一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法技术

本发明专利技术提供一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法。首先以植物多酚和脂肪酰氯为原料，通过酯化反应将脂肪链连接到植物多酚的羟基上，合成植物多酚脂肪酸酯。紧接着以植物多酚脂肪酸酯作为表面活性剂，配置反胶团溶液（包含表面活性剂、水相、有机相）。然后将反胶团溶液与胰岛素按照一定比例混合，植物多酚通过氢键、疏水键与胰岛素蛋白发生可逆络合作用，将胰岛素保护在反胶团的“水池”中，制备搭载胰岛素的反胶团口服运输系统。在不牺牲植物多酚分子优异的生理、生物活性功能的前提下，有效的解决胰岛素口服运输过程中保存生物活性的问题，能够有效控制糖尿病患者的血糖。

A reverse micelle package prepared insulin system

The invention provides a preparation method of reverse micelle package combined with insulin system. Firstly, the plant polyphenol and fatty acyl chloride were used as raw materials, and the aliphatic chain was connected to hydroxyl groups of the plant polyphenol by esterification. Followed by plant polyphenols fatty acid ester as the surfactant, the configuration of reverse micelles solution (containing surfactant, aqueous and organic phase). Then the reverse micelle solution and insulin in certain proportion, plant polyphenols through reversible complexation of hydrogen bond, hydrophobic protein and insulin, insulin in reverse micelle pool, preparation with reverse micelle oral insulin transport system. In the premise of not sacrificing the physiological and biological properties of molecular plant polyphenols excellent under the preservation of biological activity effectively solve the problem of oral insulin transport process, can effectively control the blood glucose of diabetic patients.

