灭菌的PBS中，6.5mgNHSS，溶于325μL灭菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中，活化1h；(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中；(4)称取牛血清白蛋白24mg，溶解到3mL灭菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁珠溶液中，反应2h，然后用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中，得到牛血清白蛋白修饰的磁珠；(5)称取200mg万古霉素，169.31mgEDC和47.98mgNHSS，分别溶于灭菌的PBS溶液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：许恒毅，李福来，魏华，孟祥玉，吴海芳，罗丹，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西,36