【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学检验领域，具体涉及一种定量检测样本中tk1的聚集发光荧光免疫层析试剂盒及方法。
技术介绍
1、胸苷激酶(thymidine kinase，tk)可催化胸苷磷酸化生成胸苷一磷酸。有研究发现，tk以多种同工酶形式存在于各种不同的原核和真核生物中。这两种同工酶原命名为“胚胎”tk和“成体”tk，胚胎tk大量存在于胚胎中。胚胎tk是与细胞分裂相关，存在于细胞质中，成体tk存在于线粒体中，它的表达与细胞周期无关。胚胎tk被称为tk1(细胞质胸苷激酶)，成体tk被称为tk2(线粒体胸苷激酶)。tk的表达和调控哺乳动物细胞中染色体dna的复制是限制在细胞周期中的s期。在细胞进入s期后，许多酶的酶活性会提高，这是dna前体合成和dna复制过程中所需要的，但在dna合成后酶活性会降低。在s期的特殊酶中，就包括了tk、胸苷酸合成酶、二磷酸核糖核苷还原酶、二氢叶酸还原酶。借助清除血清的方法，当细胞处于静止期时，仅检测到低浓度的tk，但加入新鲜血清后，静止期细胞被诱发重新进入细胞周期。
2、由于tk1与细胞增殖密切相关，因此tk1在临床常用于评估各类增殖类疾病恶变的风险，如肺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、食道癌、乳腺癌和宫颈癌等。tk1是国际公认的细胞异常增殖标记物，可通过比较肿瘤患者手术前后肿瘤细胞的增殖情况，为手术效果评价提供参考，同时也可评估肿瘤复发风险，此外也适用于健康人群的肿瘤预防检测。
3、tk1的检测需求日益增加，这使得像体外诊断试剂这种方便快捷的检测方法的开发显得至关重要。目前，tk1检测试剂盒
4、化学发光分析法主要是依据化学发光检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈现线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度进行检测，从而确定待测物含量的一种分析方法。化学发光分析法检测tk1具有检测周期短、灵敏度和自动化程度高等优点。但是该方法成本较高，且需要特定的化学发光仪，这导致其在tk1的临床检测中应用范围较小。
5、酶联免疫法是将抗原和抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的检测方法。酶联免疫分析可分为直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法，一般采用竞争法原理对样本中的tk1进行定量检测。酶联免疫法由于重复性不好，易出现假阳性，且操作繁琐，受干扰因素多等原因，而应用较少。
6、因此，有必要开发新的tk1检测方法，在保证检测准确性的前提下，且成本低。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种通过聚集发光荧光免疫层析技术快速定量检测人tk1的试剂盒和方法，以简便操作，减少检测时间段、提高灵敏度高、降低检测成本。
2、本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现。
3、一方面，本专利技术提供了一种定量检测tk1的聚集发光荧光免疫层析的试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、反应板、吸收垫及pvc底板；所述样品垫、结合垫、反应板和吸收垫沿长度方向依次排列设置在pvc底板上；所述结合垫设有抗tk1荧光标记抗体和羊抗鸡igy荧光标记抗体；所述反应板设有包被tk1抗体的检测线和包被鸡igy抗体的质控线。
4、所述的结合垫上的抗tk1荧光标记抗体有聚集发光材料荧光标记修饰。
5、在一个实施方式中，所述的聚集发光材料为四苯基乙烯，该荧光标记材料不会因为浓度太高而产生淬灭，导致假阳性。
6、在一个实施方式中，所述的聚集发光材料的直径为495-505mm，激发波长为360-365nm，发射波长为525-545nm。
7、在一个实施方式中，所述的样品垫处理液进行预处理。
8、在一个优选的实施方式中，所述的样品垫处理液按照质量分数计，含有牛血清白蛋白1％、吐温-20 0.5％及0.2m硼酸硼砂缓冲液。
9、在一个实施方式中，所述的结合垫含有亲水剂曲拉通405，且采用亲水剂先处理再半喷涂的工艺生产。
10、在一个实施方式中，所述的反应板为硝酸纤维素膜，其上有tk1抗体0.8mg，羊抗鸡igy抗体1mg。
11、在一个实施方式中，所述反应板还需由包被工作液进行预处理。
12、在一个实施方式中，所述的包被工作液含有蔗糖1％及0.01m ph7.4 pbs缓冲液。
13、在一个优选的实施方式中，所述的包被工作液包括pbs缓冲液和抗体包被稀释液，各组分及其配制工艺如下：
14、所述pbs缓冲液：氯化钠0.8％、氯化钾0.02％、磷酸氢二钠0.114％、磷酸二氢钾0.027％及余量纯化水配制成浓度为0.01m ph7.4的pbs缓冲液；
15、所述抗体包被稀释液：由蔗糖1％及0.01m ph7.4 pbs缓冲液配制。
16、在一个实施方式中，所述样品垫的宽度应在22～24mm之间，长度应在290～310mm之间。结合垫的宽度应在9.5～10.5mm之间，长度应在290～310mm之间。硝酸纤维素膜的宽度应为25mm，长度应在295～305mm之间。吸收垫的宽度应为22～24mm之间，长度应在290～310mm之间。试纸条的宽度应在3.80～3.90mm之间。
