一种菠萝叶提取物及其作为酪氨酸酶抑制剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种菠萝叶提取物及其作为酪氨酸酶抑制剂的应用，本发明专利技术提供菠萝叶提取物对酪氨酸酶具有很强的抑制作用，可用于化妆品领域作为美白剂，天然无刺激。本发明专利技术有效解决了菠萝加工产生的副产物——菠萝叶资源浪费、对环境造成污染的问题。

Pineapple leaf extract and its use as tyrosinase inhibitor

The invention relates to a pineapple leaf extract and its application as a tyrosinase inhibitor, the invention provides a pineapple leaf extract has a strong inhibitory effect on tyrosinase, which can be used in cosmetics field as natural whitening agent, no stimulation. The invention effectively solves the problems of the waste of pineapple leaf resources and the environmental pollution caused by the by-product produced by pineapple processing.

【技术实现步骤摘要】
一种菠萝叶提取物及其作为酪氨酸酶抑制剂的应用
本专利技术属于天然提取领域，具体涉及一种菠萝叶醇提取物的乙醚萃取物及其制备方法与抑制酪氨酸酶的用途。
技术介绍
黑色素(melanin)主要由人体的黑色素细胞产生，它能减少紫外线对皮肤的伤害；然而黑色素的异常蓄积会造成色素沉着过度，容易引起雀斑、老年斑、黑斑病等。研究者发现酪氨酸酶在黑色素的生物合成过程中有重大作用。在黑色素生物合成过程中，酪氨酸酶起着十分重要的催化作用。酪氨酸酶能够促进L-酪氨酸转化为L-多巴，L-多巴又经过氧化而转化为多巴醌，多巴醌多聚生成黑色素。目前主要通过以下两个途径达到抑制生成的黑色素：一个是阻止黑色素的生成(抑制酪氨酸酶的活性)；另一途径是促使已生成的色素排出体外。其中，前者效果较好，是目前研究的重点。菠萝叶具有很高的综合开发价值，已有文献报道，从叶片中提取的纤维，是一种优异的天然抗菌纺织原料；提取纤维后的叶的渣还可以开发饲料、沼气和有机肥，实现综合利用。但目前尚未有关于其抑制酪氨酸酶活性的报道，其有望作为美白剂应用与美白化妆品领域。
技术实现思路
本专利技术提供一种菠萝叶提取物，其特征在于所述菠萝叶提取物由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：(1)取干燥菠萝叶，粉碎后，加入溶剂中，于40-50℃条件下浸泡提取2-4次，每次提取时间为6-8小时，菠萝叶与溶剂的质量体积比(kg/L)为1：5-20；(2)将步骤(1)中每次浸泡提取得到的浸提液合并，得到提取液，过滤除去固体残渣，得滤液；(3)步骤(2)中得到的滤液经减压浓缩除去有机溶剂后，加入水使其分散，接着用石油醚萃取2-4次；(4)将步骤(3)萃取后的石油醚相进行合并，减压浓缩后，干燥得所述菠萝叶提取物。步骤(1)中所述溶剂选自甲醇-乙醇-异丙醇混合溶剂，三者体积比为甲醇：乙醇：异丙醇＝3：6：1；步骤(3)中水的用量为步骤(1)中有机溶剂体积的1/3至1/2；石油醚的用量为水体积的1-3倍；步骤(4)中所述的干燥为烘干或喷雾干燥。本专利技术提供菠萝叶提取物对酪氨酸酶具有很强的抑制作用，可用于化妆品领域作为美白剂，天然无刺激。本专利技术有效解决了菠萝加工产生的副产物——菠萝叶资源浪费、对环境造成污染的问题。本专利技术提供一种菠萝叶提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取干燥菠萝叶，粉碎后，加入溶剂中，于40-50℃条件下浸泡提取2-4次，每次提取时间为6-8小时，菠萝叶与溶剂的质量体积比(kg/L)为1：5-20；(2)将步骤(1)中每次浸泡提取得到的浸提液合并，得到提取液，过滤除去固体残渣，得滤液；(3)步骤(2)中得到的滤液经减压浓缩除去有机溶剂后，加入水使其分散，接着用石油醚萃取2-4次；(4)将步骤(3)萃取后的石油醚相进行合并，减压浓缩后，干燥得所述菠萝叶提取物。步骤(1)中所述溶剂选自甲醇-乙醇-异丙醇混合溶剂，三者体积比为甲醇：乙醇：异丙醇＝3：6：1；步骤(3)中水的用量为步骤(1)中有机溶剂体积的1/3至1/2；石油醚的用量为水体积的1-3倍；步骤(4)中所述的干燥为烘干或喷雾干燥。本专利技术提供一种菠萝叶提取物在制备美白剂中的用途。本专利技术提供一种菠萝叶提取物在抑制酪氨酸酶方面的应用。本专利技术所述的菠萝叶与溶剂的质量体积比(kg/L)为1：5-20是指单次浸泡提取时每千克菠萝叶使用5-20L溶剂。附图说明图1黑色素的吸光值与温度(A-T)图图2黑色素的吸光值与反应时间(A-t)图图3黑色素的吸光值与L-酪氨酸物质的量浓度(A-C)图图4黑色素的吸光值与L-酪氨酸用量(A-V)图图5黑色素的吸光值与土豆质量/缓冲溶液体积图图6菠萝叶提取物GC-MS图图7菠萝叶提取物浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图图8熊果苷酵素浓度与酪氨酸酶抑制率的关系图具体实施方案本专利技术中涉及的酪氨酸酶是可按文献的方法(李好样，吕海燕，董金龙.