一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，属于药品包装和药物相容性领域，具体为采用高效液相色谱法来进行检测，流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液，避免了复杂的前处理手段，通过本发明专利技术成功的将抗氧剂BHT色谱峰与甘精胰岛素和间甲酚分离，避免了拖尾现象的发生，准确检测出样品中抗氧剂BHT的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药品包装和药物相容性领域，尤其涉及一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法。
技术介绍
药品包装材料对保证药物的稳定性起着至关重要的作用，与人们的用药安全息息相关。药品的包装材料选用不当会导致药物活性成分的迁移、吸附甚至发生化学反应，使药物失效，有的还会产生严重的毒副作用。药用丁基胶塞与天然橡胶相比，由于良好的气密性、稳定性、耐老化性和低析出性，已经成为医药包装中应用较为广泛的材料之一。由于胶塞的成分比较复杂，包含的化合物的种类也比较多，作为直接接触到药品的包装材料，即便丁基胶塞的化学稳定性很好，其中的化合物也有可能会迁移到药液中，存在影响药效或者污染药品的可能性。某些抗生素的注射用粉针剂，在贮存过程中出现澄清度超标的现象，有文献报道可能与所用胶塞有关。抗氧剂2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚，即BHT，是现在已知的存在于胶塞中的可挥发性成分之一，研究表明BHT对人体的肝脾胃均有不同程度的毒害作用。研究胶塞中的BHT迁移到药液中的迁移量大小，对胶塞与药物的相容性研究起着重要的作用。传统技术上针对BHT迁移量的检测大部分采用GC-MS的方法，但是这种方法对仪器的要求较高，难以普及。甘精胰岛素注射液为胰岛素类似物，临床主要适用于需用胰岛素治疗的糖尿病，胶塞中的BHT同样存在着迁移到甘精胰岛素注射液中的可能，传统技术不能很好的检测甘精胰岛素注射液中的BHT，因此有必要针对此进行改进。《今日药学》期刊2015年05期中“高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中的抗氧剂BHT”一文中介绍了使用高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中BHT的方法，该方法对脂肪乳注射液有着较好的检测效果，但是其检测前需要进行复杂的前处理过程，将这种方法应用到甘精胰岛素注射液中时，不能取得理想的结果。因此有必要针对甘精胰岛素注射液中的BHT检测开发一种新的检测方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单且能有效测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下方案实现：一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，使用高效液相色谱法进行检测，且流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液。将
技术介绍
中的“高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中的抗氧剂BHT”提及到的方法应用到甘精胰岛素注射液中，并不能达到理想的结果，专利技术人通过研究发现，甘精胰岛素注射液中的甘精胰岛素以及抑菌剂间甲酚在该色谱条件下会出现色谱峰并且拖尾，从而影响抗氧剂BHT的色谱峰，基于此，专利技术人进一步的发现，可以采用现有技术中液液萃取等前处理手段将甘精胰岛素和间甲酚从样品中清除，但是这种前处理手段极其复杂且效率低，实验误差大，有机试剂用量大，成本较高。专利技术人通过研发，使用了乙腈：水：磷酸盐缓冲液来作为流动相，将抗氧剂BHT色谱峰与甘精胰岛素和间甲酚色谱峰分离，从而为实现了精确测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT打下基础。所述磷酸盐缓冲液为将二水磷酸二氢钠和氯化钠溶解于水中，调整pH至2.5~4制备而成，使得最终混合的流动相中，二水磷酸二氢钠的浓度为0.0031~0.0052g/ml，氯化钠的浓度为0~0.0032g/ml。通过进一步的优化二水磷酸二氢钠和氯化钠的用量，避免了盐的析出，二水磷酸二氢钠保证了流动相的pH，可以使得甘精胰岛素和间甲酚提前出峰，避免影响待测物质抗氧剂BHT的色谱峰；氯化钠能修饰BHT的峰型，使得峰的参数更易读取。