一种胰岛素的测定试剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种胰岛素测定试剂及制备方法，属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域。由R1试剂和R2试剂构成，所述的R1试剂是添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是添加有胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的纯化水中所形成的溶液。将发明专利技术应用于胰岛素的测定，具有快速灵敏、准确性好、特异性高、稳定性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种胰岛素的测定试剂及其制备方法，属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料

技术介绍
胰岛素是一种蛋白质类激素。体内胰岛素是由胰岛β细胞分泌的。在人体十二指肠旁边，有一条长形的器官，叫做胰腺。在胰腺中散布着许许多多的细胞群，叫做胰岛。胰腺中胰岛总数约有100～200万个。胰岛素合成的控制基因在第11对染色体短臂上。基因正常则生成的胰岛素结构是正常的；若基因突变则生成的胰岛素结构是不正常的，为变异胰岛素。在B细胞的细胞核中，第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录，mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网，转译成氨基酸相连的长肽--前胰岛素原，前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽，生成胰岛素原。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体，由86个氨基酸组成的长肽链--胰岛素原在高尔基体中经蛋白酶水解生成胰岛素及C肽，分泌到B细胞外，进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原，一小部分随着胰岛素进入血液循环，胰岛素原的生物活性仅及胰岛素的5％。胰岛素的分子量5700，由两条氨基酸肽链组成：A链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸；A-B链之间有两处二硫键相连；胰岛B细胞中储备胰岛素约200U，每天分泌约40U。空腹时，血浆胰岛素浓度是5～15μU/mL；进餐后血浆胰岛素水平可增加5～10倍。胰岛素的生物合成速度受血浆葡萄糖浓度的影响，当血糖浓度升高时，B细胞中胰岛素原含量增加，胰岛素合成加速。临床证明：胰岛素检查，可以判定糖尿病患者是1型患者还是2型患者，因此，主要适合于没有使用胰岛素治疗的患者，具体如下：(1)1型糖尿病患者多在5μU/ml以下，2型患者血浆胰岛素水平可正常、偏低或高于正常。增高明显者呈高胰岛素血症，提示有胰岛素抵抗。在进行OGTT的同时测定血浆胰岛素浓度，了解胰岛β细胞功能，以鉴别1型糖尿病和2型糖尿病。1型糖尿病患者空腹和糖刺激后胰岛素水平均较低，呈低平曲线；2型糖尿病患者可表现为胰岛素分泌高峰延迟或增高，胰岛素分泌的第一时相降低或缺如，和同时相的血糖值相比，胰岛素分泌偏低。亦可同时测定血清C肽以加以鉴别。血浆胰岛素降低尚可见于嗜铬细胞瘤、生长抑素瘤、醛固酮增多症、原发性甲状旁腺功能减退症等所引起的继发性糖尿病和胰岛B细胞瘤、胰外肿瘤、肾上腺功能减退及垂体功能低下等所致的低血糖症。目前国内测定胰岛素的方法主要有：(1)酶联免疫法，该方法定量准确性差，操作时间长，一般只用于定性检测。(2)放射免疫法，该方法线性范围窄，灵敏度低。(3)电化学发光法，该方法虽然准确度比较高，但标记物是大分子，免疫结合空间大，标记物对测试结果影响较大。基于此，做出本申请。
技术实现思路
针对现有胰岛素在测试过程中存在的上述缺陷，本专利技术首先提供一种快速灵敏、准确性好、特异性高、稳定性好、液体双试剂操作简便，采用国内外先进的胶乳增强免疫比浊法，适用于临床全自动或半自动生化分析(手工加样品、试剂)的胰岛素测定试剂。为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：一种胰岛素的测定试剂，由R1试剂和R2试剂构成，所述的R1试剂是添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是添加有胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的纯化水中所形成的溶液。进一步的，作为优选：所述的R1试剂中，缓冲液为Tris缓冲液，更优选的，所述的Tris缓冲液的浓度为100mmol/L。所述的R2试剂中，胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的浓度为1mg/mL。