一种检测叶酸代谢关键酶基因多态性位点基因分型试剂盒和其检测方法技术

本发明专利技术提供一种利用荧光标记探针结合多重PCR方法对叶酸代谢关键酶基因(MTHFR和MTRR)3个位点进行分型的方法。根据MTHFR和MTRR基因设计扩增引物和荧光探针，在PCR仪扩增中待测三段DNA序列，检测反应体系中的扩增和溶解过程中释放的荧光信号，结果判读通过：(1)根据野生型和突变型标准质粒的杂交峰所显示的Tm值为来判断分型结果；(2)同时又可以通过扩增曲线的荧光值高低分型。本发明专利技术使用的引物和探针特异性强，灵敏度高；三个位点的检测同时进行，操作简单，结果容易判读；两次校准的分型方式使得分型结果更加准确可靠。本发明专利技术所述方法可在指导孕妇口服补充叶酸、提示脑卒中、冠心病和静脉血栓的高风险性以及叶酸代谢活性评估等方面进行应用。

Gene polymorphism type kit for detecting key enzyme gene of folic acid metabolism and detection method thereof

The present invention provides a method for genotyping 3 sites of folate metabolizing key enzyme genes (MTHFR and MTRR) using fluorescence labeled probes combined with multiplex PCR methods. According to the MTHFR and MTRR gene amplification primers and fluorescent probe, measured three DNA sequences in PCR instrument amplification, the amplification of fluorescence signal release and dissolution process of detection in the reaction system, through the interpretation of the results: (1) according to the cross peaks of wild type and mutant plasmid shown Tm value to typing result; (2) and level of classification by fluorescence amplification curve value. The invention uses the primer and probe specificity, high sensitivity; detection of three sites at the same time, simple operation, easy interpretation of results; the two calibration mode makes the results more accurate and reliable. The method of the invention can be applied to guide pregnant women to supplement folic acid, prompt stroke, coronary heart disease and high risk of venous thrombosis, and evaluate the activity of folic acid metabolism.

【技术实现步骤摘要】
一种检测叶酸代谢关键酶基因多态性位点基因分型试剂盒和其检测方法
本专利技术属于生物科学和临床医疗诊断领域，涉及一种利用多重荧光PCR方法检测叶酸代谢关键酶基因多态性位点的方法。利用本专利技术的方法，一次可完成对多个SNP位点同时分型检测，特异性强，灵敏度高，操作简单，能够在指导孕妇口服补充叶酸的剂量、提示脑卒中、冠心病和静脉血栓的高风险性以及叶酸代谢活性评估等方面进行应用。
技术介绍
亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenete-trahydmfolatereductase，MTHFR)是叶酸代谢过程中的关键酶，可将还原型叶酸转变为5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)，前者是胸苷酸合成的重要原料之一，参与DNA的合成与修复；后者是体内主要的甲基供体，参与DNA甲基化。MTHFR对于DNA的合成、活化及修复有着极为重要的调控作用，其功能异常可导致DNA正常功能不能维持。MTHFR基因位点突变对MTHFR酶的活性和热稳定性产生影响，从而影响叶酸、甲硫氨酸代谢。其中c677T突变(rs1801133)、A1298c位点突变(rs1801131)是常见的主要突变位点,可导致叶酸代谢关键酶活性降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于MTHFR、MTRR基因型分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：(1)用于扩增样本DNA中MTHFR、MTRR编码基因上3个SNP位点rs1801131，rs1801133和rs1801394的相应的PCR引物对，优选的，所述样本为血液、组织、体液；(2)3条分别特异性结合由3组引物对扩增的目的片段的非标记探针；(3)必要的核酸扩增和杂交试剂。

【技术特征摘要】
1.一种用于MTHFR、MTRR基因型分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：(1)用于扩增样本DNA中MTHFR、MTRR编码基因上3个SNP位点rs1801131，rs1801133和rs1801394的相应的PCR引物对，优选的，所述样本为血液、组织、体液；(2)3条分别特异性结合由3组引物对扩增的目的片段的非标记探针；(3)必要的核酸扩增和杂交试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR引物对的核苷酸序列分别为：SEQIDNO.4：MTHFRrs1801131F:CTACCTGAAGAGCAAGTCCC，SEQIDNO.5：MTHFRrs1801131R:CACTCCAGCATCACTCACTT，SEQIDNO.6：MTHFRrs1801133F:GAAGCACTTGAAGGAGAAGG，SEQIDNO.7：MTHFRrs1801133R:GTGCATGCCTTCACAAAGCG，SEQIDNO.8：MTRRrs1801394F:TGCCTTGAAGTGATGAGGAG，和SEQIDNO.9：MTRRrs1801394R:AATCCATGTACCACAGCTTG。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述非标记探针的核苷酸序列分别为：SEQIDNO.10：MTHFRrs1801131-probe:5’-CTGACCAGTGAAGcAAGTGTCTTTGggtcag-3’，SEQIDNO.11：MTHFRrs1801133-probe：5’-ccggATGATGAAATCGaCTCCCGtccgg-3’，和SEQIDNO.12：MTRRrs1801394-probe：5’-cgCGCAGAAGAAATaTGTGAGCAAcgcg-3’。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述由3组引物对扩增的目的片段的核苷酸序列分别为：SEQIDNO.1：MTHFRrs1801131，SEQIDNO.2：MTHFRrs1801133，和SEQIDNO.3：MTHFRrs1801394。5.一组用于检测MTHFR、MTRR基因型分型的引物组和非标记探针，其特征在于：所述的引物组的核酸序列分别为：SEQIDNO.4：MTHFRrs1801131F:CTACCTGAAGAGCAAGTCCC，SEQIDNO.5：MTHFRrs1801131R:CACTCCAGCATCACTCACTT，SEQIDNO.6：MTHFRrs1801133F:GAAGCACTTGAAGGAGAAGG，SEQIDNO.7：MTHFRrs1801133R:GTGCATGCCTTCACAAAGCG，SEQIDNO.8：MTRRrs1801394F:TGCCTTGAAGTGATGAGGAG，和SEQIDNO.9：MTRRrs1801394R:AATCCATGTACCACAGCTTG；所述非标记探针的核苷酸序列分别为：SEQIDNO.10：MTHFRrs1801131-probe:5’-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊乾斌，
申请(专利权)人：上海泽因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31