进一步地，流动相组分之间体积比为乙腈：水：磷酸盐缓冲液=65~75:10:15~25。通过对三者配比的优化，在成功分离三个峰的前提下，避免了析出盐而导致仪器的损坏。进一步地，高效液相色谱法还包括如下条件：色谱柱：C18填料色谱柱；柱温：30~40℃；流速：1~1.5ml/min。进样前，甘精胰岛素注射液样品需要进行前处理，具体为使用甲醇或乙腈与甘精胰岛素注射液进行混合。先对样品进行稀释，能增加抗氧剂BHT在甘精胰岛素注射液中的溶解度，并稀释甘精胰岛素和间甲酚的浓度。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术前处理简单，只需要用甲醇或乙腈稀释样品即可，用时少，有机试剂用量少，高效环保，减少操作误差，试验结果准确可靠；2、本专利技术能避免甘精胰岛素、间甲酚甚至其结构相似物质的存在对抗氧剂BHT色谱峰的影响，从而准确检测抗氧剂BHT的含量。附图说明图1为实施例1中甘精胰岛素注射液加标色谱图；图2为实施例1中抗氧剂BHT的标准曲线；图3为对比例1样品加标色谱图；图4为对比例2样品加标色谱图；图5为对比例3样品加标色谱图；图6为对比例4样品加标色谱图。具体实施方式为了让本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合附图对本专利技术作进一步阐述。实施例1检测对象：抗氧剂BHT；检测基质：甘精胰岛素注射液，为注射给药型溶液剂；检测方法：高效液相色谱法，C18填料色谱柱，紫外检测器，流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液，三者体积比为65:10:25，柱温35℃，流速1ml/min，检测波长280nm；所述磷酸盐缓冲液的配制如下：取二水磷酸二氢钠20.7g，加水800ml溶解，用磷酸调节pH至2.5，加入氯化钠12.8g，加水至1000ml。1．专属性试验取5ml甘精胰岛素注射液加入1ml的BHT标准母液，用甲醇定容至10ml，照上述色谱条件进高效液相色谱仪20μl。如图1所示，抗氧剂BHT的保留时间为23.1min。2．线性试验将抗氧剂BHT对照储备液稀释至0.4364、1.091、2.182、5.455、10.91、21.82μg/ml，分别进样20μl，进行HPLC测定。每个浓度测3次，取平均值。如图2所示，线性方程为C=4.846×10-5A－8.603×10-2，R2＝0.9996，表明抗氧剂BHT在0.4364~21.82μg/ml内线性良好。3．精密度试验取浓度为0.4364μg/ml、2.182μg/ml、10.91μg/ml的抗氧剂BHT对照储备液，注入液相色谱仪，进样20μl。连续进样3针，记录色谱峰，峰面积的相对标准差值（RSD）如下表：表1精密度试验结果4．稳定性试验取浓度为0.2182μg/ml、1.091μg/ml、5.455μg/ml的抗氧剂BHT对照储备液各20μl，分别于0h和24h注入高效液相色谱，记录色谱图，峰面积的相对标准偏差值(RSD)见下表。表2稳定性试验结果5．最低检测限及最低定量限将BHT对照储备液不断稀释至信噪比为3，得仪器检测限为0.1μg/ml，样品检出限为0.21μg/ml。将BHT对照储备液不断稀释至信噪比为10，得仪器定量限为0.3μg/ml，样品定量限为0.6μg/ml。6．甘精胰岛素注射液中回收率试验取5ml甘精胰岛本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，使用高效液相色谱法进行检测，且流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，使用高效液相色谱法进行检测，且流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液。
2.根据权利要求1所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为将二水磷酸二氢钠和氯化钠溶解于水中，调整pH至2.5~4制备而成，使得最终混合的流动相中，二水磷酸二氢钠的浓度为0.0031~0.0052g/ml，氯化钠的浓度为0~0.0032g/ml。
3.根据权利要求2所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲亚南，方旻，谢新艺，颜林，
申请(专利权)人：广东省医疗器械质量监督检验所，
类型：发明
国别省市：广东;44