【技术实现步骤摘要】
一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法
本专利技术属于胰岛素口服制剂制备
，具体涉及一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法。
技术介绍
胰岛素是胰岛素依赖型(1型)与严重的胰岛素非依赖型(2型)糖尿病最有效的治疗药物之一。胰岛素治疗患者一般需终生用药，而长期皮下注射带来了诸多的不便和巨大的痛苦。因此，广大科研工作者一直致力于研制非注射型的胰岛素制剂。其中，口服胰岛素制剂是目前公认最理想的非注射临床给药方式。胰岛素药物的口服剂型主要需要克服肠黏膜上皮存在的对多肽蛋白质类药物的吸收屏障，还需要使胰岛素避免被胃肠道的各种蛋白酶分解、消化。在过去的几十年中对于克服常规口服胰岛素的缺点和限制做了各种不同的尝试。主要集中在口服胰岛素的研制取得成功将要克服酶的降解、提高上皮细胞的渗透率以及在处理加工中保存药物的生物活性等方面。目前主要在脂质体、纳米粒、乳剂、油相溶液及其他剂型等方面研究。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有口服胰岛素的缺陷和技术不足，在不牺牲植物多酚分子优异的生理、生物活性功能的前提下，通过植物多酚脂肪酸酯化合成新型表面活性剂，制备搭载胰岛素的反胶团口服运输系统。不仅细胞能够吸收，在有效的解决胰岛素口服运输过程中保存生物活性的同时，能够有效控制糖尿病患者的血糖。本专利技术解决技术问题所采用的技术方案为：一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，首先以植物多酚和脂肪酰氯为原料，通过酯化反应将脂肪链连接到植物多酚的羟基上，合成植物多酚脂肪酸酯。紧接着以植物多酚脂肪酸酯作为表面活性剂，配置反胶团体系(包含表面活性剂、水相、有机相，其中有机相为花生油、玉米油、液体石蜡中的一种)。然后将反胶团体系与胰岛素按照一定比例震荡混合，植物多酚通过氢键、疏水键与胰岛素蛋白发生可逆络合作用，将胰岛素保护在反胶团的“水池”中，得到搭载胰岛素的反胶团体系。一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，具体包括以下步骤：表面活性剂合成：称取植物多酚、10倍植物多酚质量的1,4‐二氧六环，加入反应容器中，搅拌使其溶解，升温至40～60℃后，通入氮气，加入吡啶，再滴加脂肪酰氯，定时用pH试纸在冷凝管口检测，至HCl不再生成(pH值不变)时停止反应，反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚，分去水层后，加入吸水剂去除微量水分，减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于高真空度干燥箱中干燥，得化学改性产物植物多酚脂肪酸酯乳化剂；所述脂肪酰氯可以结合在植物多酚分子中的任何一个或多个羟基位置，植物多酚分子上的羟基结合的脂肪酰氯分子可以相同或者不同。反胶团体系配制：将步骤(1)所得表面活性剂和助溶剂甘油加入到有机试剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入水，使体系Wo值＝15～35，表面活性剂浓度为200～300mM，静置所得溶液即为反胶团体系；胰岛素溶液配置：将胰岛素加入到0.01～0.02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2.6～3.4g/l，得到胰岛素溶液；(4)胰岛素置换过程：将步骤(3)配置的胰岛素溶液与步骤(2)配置的反胶团体系于摇床震荡混合5～40min后，静置分层后取有机相，即得反胶团包合胰岛素体系，后续可以做成软胶囊等终剂型。有研究表明，植物多酚可以增强胰岛素活性。在一个体外的附睾组织细胞检测中茶被证明至少增加胰岛素15倍的活性，且活性成分主要是表没食子儿茶素没食子酸酯，其次是表儿茶素没食子酸酯(RichardA.Anderson,etal(2002)J.Agric.FoodChem.50:7182‐7186)。由于天然植物多酚的分子结构中含有大量的酚轻基，其易溶于水而难溶于油。因而，在不牺牲植物多酚分子优异的生理、生物活性功能的前提下，可以通过分子结构的改变来达到其在油脂性环境中具有较大溶解度的目的。参照表面活性剂的增溶原理，在植物多酚的分子结构中引入脂肪链，合成的植物多酚脂肪酸酯符合表面活性剂的特征，一端为亲水基团，另一端为疏水基团。利用表面活性剂植物多酚脂肪酸酯乳化剂在有机相中形成的反胶团，反胶团在有机相内形成一个亲水微环境，使蛋白质类生物活性物质溶解于其中，从而避免在有机相中发生不可逆变性。作为优选，步骤(1)所述植物多酚选自茶多酚、葡萄籽多酚和单宁酸中的一种。作为优选，步骤(1)所述植物多酚与脂肪酰氯物质的量之比为1:1～20。作为优选，步骤(1)所述植物多酚与吡啶的质量之比为1:0.5～1.4。作为优选，步骤(1)所述脂肪酰氯选自己酰氯、辛酰氯、月桂酰氯、肉豆蔻酰氯、油酸酰氯和硬脂酸酰氯中的至少一种。作为优选，步骤(2)所述有机试剂选自花生油、玉米油、液体石蜡中的至少一种。作为优选，步骤(2)所述助溶剂的添加量为反胶团体系质量的0～10％。作为优选，步骤(4)所述胰岛素溶液与反胶团体系的体积比为1:1～30。制备得到的植物多酚脂肪酸酯乳化剂包合胰岛素体系在制备糖尿病治疗药物方面的应用，以及在作为或制备胰岛素口服制剂方面的应用，也都应在本专利技术的保护范围之内。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术工艺流程简单，操作简便，重现性好，成本低廉，易于放大至产业化生产。本专利技术以植物多酚为载体，具有来源天然无毒、增强胰岛素活性的优点，又能与胰岛素可逆结合，很大程度上将胰岛素络合在反胶团内，使该剂型的胰岛素保持较高的生物活性。该专利技术制备的油乳在胃中乳液稳定而在小肠中破乳释放胰岛素，使得胰岛素被小肠吸收发挥药效。本专利技术所得胰岛素为口服肠溶性胰岛素制剂，可改善由于长期注射胰岛素给糖尿病患者带来的不便和痛苦。附图说明图1是大鼠服用实施例1‐5胰岛素口服制剂的血糖‐时间曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：(1)表面活性剂合成：称取精制的茶多酚20g，1,4‐二氧六环200g，加入500mL三口瓶中，搅拌使其溶解，升温至50℃后，通入氮气，加入15g吡啶，再逐滴加入16g辛酰氯。反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚。分去水层后，加入吸水剂去除微量水分。减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于高真空度干燥箱中干燥，得化学改性产物—茶多酚辛酸酯乳化剂26g。(2)反胶团体系配制：将步骤(1)得到的26g茶多酚辛酸酯乳化剂和5mL助溶剂甘油加入到110mL液体石蜡中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入13.7mL水，使表面活性剂浓度约为230mM，静置所得溶液即为反胶团溶液。(3)胰岛素溶液配置：将0.3g胰岛素加入到100mL0.01M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为3g/l，得到胰岛素溶液。(4)胰岛素置换过程：取胰岛素溶液10mL与反胶团体系100mL摇床震荡混合40min后，静置分层后取有机相，即得反胶团包合胰岛素体系，后续可以做成软胶囊等终剂型。实施例2：(1)表面活性剂合成：称取精制的葡萄籽多酚20g，1,4‐二氧六环200g，加入500mL三口瓶中，搅拌使其溶解，升温至45℃后，通入氮气，加入10g吡啶，再逐滴加入32g油酸酰氯。反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚。分去水层后，加入吸水剂去除微量水分。减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，其特征在于，利用脂肪酸化学修饰植物多酚合成植物多酚脂肪酸酯乳化剂，并用之于胰岛素反胶团体系的制备，将胰岛素包裹在反胶团中心，制备搭载胰岛素的反胶团口服运输系统，具体包括以下步骤：（1）表面活性剂合成：称取植物多酚、10倍植物多酚质量的1,4‑二氧六环，加入反应容器中，搅拌使其溶解，升温至40~60℃后，通入氮气，加入吡啶，再滴加脂肪酰氯，定时用pH试纸在冷凝管口检测，至HCl不再生成（pH值不变）时停止反应，反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚，分去水层后，加入吸水剂去除微量水分，减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于高真空度干燥箱中干燥，得化学改性产物植物多酚脂肪酸酯乳化剂；（2）反胶团体系配制：将步骤(1)所得表面活性剂和助溶剂甘油加入到有机试剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入水，使体系Wo值=15～35，表面活性剂浓度为200～300mM，静置所得溶液即为反胶团体系；（3）胰岛素溶液配置：将胰岛素加入到0.01~0.02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2.6~3.4g/l，得到胰岛素溶液；（4）胰岛素置换过程：将步骤（3）配置的胰岛素溶液与步骤（2）配置的反胶团体系于摇床震荡混合5～40min 后，静置分层后取有机相，即得反胶团包合胰岛素体系。...

