一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定的方法，它包括开发鲤微卫星标记、设计引物；提取鲤样品的尾部鳍条基因组DNA；用微卫星标记的引物对鲤微卫星位点进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对所述PCR扩增产物进行电泳检测；用遗传学软件对鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系进行鉴定。本发明专利技术方法能够快速、准确地对鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系进行鉴定，弥补现有技术的不足，可以应用于鲤亲本选配及遗传育种研究领域。

An individual, half sib, whole SIB and parental genetic relationship identification method for a carp

The invention discloses a method for carp individual half sib full sib, and parents of the relationship identification, it includes the development of common carp microsatellite markers, primers were designed to extract genomic DNA; tail fin of carp carp samples; microsatellite loci of microsatellite markers by primer PCR amplification, PCR amplification products; the PCR amplified products were detected by agarose gel electrophoresis; identification of common carp individuals half sib full sib, and parents of the relationship with genetics software. The invention relates to a method for rapid and accurate identification of common carp individuals half sib full sib, and parents of the relationship, to supplement the existing technology, can be applied to the field of parental selection and genetic breeding of carp.

【技术实现步骤摘要】
一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法
本专利技术属于鱼类分子生物学
，具体涉及一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定的方法。
技术介绍
鲤具有生长快、体型佳、肉质好、易驯养、适应性与抗病力强等优良的经济性状，该品种已经遍及我国27个省。随着养殖的大面积推广，鲤的一些经济性状有所退化如生长、体型、体色等，因此，改良或培育具有更优良性状的养殖新品种已迫在眉睫。在鲤选育过程中，通常采用家系选育或分子标记选育这两种方法，但这两种方法均需要对个体进行标记。而这时常用PIT进行体内标记，该方法几乎不影响鱼类的生长，但费用比较昂贵。如果对所有选育的鱼均进行PIT标记，则要耗费大量的人力、物力。因为一对鲤父母本能产出上万条幼鱼，而在选育过程中会建立几十对家系。另外在养殖对比试验中，为了减少环境的影响，常常将来自不同父母本的鱼放在同一池塘中养殖，这样也需要进行PIT标记来区别不同的个体。近年来，微卫星分子标记作为一种新型的个体标志方法，已在国内外开始逐步试用，广泛应用于种群动态结构分析，个体间亲缘关系鉴定。与传统标志方法相比，分子标记技术是以个体间遗传物质为基础的遗传标记，不存在脱落或改变的情况，减少了传统标志方法对鱼体造成的伤害，而且费用低，适用于鲤的个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定，在鲤的选育中具有广泛的用途。现有技术中的微卫星研究多用于鲤种群的遗传结构以及家系的区分，未涉及到个体间半同胞、全同胞以及父母本的亲缘关系鉴定。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法，有助于快速、准确对鲤个体间进行半同胞、全同胞间以及父母本的亲缘关系鉴定，在鲤选育中具有广泛的用途。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法，其特点是，其步骤如下：（1）用磁珠富集法开发鲤微卫星标记，通过PCR扩增从多个微卫星标记中筛选出多态性高、扩增效率好的引物，选取12对微卫星标记的引物用于后续的鲤个体间亲缘关系分析，所述的12对微卫星标记的引物如下所示：JL325引物对：F：cctgacacctgccgttcaR：tcctctgttctgcctccaJL368引物对：F：caggaggacgtaagggaaR：agggctgaggagtgatgagJL382引物对：F：tccctctgcccaatgacaR：cggtgagcgagaaacgagJL458引物对：F：gaaaggagttcccacaacR：agctgaggacctagacgtJL930引物对：F：agatttcgtctaccaaggaR：cttccacctgagacaacacJL1211引物对：F：tcctgcatctgagtgacagaR：cagacattagccgggtaggcJL1285引物对：F：ttgacgacagcgttagcattR：aacaagcgcaggctaatcagJL1301引物对：F：acacacctgcgctcactaagR：ttgtgtttcaggctacaaaaaJL1316引物对：F：aaacacagccagacatgcaaR：tgcttcaaatcaatccacaaaJL1410引物对：F：ctgagctgagctcgtgtctgR：ttttctgccgaaacattgtgJL1438引物对：F：ctgcccgacatcaacaagtgR：catgcaaagtgcaaggacatJL1458引物对：F：tgctttattgtgtccctccaR：cacagcacgagcagaggaag；（2）取待鉴别的鲤，处死后尾部鳍条，采用碱裂解法提取其基因组DNA；（3）以上述基因组DNA为模板，用上述微卫星标记的引物对鲤微卫星位点进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；（4）对上述PCR扩增产物进行电泳检测，检测结果以扩增片段长度（bp）显示；（5）用遗传分析软件对上述检测结果进行分析，鉴定个体间进行半同胞、全同胞以及父母本间的亲缘关系。本专利技术所述的微卫星标记的引物的信息如表1所示。表1.12对微卫星标记的引物信息本专利技术所述的一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法中，进一步优选的技术方案或者技术特征是：1、在步骤（3）中：所述的PCR扩增，其扩增体系为：10×反应缓冲液1.5μL，Mg2+2mmol/L，dNTP200μmol/L，上下游引物各0.1μmol/L，Taq酶0.3U，DNA50ng-100ng；所述的PCR扩增体系的总体积为15μL，用灭菌双蒸馏水补足总体积至15μL。2、在步骤（3）中：所述的PCR扩增，其扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性15s，56-60℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸5min。3、在步骤（4）中：对所述PCR扩增产物用QiagneQIAxcelAdvanced全自动核酸蛋白分析仪进行毛细管电泳检测。4、步骤（5）中：所述的遗传分析软件为Colony。本专利技术提供了12对多态性高、扩增效率好的鲤微卫星标记的引物，可以为鲤的遗传多样性以及种群间亲缘关系的鉴定提供资料；本专利技术不受鲤样品数量、家系的限制，亲本关系鉴定结果一目了然、可靠性好，准确率达100%；本专利技术方法能够快速、准确地对鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系进行鉴定，弥补现有技术的不足，可以应用于鲤亲本选配及遗传育种研究领域。附图说明图1为本专利技术实施例1所述的鉴定方法的结果图；图2为本专利技术实施例2所述的鉴定方法的结果图。具体实施方式以下参照附图，进一步描述本专利技术的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对其权利的限制。实施例1，参照图1，一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定的方法，其步骤如下：（1）用磁珠富集法开发鲤微卫星标记，通过PCR扩增从多个微卫星标记中筛选出多态性高、扩增效率好的引物，选取12对微卫星标记的引物用于后续的鲤个体间亲缘关系分析，所述的12对微卫星标记的引物如下所示：JL325引物对：F：cctgacacctgccgttcaR：tcctctgttctgcctccaJL368引物对：F：caggaggacgtaagggaaR：agggctgaggagtgatgagJL382引物对：F：tccctctgcccaatgacaR：cggtgagcgagaaacgagJL458引物对：F：gaaaggagttcccacaacR：agctgaggacctagacgtJL930引物对：F：agatttcgtctaccaaggaR：cttccacctgagacaacacJL1211引物对：F：tcctgcatctgagtgacagaR：cagacattagccgggtaggcJL1285引物对：F：ttgacgacagcgttagcattR：aacaagcgcaggctaatcagJL1301引物对：F：acacacctgcgctcactaagR：ttgtgtttcaggctacaaaaaJL1316引物对：F：aaacacagccagacatgcaaR：tgcttcaaatcaatccac本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法，其特征在于，其步骤如下：（1）用磁珠富集法开发鲤微卫星标记，通过PCR扩增从多个微卫星标记中筛选出多态性高、扩增效率好的引物，选取12对微卫星标记的引物用于后续的鲤个体间亲缘关系分析，所述的12对微卫星标记的引物如下所示：JL325引物对：F：cctgacacctgccgttcaR：tcctctgttctgcctccaJL368引物对：F：caggaggacgtaagggaaR：agggctgaggagtgatgagJL382引物对：F：tccctctgcccaatgacaR：cggtgagcgagaaacgagJL458引物对：F：gaaaggagttcccacaacR：agctgaggacctagacgtJL930引物对：F：agatttcgtctaccaaggaR：cttccacctgagacaacacJL1211引物对：F：tcctgcatctgagtgacagaR：cagacattagccgggtaggcJL1285引物对：F：ttgacgacagcgttagcattR：aacaagcgcaggctaatcagJL1301引物对：F：acacacctgcgctcactaagR：ttgtgtttcaggctacaaaaaJL1316引物对：F：aaacacagccagacatgcaaR：tgcttcaaatcaatccacaaaJL1410引物对：F：ctgagctgagctcgtgtctgR：ttttctgccgaaacattgtgJL1438引物对：F：ctgcccgacatcaacaagtgR：catgcaaagtgcaaggacatJL1458引物对：F：tgctttattgtgtccctccaR：cacagcacgagcagaggaag；（2）取待鉴别的鲤，处死后取尾部鳍条，采用碱裂解法提取其基因组DNA；（3）以上述基因组DNA为模板，用上述微卫星标记的引物对鲤微卫星位点进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；（4）对上述PCR扩增产物进行电泳检测，检测结果以扩增片段长度bp显示；（5）用常规遗传分析软件对上述检测结果进行分析，鉴定个体间进行半同胞、全同胞以及父母本间的亲缘关系。...

【技术特征摘要】
1.一种鲤个体间半同胞、全同胞以及父母本亲缘关系鉴定方法，其特征在于，其步骤如下：（1）用磁珠富集法开发鲤微卫星标记，通过PCR扩增从多个微卫星标记中筛选出多态性高、扩增效率好的引物，选取12对微卫星标记的引物用于后续的鲤个体间亲缘关系分析，所述的12对微卫星标记的引物如下所示：JL325引物对：F：cctgacacctgccgttcaR：tcctctgttctgcctccaJL368引物对：F：caggaggacgtaagggaaR：agggctgaggagtgatgagJL382引物对：F：tccctctgcccaatgacaR：cggtgagcgagaaacgagJL458引物对：F：gaaaggagttcccacaacR：agctgaggacctagacgtJL930引物对：F：agatttcgtctaccaaggaR：cttccacctgagacaacacJL1211引物对：F：tcctgcatctgagtgacagaR：cagacattagccgggtaggcJL1285引物对：F：ttgacgacagcgttagcattR：aacaagcgcaggctaatcagJL1301引物对：F：acacacctgcgctcactaagR：ttgtgtttcaggctacaaaaaJL1316引物对：F：aaacacagccagacatgcaaR：tgcttcaaatcaatccacaaaJL1410引物对：F：ctgagctgagctcgtgtctgR：ttttctgccgaaacattgtgJL1438引物对：F：ctgcccgacatcaacaagtgR：catgcaaagtgcaa...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝芳，唐永凯，郑荣宁，
申请(专利权)人：江苏福瑞生态渔业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32