一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，属于抑制剂制备技术领域。本发明专利技术针对现有的酪氨酸酶抑制剂稳定性差，对于酪氨酸酶的抑制效果差的问题，提供了一种首先利用紫茄子内的酪氨酸酶做引发物，以仙鹤草等物质内的有益物作促进剂及稳定保护酪氨酸酶抑制剂，再将其与营养物混合，对黄曲霉进行培养，促进其产生酪氨酸酶抑制剂，并进行保护，再添加焦磷酸钠进行除杂，同时增加酪氨酸酶抑制剂效率，最后将过滤液旋转蒸发，脱色，浓缩，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂的方法。本发明专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂稳定性好，抑制效果好。本发明专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂不易水解，稳定性提高15～17％；且对酪氨酸酶活性抑制率达到98％以上。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，属于抑制剂制备


技术介绍

酪氨酸酶是黑色素形成的关键酶。酪氨酸酶是一类广泛存在于生物体内的铜结合酶，通过将酪氨酸羟化，产生L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-DOPA），然后再将L-DOPA进一步氧化成多巴醌，从而形成黑色素。同时，酪氨酸酶在果蔬保存和运输过程产生的褐变中扮演着重要角色，能降低果蔬的外观和品质，从而降低其价值。酪氨酸酶抑制剂可通过抑制酪氨酸酶的活性来切断黑色素的生物合成反应链，以此达到阻碍黑色素生成、防止果蔬褐变等目的。目前酪氨酸酶抑制剂已广泛应用于美白护肤化妆品、害虫调控剂以及食品添加剂等各个方面。因此，对医药、化妆品和食品工业等多个领域而言，酪氨酸酶抑制成分的研究与开发均具有广阔的应用前景。
曲酸作为一种酪氨酸酶抑制剂，由于其不稳定性，美白效果较弱；氢醌化合物具有强烈的酪氨酸酶抑制作用，但由于其可以诱导皮肤病以及细胞毒性，许多国家已经禁止使用；熊果苷较为安全，也具有酪氨酸酶抑制性，但作用微弱。

