万古霉素结合聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种致病菌的分离方法，主要涉及单增李斯特菌的分离，该方法为单增李斯特菌后续研究提供基础，涉及生物技术领域。方法包括磁性纳米粒子与聚乙二醇的偶联、万古霉素偶联聚乙二醇包被的磁性纳米粒子、聚乙二醇和万古霉素共修饰的磁性纳米粒子复合物捕获样品液中的单增李斯特菌，在外加磁场的作用下，将捕获的单增李斯特菌与样品液进行分离，并进行重悬等步骤。磁分离捕获到的单增李斯特菌可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法可以对食品基质和血液中的革兰氏阳性菌进行磁分离，不仅提高了样品中单增李斯特菌分离效率，同时也降低了成本。

Method for rapidly enriching and separating single Lester bacteria by vancomycin and polyethylene glycol modified magnetic nanoparticles

The invention discloses a method for separating pathogenic bacteria, mainly relating to the separation of single Lester bacteria. The method provides the basis for the follow-up study of the single Lester bacteria, and relates to the field of biotechnology. The magnetic nanocomposite coupling methods, including magnetic nanoparticles and polyethylene glycol vancomycin coupling polyethylene glycol coated magnetic nanoparticles, polyethylene glycol and vancomycin modified captured samples in liquid Lester Listeria bacteria, in the presence of an external magnetic field, the Lester bacteria were separated and the sample liquid increasing capture, and heavy suspension steps. Magnetic separation to capture the Listeria bacteria Lester can be directly carried out further analysis, compared with the traditional bacterial magnetic separation method, the method can carry out the magnetic separation of gram positive bacteria and food matrix in blood samples, not only improve the Listeria bacteria Lester separation efficiency, but also reduce the cost.

【技术实现步骤摘要】
万古霉素结合聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法
本专利技术涉及生物
，具体是涉及基于磁性纳米粒子的单增李斯特菌分离方法。
技术介绍
单增李斯特菌是自然界中普遍存在的一种致病菌，由单增李斯特菌引起的食源性疾病主要有肠胃炎、中枢神经系统感染、流产等。常见的单增李斯特菌污染的食品有生肉制品、蔬菜、牛奶、西红柿等。在加拿大，100个碎牛肉零售样本中单增李斯特菌的检出发生率高达52％。由于单增李斯特菌在4℃下仍可生长，进一步增加了其潜在的危害性，严重威胁消费者的健康安全。因此，建立一种高效、快速检测单增李斯特菌的新方法显得尤为迫切。鉴于需要建立一种高效，快速的检测方法，基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在致病菌监测中得到了迅速发展。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的是提供一种低梯度磁场下，简便、快捷，高效的磁富集分离复杂基质中的单增李斯特菌的方法。单增李斯特菌的快速分离方法，包括以下步骤：(1)取2mL的磁性纳米粒子，加入到8mLpH＝7.4的无菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁性纳米粒子进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁性纳米粒子重悬于10本文档来自技高网...

【技术保护点】
单增李斯特菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL)，加入到8mL pH 7.4的无菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁性纳米粒子进行洗涤，重复3次，将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中；(2)5.8mg EDC，溶于290μL无菌的PBS中，6.5mg NHSS，溶于325μL无菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中，活化1h；(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL无菌的PBS溶液中；(4)称取聚乙二醇90mg，溶解到1.8mL无菌的PBS溶液中，然后加入...

【技术特征摘要】
1.单增李斯特菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁性纳米粒子(10mg/mL)，加入到8mLpH7.4的无菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁性纳米粒子进行洗涤，重复3次，将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于10mL无菌的PBS溶液中；(2)5.8mgEDC，溶于290μL无菌的PBS中，6.5mgNHSS，溶于325μL无菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中，活化1h；(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL无菌的PBS溶液中；(4)称取聚乙二醇90mg，溶解到1.8mL无菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁性纳米粒子溶液中，反应3h，然后用无菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL无菌的PBS溶液中，得到聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子；(5)称取91.3mg万古霉素，48.3mgEDC和54.8mgNHSS，分别溶于无菌的PBS溶液中，然后混合，通过碳化...

【专利技术属性】
技术研发人员：许恒毅，孟祥玉，熊勇华，李凡，杨鹏飞，左胜，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西,36