Method for rapidly enriching and separating single Lester bacteria by antibiotic modified magnetic nanoparticles. The invention discloses a method for the separation of pathogenic bacteria, mainly involving Listeria bacteria Lester (Listeria monocytogenes) separation method, the method for the purpose of bacteria better provide the basis for further research, relates to the field of biotechnology. The method includes magnetic beads with bovine serum albumin (BSA), and then the coupling of vancomycin modified bovine serum albumin complexes, the bead bag of bovine serum albumin and vancomycin modified bead complex bacteria in liquid samples to capture, through the magnetic field, will be captured the target bacteria were isolated and resuspended with other steps liquid sample. Through the magnetic separation to objective bacterium captured can be directly carried out further analysis, compared with the traditional bacterial magnetic separation method, the method can carry out the magnetic separation of gram positive bacteria and food matrix in the blood, improve the separation efficiency of target bacteria in the sample, while reducing the cost.
【技术实现步骤摘要】
抗生素修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法
本专利技术涉及生物
,具体是涉及基于磁珠的单增李斯特菌分离方法。
技术介绍
单增李斯特菌是自然界中普遍存在的一种致病菌,由单增李斯特菌引起的食源性疾病主要有肠胃炎、中枢神经系统感染、流产等。常见的单增李斯特菌污染的食品有生肉制品、蔬菜、牛奶、西红柿等。在加拿大,100个碎牛肉零售样本中单增李斯特菌的检出率高达52%。由于单增李斯特菌在冰箱温度4℃下仍可生长,使潜在的危害性进一步增大,严重威胁食品安全。因此,建立一种高效、快速检测单增李斯特菌的新方法显得尤为迫切。鉴于需要建立一种高效,快速的检测方法,基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在致病菌监测中得到了迅速发展。
技术实现思路
针对现有技术的缺陷,本专利技术的目的是提供一种捕获效率高、简便、分离时间短,低梯度磁场下从复杂基质中快速、特异分离目的菌单增李斯特菌的方法。单增李斯特菌的快速分离方法,包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁珠,加入到8mLpH=7.4的灭菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,将对磁珠进行洗涤,重复3次,将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液中;(2)5.8mgEDC,溶于290μL灭菌的PBS中,6.5mgNHSS,溶于325μL灭菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中,活化1h;(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中;(4)称取牛血清白蛋白24mg,溶解到3mL灭菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁珠溶液中,反应3h,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL ...
【技术保护点】
单增李斯特菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁珠,加入到8mL pH=7.4的灭菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁珠进行洗涤,重复3次,将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液;(2)5.8mg EDC,溶于290μL灭菌的PBS中,6.5mg NHSS,溶于325μL灭菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中,活化1h;(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中;(4)称取牛血清白蛋白24mg,溶解到3mL灭菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁珠溶液中,反应2h,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,得到牛血清白蛋白修饰的磁珠;(5)称取200mg万古霉素,169.31mg EDC和47.98mg NHSS,分别溶于灭菌的PBS溶液中,然后混合通过碳化二亚胺法,活化万古霉素表面羧基,活化10min;(6)将活化后的万古霉素加入到牛血清白蛋白修饰的磁珠中,孵育6h;(7)反应完毕后,用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于10mL灭菌的PBS溶液中,得到浓度为2mg/mL的万古 ...
【技术特征摘要】
1.单增李斯特菌的快速分离方法,其特征在于包括以下步骤:(1)吸取2mL的磁珠,加入到8mLpH=7.4的灭菌的PBS溶液中,然后在外加磁场的作用下,对磁珠进行洗涤,重复3次,将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液;(2)5.8mgEDC,溶于290μL灭菌的PBS中,6.5mgNHSS,溶于325μL灭菌的PBS中,然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中,活化1h;(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中;(4)称取牛血清白蛋白24mg,溶解到3mL灭菌的PBS溶液中,然后加入到活化后的磁珠溶液中,反应2h,然后用灭菌的PBS洗涤3次,重悬于8mL灭菌的PBS溶液中,得到牛血清白蛋白修饰的磁珠;(5)称取200mg万古霉素,169.31mgEDC和47.98mgNHSS,分别溶于灭菌的PBS溶液中...
【专利技术属性】
技术研发人员:许恒毅,孟祥玉,熊勇华,占忠旭,洪武定,周平,
申请(专利权)人:南昌大学,
类型:发明
国别省市:江西,36
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