一种检测药物性耳聋的PCR荧光分子信标探针制造技术

本发明专利技术涉及一种检测药物性耳聋的PCR荧光分子信标探针。分别针对每个位点设计与野生型序列完全匹配的分子信标探针，通过高分辨率熔解曲线分析(HRM)，检测随着温度升高各个通道的荧光强度变化情况，得到探针与不同基因型目的片段解链的Tm值，由于野生型和突变型具有不同的Tm值，可以实现对样品分型的目的。体系能准确区分两个位点的基因型，实现了在一个反应中同时对两个位点进行分型的目的。本体系适用于同时检测线粒体DNA中C1494T和A1555G突变，具有结果准确可靠、操作简便、检测成本低的特点。

PCR fluorescent molecular beacon probe for detecting drug deafness

The present invention relates to a PCR fluorescent molecular beacon probe for detecting drug deafness. The molecular beacon probe respectively for each site design and the wild type sequence completely matched, by high resolution melting curve analysis (HRM), with the detection of fluorescence intensity changes of temperature rise of each channel, get the probe with different genotypes fragment solution Tm value chain, the wild type and mutant with different Tm value. Can be achieved on the sample classification purpose. The system can distinguish the genotypes of two loci accurately, and realize the classification of two loci simultaneously in one reaction. The system is suitable for simultaneous detection of C1494T and A1555G mutations in mitochondrial DNA, with the characteristics of accurate and reliable results, simple operation and low detection cost.

【技术实现步骤摘要】
一种检测药物性耳聋的PCR荧光分子信标探针
本专利技术的属于医药生物
，具体而言，涉及一种检测药物性耳聋的PCR荧光分子信标探针。
技术介绍
耳聋是最常见的残疾之一，严重影响了患者的生活质量，给个人和家庭带来沉重的负担。2006年我国第二次残疾人抽样调查结果显示，全国残疾人总数达8000多万，而其中多重残疾患者中伴随听力障碍的为776万[1]。而耳聋中的50％～70％可能与遗传因素有关[2]。耳聋也与环境因素有关，出生前后的感染、声音过大和大脑创伤的耳蜗的影响、药物毒性如氨基糖甙类抗生素等，这些环境因素结合遗传因素，共同导致了耳聋的发生[3]。氨基糖甙类抗生素在耳蜗毛细胞中的主要积聚部位是线粒体和溶酶体，且代谢缓慢，从而对听力产生伤害[4]。1993年，Prezant等人通过对患病家族线粒体基因序列分析,首次报道了线粒体12SrRNA上A1555G突变与药物性耳聋的关系[5]；2004年，Zhao等人首次在一个汉族家系中发现了C1494T突变与药物性耳聋的相关性[6]。目前的检测方法主要采用测序法[7]、PCR-RFLP法[8][9]、基因芯片法[10]和高分辨率熔解曲线法[1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过高分辨率熔解曲线分析检测氨基糖甙类抗生素诱导的非综合征型耳聋相关位点12S rRNA C1494T、A1555G突变基因型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：(1)扩增覆盖C1494T和A1555G突变区域的一组引物对；(2)两条分别特异性结合扩增的片段上相应的突变区的荧光分子信标探针；(3)必要的核酸扩增和杂交试剂。

【技术特征摘要】
1.一种通过高分辨率熔解曲线分析检测氨基糖甙类抗生素诱导的非综合征型耳聋相关位点12SrRNAC1494T、A1555G突变基因型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：(1)扩增覆盖C1494T和A1555G突变区域的一组引物对；(2)两条分别特异性结合扩增的片段上相应的突变区的荧光分子信标探针；(3)必要的核酸扩增和杂交试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物对的核酸序列分别为：引物1(SeqIDNo.2)：5’GAGTAGAGTGCTTAGTTGAACAGGG3’；引物2(SeqIDNo.3)：5’AAGTGTAAGTTGGGTGCTTTGTG3’；所述的荧光分子信标探针的序列为：探针1(SeqIDNo.4)：5’CCCGTCACCCTCCTCAAGTATACGGG3’；探针2(SeqIDNo.5)：5’CCCGAGGAGACAAGTCGTAACATCGGG3’。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光分子信标组中，1494位点探针在5’末端标记FAM荧光基团，1555位点探针在5’末端标记HEX荧光基团，两个探针的3’末端采用BHQ1淬灭基团。4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的熔解曲线分析的检测温度范围为45～95℃，优选的，针对1494位点野生型熔解峰在63℃，突变型熔解峰在55℃，温度差为8℃；1555位点野生型熔解峰在58℃，突变型熔解峰在52℃，温度差为6℃。5.使用权利要求1-4任一所述的试剂盒检测非综合征型耳聋的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取待测标本的DNA；(2)使用扩增引物对、荧光分子信标探针组，与其他PCR反...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊乾斌，
申请(专利权)人：上海泽因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31