技术实现思路

本专利技术所要解决的技术问题：针对现有的酪氨酸酶抑制剂稳定性差，对于酪氨酸酶的抑制效果差的问题，提供了一种首先利用紫茄子内的酪氨酸酶做引发物，以仙鹤草等物质内的有益物作促进剂及稳定保护酪氨酸酶抑制剂，再将其与营养物混合，对黄曲霉进行培养，促进其产生酪氨酸酶抑制剂，并进行保护，再添加焦磷酸钠进行除杂，同时增加酪氨酸酶抑制剂效率，最后将过滤液旋转蒸发，脱色，浓缩，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂的方法。本专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂稳定性好，抑制效果好。
为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：
（1）按重量份数计，取40～50份仙鹤草、22～28份檞树皮、10～15份柴胡及14～18份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45～50％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5～5.0；
（2）在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60～70份pH调节后的浆状物、20～30份琼脂、10～15份蔗糖、2～3份硫酸亚铁、1～2份磷酸氢二钾和1～3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为60～75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；
（3）按接种量10～15％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25～28℃，转速为150rpm，培养2～4天，随后将培养基移至容器内，密封容器，使用氮气将容器内的气体置换出，对容器进行加热，设定温度为40～45℃，保持温度20～24h；
（4）在上述保温结束后，自然冷却至室温，除去密封，向容器内加入仙鹤草质量1～2％的焦磷酸钠，搅拌均匀，静置5～6h，随后再向容器内加入焦磷酸钠质量1～2倍的正己烷和正己烷等体积的无水乙醇，以300r/min搅拌30～40min后，将容器内的混合物倒入离心机中，在5000r/min下离心分离10～15min，收集上清液；
（5）将上述所得的上清液与其体积4～6％的pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液混合均匀，并置于5℃下静置3～4h后进行过滤，收集过滤液并放入旋转蒸发仪中，在70～80℃下去除过滤液中的乙醇和正己烷，随后再将旋转蒸发仪中的剩余液通过活性炭进行脱色，将脱色后的液体放入浓缩罐中进行浓缩至原体积的30～40％，收集浓缩液，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂。
本专利技术的应用方法：将本专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂添加至皮肤美白剂后，将其涂抹于皮肤上，经检测，可有效淡化色斑，抑制黑丝素的形成，同时对皮肤无伤害。
本专利技术与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂稳定性好，不易水解，稳定性提高15～17％；
（2）本专利技术制备的复合酪氨酸酶抑制剂对酪氨酸酶活性抑制率达到98％以上；
（3）本专利技术制备步骤简单，所需成本低。
具体实施方式
首先按重量份数计，取40～50份仙鹤草、22～28份檞树皮、10～15份柴胡及14～18份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45～50％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5～5.0；在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60～70份pH调节后的浆状物、20～30份琼脂、10～15份蔗糖、2～3份硫酸亚铁、1～2份磷酸氢二钾和1～3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为60～75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；再按接种量10～15％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25～28℃，转速为150rpm，培养2～4天，随后将培养基移至容器内，密封容器，使用氮气将容器内的气体置换出，对容器进行加热，设定温度为40～45℃，保持温度20～24h；在上述保温结束后，自然冷却至室温，除去密封，向容器内加入仙鹤草质量1～2％的焦磷酸钠，搅拌均匀，静置5～6h，随后再向容器内加入焦磷酸钠质量1～2倍的正己烷和正己烷等体积的无水乙醇，以300r/min搅拌30～40min后，将容器内的混合物倒入离心机中，在5000r/min下离心分离10～15min，收集上清液；将上述所得的上清液与其体积4～6％的pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液混合均匀，并置于5℃下静置3～4h后进行过滤，收集过滤液并放入旋转蒸发仪中，在70～80℃下去除过滤液中的乙醇和正己烷，随后再将旋转蒸发仪中的剩余液通过活性炭进行脱色，将脱色后的液体放入浓缩罐中进行浓缩至原体积的30～40％，收集浓缩液，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂。
实例1
首先按重量份数计，取50份仙鹤草、22份檞树皮、10份柴胡及14份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5；在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60份pH调节后的浆状物、30份琼脂、15份蔗糖、3份硫酸亚铁、2份磷酸氢二钾和3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；再按接种量10％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25℃，转速为150rpm，培养2天，随后将培养基移至容器内，密封容器，使用氮气将容器内的气体置换出，对容器进行加热，设定温度为40℃，保持温度20h；在上述保温结束后，自然冷却至室温，除去密封，向容器内加入仙鹤草质量1％的焦磷酸钠，搅拌均匀，静置5h，随后再向容器内加入焦磷酸钠质量1倍的正己烷和正己烷等体积的无水乙醇，以300r/min搅拌30min后，将容器内的混合物倒入离心机中，在5000r/min下离心分离10min，收集上清液；将上述所得的上清液与其体积4％的pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液混合均匀，并置于5℃下静置3h后进行过滤，收集过滤液并放入旋转蒸发仪中，在70℃下去除过滤液中的乙醇和正己烷，随后再将旋转蒸发仪中的剩余液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，取40～50份仙鹤草、22～28份檞树皮、10～15份柴胡及14～18份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45～50％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5～5.0；（2）在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60～70份pH调节后的浆状物、20～30份琼脂、10～15份蔗糖、2～3份硫酸亚铁、1～2份磷酸氢二钾和1～3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为60～75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；（3）按接种量10～15％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25～28℃，转速为150rpm，培养2～4天，随后将培养基移至容器内，密封容器，使用氮气将容器内的气体置换出，对容器进行加热，设定温度为40～45℃，保持温度20～24h；（4）在上述保温结束后，自然冷却至室温，除去密封，向容器内加入仙鹤草质量1～2％的焦磷酸钠，搅拌均匀，静置5～6h，随后再向容器内加入焦磷酸钠质量1～2倍的正己烷和正己烷等体积的无水乙醇，以300r/min搅拌30～40min后，将容器内的混合物倒入离心机中，在5000r/min下离心分离10～15min，收集上清液；（5）将上述所得的上清液与其体积4～6％的pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液混合均匀，并置于5℃下静置3～4h后进行过滤，收集过滤液并放入旋转蒸发仪中，在70～80℃下去除过滤液中的乙醇和正己烷，随后再将旋转蒸发仪中的剩余液通过活性炭进行脱色，将脱色后的液体放入浓缩罐中进行浓缩至原体积的30～40％，收集浓缩液，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂。...

【技术特征摘要】
1.一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）按重量份数计，取40～50份仙鹤草、22～28份檞树皮、10～15份柴胡及14～18份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45～50％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5～5.0；
（2）在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60～70份pH调节后的浆状物、20～30份琼脂、10～15份蔗糖、2～3份硫酸亚铁、1～2份磷酸氢二钾和1～3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为60～75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；
（3）按接种量10～15％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25～28℃，转速为150rpm，培养2～4天，随后将培养基移至...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈毅忠，薛培龙，宋奇，
申请(专利权)人：陈毅忠，
类型：发明
国别省市：江苏;32