马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究[J].光谱实验室，2008，25(6)：1040-1043)从土豆中提取的；或按下列方法提取：将土豆洗净削皮，切块后放置于冰箱冷冻层，冷冻过夜。需用时取出称重，与相应比例的缓冲溶液[土豆质量：缓冲溶液体积＝1：5(g/mL)]共置于搅拌机中搅拌；将所得溶液进行离心，离心速率为4000r/min，离心时长为5min，取上清液为实验所用(即土豆提取液)。本专利技术所述的缓冲溶液为pH＝6.86的混合磷酸盐缓冲溶液。本专利技术从菠萝的不同部位(果皮、果肉、叶)中提取出酵素，测定其对土豆中酪氨酸酶活性的抑制作用，通过计算抑制率来反映抑制作用。用熊果苷作为阳性对照，比较IC50的大小(任红荣，单承莺，姜洪芳，等.香水莲花提取物抑制酪氨酸酶活性的研究[J].天然产物研究与开发，2011，23(06)：1122-1126；叶孝兆，龚盛昭，廖国俊，等.当归提取物对酪氨酸酶的抑制作用[J].日用化学工业，2010，40(02)：98-100)。抑制率计算公式：[1-(T2-T1)/(C2-C1)]×100％C1表示只有底物(土豆提取液和缓冲溶液的混合溶液)的吸光度值，C2表示含有底物和L-酪氨酸的吸光度值，C2-C1表示在扣除底物的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。T1表示含有底物和样品的吸光度值，T2表示含有底物、L-酪氨酸和样品的吸光度值，T2-T1表示经过样品的抑制，在扣除样品和底物的吸光度后剩余的黑色素的吸光度值。实施例1酪氨酸酶促进L-酪氨酸生成黑色素的最佳活性条件的确定(1)温度对酪氨酸酶最佳活性的影响取10mL干净干燥的棕色容量瓶8个，分为4组，每组2个，分别标记为C1和C2。按照表1加入各试液：表1体系组成及各试剂加入量按照上表给4组容量瓶加入对应量的缓冲溶液和L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液，将4组溶液分别置于0℃、10℃、30℃、40℃下，反应35min后，立即进行吸光度的测量(测量波长为475nm为最好)。如图1。(2)体系反应时间对酪氨酸酶最佳活性的影响取100mL干净干燥的棕色容量瓶两个，标记为C1和C2，按照表2加入各试液：表2体系组成及各试剂加入量按照上表给2个容量瓶加入对应量的缓冲溶液和L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液，将容量瓶置于10℃水浴，每隔5min测量一个吸光度，反应总时长为90min(测量波长为475nm)。如图2。(3)L-酪氨酸物质的量浓度对酪氨酸酶最佳活性的影响用电子天平准确称取0.0181g的L-酪氨酸粉末，用缓冲溶液溶解定容于100ml的容量瓶中,可得1mmol/L的L-酪氨酸溶液。取6个10mL干净干燥的容量瓶，分别加入上述溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL，用缓冲溶液定容至刻度线，即得物质的量浓度分别为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L、0.6mmol/L的L-酪氨酸溶液。另取10mL干净干燥的棕色容量瓶12个，分为6组，每组2个，分别标记为C1和C2。按照表3加入各试液：表3体系组成及各试剂加入量按照上表给4组容量瓶加入对应量的缓冲溶液和不同物质的量浓度的L-酪氨酸溶液作为反应体系的底物，然后加入对应量的土豆提取液。将容量瓶置于10℃水浴，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菠萝叶提取物，其特征在于所述菠萝叶提取物由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：(1)取干燥菠萝叶，粉碎后，加入溶剂中，于40‑50℃条件下浸泡提取2‑4次，每次提取时间为6‑8小时，菠萝叶与溶剂的质量体积比(kg/L)为1：5‑20；(2)将步骤(1)中每次浸泡提取得到的浸提液合并，得到提取液，过滤除去固体残渣，得滤液；(3)步骤(2)中得到的滤液经减压浓缩除去有机溶剂后，加入水使其分散，接着用石油醚萃取2‑4次；(4)将步骤(3)萃取后的石油醚相进行合并，减压浓缩后，干燥得所述菠萝叶提取物。

【技术特征摘要】
1.一种菠萝叶提取物，其特征在于所述菠萝叶提取物由如下方法制备，所述方法包括如下步骤：(1)取干燥菠萝叶，粉碎后，加入溶剂中，于40-50℃条件下浸泡提取2-4次，每次提取时间为6-8小时，菠萝叶与溶剂的质量体积比(kg/L)为1：5-20；(2)将步骤(1)中每次浸泡提取得到的浸提液合并，得到提取液，过滤除去固体残渣，得滤液；(3)步骤(2)中得到的滤液经减压浓缩除去有机溶剂后，加入水使其分散，接着用石油醚萃取2-4次；(4)将步骤(3)萃取后的石油醚相进行合并，减压浓缩后，干燥得所述菠萝叶提取物。2.权利要求1所述的菠萝叶提取物，其特征在于步骤(1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪明慧，郭飞燕，陈光英，吕纪行，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南,46