胰岛素的制备方法技术

本发明专利技术提供胰岛素的制备方法。本发明专利技术涉及一种将胰岛素前体转化为活性胰岛素化合物、优选长效胰岛素的改进的方法。具体地讲，本发明专利技术提供一种方法，其中可逆地封闭Lys-Arg前体胰岛素中的赖氨酸残基，从而使胰蛋白酶能够准确切割经可逆封闭的Lys-Arg前体胰岛素。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将胰岛素前体转化为长效活性胰岛素化合物的改进的方法。
技术介绍
胰岛素是参与血糖浓度调节的一种胰腺激素。例如，将人、猪和牛的胰岛素、胰岛素类似物和混合胰岛素给予胰岛素依赖型糖尿病患者，以调节他们的血糖浓度。成熟胰岛素是一种两条链的肽激素，含有51个氨基酸。其A-链由21个氨基酸组成，B-链由30个氨基酸组成。该分子含有2个链间二硫键和I个A-链内二硫键。在体内，该激素首先被合成为一条长的前体分子，即前胰岛素原(preproinsulin),随后被加工为胰岛素原(proinsulin)和胰岛素。最初的加工步骤是在初生链穿过内质网膜转移期间经蛋白水解而除去前肽。然后，胰岛素原折叠并伴随二硫键氧化并转运至高尔基体，在此包装成为分泌液泡。在此经特异性蛋白酶进一步加工形成成熟胰岛素。通过这样的蛋白水解切害I]，将胰岛素原中连接B链和A链的C-链(C肽)切去。C肽长度为35个氨基酸并在其氨基端和羧基端分别包含2对碱性氨基酸，即ArgArg和LysArg (Steiner, 1984)。一般认为，将两条胰岛素链连接在一起的C肽有助于合适的折叠和二硫键的形成。事实上，其缺失或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备胰岛素的方法，所述方法包括以下步骤：（a）可逆地封闭包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列的Lys‑Arg前体胰岛素中的赖氨酸残基，包括使所述Lys‑Arg前体胰岛素接触包含缓冲液和柠康酸酐的pH6‑10的溶液；和（b）切割所述Lys‑Arg前体胰岛素，包括使步骤(a)的所述Lys‑Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应，从而制备胰岛素。

【技术特征摘要】
1.一种制备胰岛素的方法，所述方法包括以下步骤: (a)可逆地封闭包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列的Lys-Arg前体胰岛素中的赖氨酸残基，包括使所述Lys-Arg前体胰岛素接触包含缓冲液和柠康酸酐的pH6_10的溶液；和 (b)切割所述Lys-Arg前体胰岛素,包括使步骤(a)的所述Lys-Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应， 从而制备胰岛素。2.权利要求1所述的方法，其中所述使所述Lys-Arg前体胰岛素接触柠康酸酐是在pH9时进行。3.权利要求1所述的方法，其中所述使所述Lys-Arg前体胰岛素接触柠康酸酐是在室温下进行大约I小时。4.权利要求1所述的方法，其中所述使步骤(a)的所述Lys-Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应是在pH值为6.0-11.5时进行。5.权利要求1所述的方法，其中所述使步骤(a)的所述Lys-Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应是在室温下进行。6.权利要求5所述的方法，其中所述使步骤(a)的所述Lys-Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应进行至少5小时。7.权利要求5所述的方法，其中所述使步骤(a)的所述Lys-Arg前体胰岛素与胰蛋白酶反应进行23小时。8.权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)之前将所述Lys-Arg前体胰岛素暴露在10.0-11.5 的 pH 值下。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：雅各布·哈特曼，江立新，
申请(专利权)人：华凌科技有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL