体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基、试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基、试剂盒和应用。该体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基，所述培养基是在DMEM/F12或RPMI1640基础培养基中加入血清、终浓度为5‑50μg/ml的维生素C、终浓度为0.01‑2μg/ml的B18R或p65i、终浓度为0.1‑50ng/ml的雷帕霉素和终浓度为0.1‑50μM的白藜芦醇制备得到，所述血清是体积终浓度为1‑20％的人AB血清或体积终浓度为1‑20％的胎牛血清。通过使用本发明专利技术的体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基或试剂盒，可以在体外对软骨细胞进行端粒酶mRNA转染，使后续培养得到的软骨细胞中端粒延长，并且可以显著提高软骨细胞尤其是老龄患者的软骨细胞的增殖与活力，对于改善或治疗衰老引起的细胞功能衰退，使其实际应用于再生医学治疗。

Culture medium, kit and application of telomere lengthening proliferation culture for in vitro chondrocytes

The invention discloses a culture medium, a kit and an application for prolonging the proliferation of chondrocytes in vitro. The telomere of chondrocytes cultured with prolonged culture medium, the medium is in medium supplemented with serum, the final concentration of 5 50 g/ml vitamin C, final concentration of 0.01 2 g/ml B18R or p65i, the final concentration of 0.1 50ng/ml rapamycin and the final concentration of resveratrol 0.1 alcohol 50 M prepared by DMEM/F12 or RPMI1640 based training, the serum is 1 20% human AB serum or volume concentration at the concentration of 1 20% fetal bovine serum. By using the invention of cartilage cells in vitro telomere extension proliferation culture medium or kit can telomerase mRNA transfection on chondrocytes in vitro, the follow-up training chondrocytes in the telomere lengthening, and can significantly improve the chondrocyte proliferation and activity of cartilage cells especially the old age of patients, to improve or cause the treatment of aging cell function decline, the practical application in regenerative medicine treatment.

【技术实现步骤摘要】
体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基、试剂盒和应用
本专利技术涉及细胞生物学领域，尤其是涉及一种体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基、试剂盒和应用。
技术介绍
端粒是染色体末端的保护帽，其是由短的多重复的非转录序列(TTAGGG)及一些结合蛋白组成的特殊结构，能够保护基因组的稳定性，防止丢失染色体末端的遗传物质。细胞的不断扩增会渐进性地影响端粒的长度。当端粒缩短到一定程度，其保护性将消失，进而引起细胞的老化和凋亡。端粒酶是合成端粒并保持其长度的酶。端粒酶由两部分组成，一个RNA模板亚单位即端粒酶mRNA组分和一个蛋白催化单位即端粒酶逆转录酶。并非所有的体细胞都有端粒酶。胚胎细胞活跃地表达端粒酶，但是当胚胎细胞分化到一定程度，便停止端粒酶的表达。成体中只有少数细胞被报道有端粒酶表达，比如精原细胞，激活的T细胞和一些干细胞。端粒酶的基因缺陷会造成早老症等疾病，病人会有骨髓衰竭和粘膜疾病等症状，包括异常色素沉积，指甲营养不良，口腔白斑等。有研究证明端粒酶缺失的模型鼠身上重新导入端粒酶后，衰老的症状有被纠正的趋势，包括脑部疾病和不孕等。因端粒与细胞衰老的关系，端粒学说也因此成为氧化应激、糖化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基，其特征在于，所述培养基是在DMEM/F12或RPMI1640基础培养基中加入血清、终浓度为5‑50μg/ml的维生素C、终浓度为0.01‑2μg/ml的B18R或p65i、终浓度为0.1‑50ng/ml的雷帕霉素和终浓度为0.1‑50μM的白藜芦醇制备得到，所述血清是体积终浓度为1％‑20％的人AB血清或体积终浓度为1％‑20％的胎牛血清。

【技术特征摘要】
1.一种体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基，其特征在于，所述培养基是在DMEM/F12或RPMI1640基础培养基中加入血清、终浓度为5-50μg/ml的维生素C、终浓度为0.01-2μg/ml的B18R或p65i、终浓度为0.1-50ng/ml的雷帕霉素和终浓度为0.1-50μM的白藜芦醇制备得到，所述血清是体积终浓度为1％-20％的人AB血清或体积终浓度为1％-20％的胎牛血清。2.如权利要求1所述的体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基，其特征在于，所述培养基中血清是体积终浓度为5％-10％的人AB血清或体积终浓度为10％-20％的胎牛血清；所述维生素C的终浓度是20-40μg/ml；所述B18R或p65i的终浓度是0.1-0.5μg/ml；所述雷帕霉素的终浓度为1-10ng/ml；所述白藜芦醇的终浓度为1-10μM。3.如权利要求2所述的体外软骨细胞端粒延长增殖培养用培养基，其特征在于，所述培养基中血清是体积终浓度为5％的人AB血清；所述维生素C的终浓度是30μg/ml；所述B18R或p65i的终浓度是0.2μg/ml；所述雷帕霉素的终浓度为10ng/ml；所述白藜芦醇的终浓度为10μM。4.一种体...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海涛，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院，冠昊生物科技股份有限公司，北昊干细胞与再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44