【技术特征摘要】
1.一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，其特征在于，利用脂肪酸化学修饰植物多酚合成植物多酚脂肪酸酯乳化剂，并用之于胰岛素反胶团体系的制备，将胰岛素包裹在反胶团中心，制备搭载胰岛素的反胶团口服运输系统，具体包括以下步骤：（1）表面活性剂合成：称取植物多酚、10倍植物多酚质量的1,4-二氧六环，加入反应容器中，搅拌使其溶解，升温至40~60℃后，通入氮气，加入吡啶，再滴加脂肪酰氯，定时用pH试纸在冷凝管口检测，至HCl不再生成（pH值不变）时停止反应，反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚，分去水层后，加入吸水剂去除微量水分，减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于高真空度干燥箱中干燥，得化学改性产物植物多酚脂肪酸酯乳化剂；（2）反胶团体系配制：将步骤(1)所得表面活性剂和助溶剂甘油加入到有机试剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入水，使体系Wo值=15～35，表面活性剂浓度为200～300mM，静置所得溶液即为反胶团体系；（3）胰岛素溶液配置：将胰岛素加入到0.01~0.02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2.6~3.4g/l，得到胰岛素溶液；（4）胰岛素置换过程：将步骤（3）配置的胰岛素溶液与步骤（2）配置的反胶团体系于摇床震荡混合5～40min后...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄洁，周良普，金志敏，冯文杰，张银华，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33