同时，本申请还提供了一种具有上述特征胰岛素测定试剂的制备方法，包括如下步骤：(1)R1试剂配制：向纯化水中加入缓冲液，搅拌至完全溶解；后定容；(2)R2试剂配制：向纯化水中加入胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液，搅拌至完全溶解后定容；(3)对上述制备的R1试剂和R2试剂进行灵敏度、线性范围、精密度和准确度进行测定。进一步的，作为优选：所述的搅拌速度为450转/分。搅拌速度过高会导致剪切力过大，影响所配制溶体的表面张力和粘合力，搅拌速度过低则影响其混配效果，控制在450转/分时，在确保搅拌剪切适中的同时，也促进了其内所添加物质的融合。步骤(1)中，所述的纯化水初始体积为800ml，定容体积为900ml。定容前后体积变化在10-15％，可以很好的保证其内所添加其他物质良好的融合性，确保所配置的R1试剂浓度、溶液稳定性最佳。步骤(2)中，所述的纯化水初始体积为200ml，定容体积为300ml。定容前后体积变化在40-50％，可以很好的保证其内所添加其他物质良好的融合性，确保所配置的R2试剂浓度、溶液稳定性最佳。R1试剂的溶液密度会较R2试剂溶液密度小，在确保R2中胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液浓度的同时，R2试剂的整体体积较R1体积小，确保R2试剂与R1试剂达到良好的配伍效果，有利于测试稳定性和精确性的提高。本专利技术的工作原理如下：胰岛素测定试剂盒是将抗体标记在纳米级胶乳的表面，血清中的胰岛素与试剂中的抗体在液相中相遇，即结合成抗原-抗体复合物，产生一定浊度，胶乳颗粒可以相应的增大该浊度变化。通过与相应的标准曲线做对照，可以由浊度变化计算得出血清中胰岛素的浓度。(1)灵敏度评价试验根据GB/T26124-2011《临床化学体外诊断试剂(盒)》中对“分析灵敏度”检测的要求，以试剂盒在规定参数下对分析灵敏度评价用样本进行检测产生的吸光度改变，换算为n单位的吸光度的差值(ΔA)作为分析灵敏度。分析灵敏度评价试验对分析灵敏度评价用样本重复测定20次。评估结果：分析灵敏度50μIU/ml吸光度差值(ΔA)≥0.125ABS。(2)线性范围评价试验根据GB/T26124-2011《临床化学体外诊断试剂(盒)》和《体外诊断试剂分析性能评估指导原则——线性范围(征求意见稿)》中的建议，对试剂线性范围进行验证时，在待验证线性范围内选择5个浓度水平，每个浓度水平重复测定3次。(3)精密度评价试验精密度评价包括重复性和批间差，且至少评估二个浓度水平样本的精密度，其中有一个浓度在医学决定水平左右。因此，重复性评价采用在重复性条件下，用二个浓度水平的控制物质(其中一个浓度接近医学决定水平)测试，每个浓度重复测试10次；批间差评价采用二个浓度水平的控制物质(其中一个浓度接近医学决定水平)分别测试3个不同批号的试剂盒，每个批号测试3次。(4)准确度评价试验用不少于40个在检测浓度范围内的不同浓度的人源样品，以指定的分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂操作方法及比对方法分别检测。用线性回归方法计算两组结果的相关系数(r)及每个浓度点的相对偏差。评估结果：三批试剂的重复性变异系数CV≤5％；相对偏差≤10％，试剂线性可达100μIU/ml，分析灵敏度50μIU/ml吸光度差值(ΔA)≥0.125ABS。本专利技术利用胶乳增强免疫比浊法测定胰岛素的方法，其优点是快速灵敏，准确性好，特异性高，稳定性好，操作简便，可适用于临床全自动或半自动生化分析仪配套使用。附图说明图1为本申请中抗原-吸光度曲线图；图2为本申请中抗体-吸光度曲线图；图3为本申请中测定试剂的准确度柱状图。具体实施方式实施例1本实施例所用主要试剂：R1试剂：Tris缓冲液：100mmol/L。R2试剂：胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰岛素的测定试剂，其特征在于：由R1试剂和R2试剂构成，所述的R1试剂是添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是添加有胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的纯化水中所形成的溶液。

【技术特征摘要】
1.一种胰岛素的测定试剂，其特征在于：由R1试剂和R2试剂构成，所述的R1试剂是添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是添加有胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的纯化水中所形成的溶液。2.如权利要求1所述的一种胰岛素的测定试剂，其特征在于：所述的R1试剂中，缓冲液为Tris缓冲液。3.如权利要求1或2所述的一种胰岛素的测定试剂，其特征在于：所述的缓冲液的浓度为100mmol/L。4.如权利要求1所述的一种胰岛素的测定试剂，其特征在于：所述的R2试剂中，胰岛素单克隆抗体胶乳颗粒悬浊液的浓度为1mg/mL。5.如权利要求1所述胰岛素测定试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：方朝君，
申请(专利权)人：浙江达美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33