17、在一个实施方式中，所述试纸条检测的样品为血清和/或血浆。
18、另一方面，本专利技术还提供了一种定量检测tk1的聚集发光荧光免疫层析的试剂盒，其含有检测卡和芯片；所述检测卡包括卡壳以及适配收纳在所述卡壳内的上述试纸条。
19、在一个实施方式中，所述芯片内存储有tk1标定浓度与荧光强度比值标准曲线。本专利技术可实现单人份及小批量的检测，且每次无需重新制作标准曲线，无需大型仪器，不受场地限制，适合临床使用。
20、本专利技术属于即时检测或床旁检测(poct)类检测产品，采用聚集发光荧光免疫层系法。该方法是一种非同位素免疫分析技术，通过聚集发光材料标记抗原或抗体，根据聚集发光材料的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，有效降低血清和血浆中的背景荧光信号干扰，极大的提高了分析灵敏度。聚集发光荧光免疫层析法既有普通荧光免疫层析法的有点，又解决了灵敏度低的问题，兼具方便、快捷、综合成本低等优点，在临床上得到广泛应用。
21、本专利技术的有益技术效果：
22、(1)本专利技术具有检测范围宽(0.5～30pmol/l)，灵敏度高(检测下限为0.5ng/ml)，准确度高(回收率在85％～115％之间)。
23、(2)本专利技术的试剂/试剂盒检测时间短(15min)，荧光不会淬。
24、(3)本专利技术的试剂/试剂盒使用时，不需要对样品进行稀释，可直接对样品进行检测，操作更加简便，检测效率更高。现有的tk1荧光免疫层析试剂盒还需要对样品进行稀释，才能在进行检测。
25、(4)本专利技术可实现单人份及小批量的检测，且每次无需重新制作标准曲线，无需大型仪器，不受场地限制，适合临床本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种定量检测TK1的聚集发光荧光免疫层析的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、结合垫、反应板、吸收垫及PVC底板；所述结合垫设有抗TK1荧光标记抗体和羊抗鸡IgY荧光标记抗体；所述反应板设有包被TK1抗体的检测线和包被鸡IgY抗体的质控线；所述的结合垫上的抗TK1荧光标记抗体有聚集发光材料荧光标记修饰。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的聚集发光材料为四苯基乙烯。
3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的聚集发光材料的直径为495-505mm，激发波长为360-365nm，发射波长为525-545nm。
4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的样品垫经处理液进行预处理；所述的样品垫的处理液按照质量分数计，含有牛血清白蛋白1％、吐温-20 0.5％及0.2M硼酸硼砂缓冲液。
5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的结合垫含有亲水剂曲拉通405，且采用亲水剂先处理再半喷涂的工艺生产。
6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的反应板为硝酸纤维素膜，其上有TK1抗
7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的反应板经由包被工作液进行预处理，所述包被工作液含有蔗糖1％及0.01M pH7.4 PBS缓冲液。
8.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，
9.一种试剂盒，其特征在于，含有检测卡和芯片，所述检测卡包括卡壳以及适配收纳在所述卡壳内的权利要求1-8任一所述的试纸条。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述芯片内存储有TK1标定浓度与荧光强度比值标准曲线。
...【技术特征摘要】
1.一种定量检测tk1的聚集发光荧光免疫层析的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、结合垫、反应板、吸收垫及pvc底板；所述结合垫设有抗tk1荧光标记抗体和羊抗鸡igy荧光标记抗体；所述反应板设有包被tk1抗体的检测线和包被鸡igy抗体的质控线；所述的结合垫上的抗tk1荧光标记抗体有聚集发光材料荧光标记修饰。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的聚集发光材料为四苯基乙烯。
3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的聚集发光材料的直径为495-505mm，激发波长为360-365nm，发射波长为525-545nm。
4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的样品垫经处理液进行预处理；所述的样品垫的处理液按照质量分数计，含有牛血清白蛋白1％、吐温-20 0.5％及0.2m硼酸硼...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩芝斌，吴静标，姚燕丽，严诗云，
申请(专利权)人：广东省医疗器械质量监督检验所，
类型：发明
国别省市：
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