长链非编码LINC01420的siRNA的应用及抑制制剂制造技术

本发明专利技术公开了长链非编码LINC01420的siRNA的应用及抑制制剂。通过设计并合成靶向LINC01420的siRNA序列，转染到鼻咽癌细胞株中，证实靶向干扰LINC01420的表达可明显抑制鼻咽癌细胞的侵袭能力。本发明专利技术为鼻咽癌的治疗提供了新的潜在的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码LINC01420的siRNA的应用及抑制制剂。
技术介绍
人类基因组计划及其后续的DNA元件百科全书计划(TheEncyclopediaofDNAElementsProject,ENCODE)研究成果表明，蛋白编码基因序列仅占人类基因组序列的1-3％，而人基因组中绝大部分可转录的序列为长链非编码RNA(Longnon-codingRNA,lncRNA)。LncRNA广泛地存在于各种生物中，且随着生物复杂程度的升高，基因组中lncRNA序列的比例也相应地增大，提示lncRNA在生物进化过程中有重要意义。随着lncRNA不断被发现，它们的功能逐渐被诠释，科学家们发现lncRNA广泛而活跃地参与到生命活动不同层面的功能调控中，作为一个崭新的领域，已经成为国际生命科学研究领域新的前沿与热点。LncRNA可作为功能蛋白质的信号(signal)、诱导(guide)、诱饵(decoy)或支架(scaffold)分子等多种方式，在染色质重构、基因转录、翻译及蛋白修饰等多重水平调控基因的表达，并在包括发育、免疫、生殖等基本生理过程中扮演了不可替代的角色，更重要的是，lncRNA的表达与功能失调已经与包括恶性肿瘤在内的人类多种疾病紧密联系在了一起。因此，深入研究lncRNA的功能，揭示由lncRNA介导的遗传信息传递方式和表达调控网络，不仅可以从蛋白编码基因以外的角度重新注释和阐明基因组的结构与功能，深入发现生命活动的本质和规律，还有望从一个新的视角认识包括肿瘤在内的多种人类常见疾病的发病机理，并为这些疾病的诊断与治疗提供新的分子标志物与治疗靶点。鼻咽癌是常见高发的头颈部恶性肿瘤，容易发生颈部淋巴结转移，预后较差。研究表明，这种肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程，LncRNA在鼻咽癌的发生发展过程中可能也起到了重要的作用。最近我们发现lncRNALINC01420(NCBIaccessionnumber:NR_015367)在鼻咽癌组织中表达上调，针对该lncRNA的检测制剂也可以用于鼻咽癌的辅助诊断。我们进一步增加样本，在110例有临床随访资料的鼻咽癌石蜡存档标本中，通过原位杂交(insituhybridization)的方法检测了LINC01420的表达水平，发现LINC01420在鼻咽癌组织中表达上调，高表达LINC01420的鼻咽癌患者比低表达LINC01420的鼻咽癌患者预后差，因此针对该lncRNA的检测制剂也可以用于鼻咽癌的预后判断。我们通过设计并合成靶向LINC01420的siRNA序列，转染到鼻咽癌细胞株中，在体外培养系统证实靶向干扰LINC01420的表达可明显抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移能力。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供长链非编码LINC01420的siRNA的应用及抑制制剂。长链非编码LINC01420的siRNA的应用，利用长链非编码LINC01420的siRNA构建抑制鼻咽癌侵袭与转移的制剂，该长链非编码RNALINC01420的序列如SEQNO:1所示。长链非编码LINC01420的siRNA序列为以下三条中的一条或几条：siRNA-1：5'-CAUCUCAGGUCUCUUGGCUUUGCCA-3'，siRNA-2：5'-GCGUUGGGAUUAUCCGGAAGGAACU-3'siRNA-3：5'-CCUCUGAGAUUUAAGGCCAUGCCCU-3'。所述的抑制鼻咽癌侵袭与转移的制剂还包括阴性对照Scramble序列：5’-GACACGCGACUUGUACCAC-3’。本专利技术公开了长链非编码LINC01420的siRNA的应用及抑制制剂。通过设计并合成靶向LINC01420的siRNA序列，转染到鼻咽癌细胞株中，在体外培养系统和裸鼠转移瘤体内模型中均证实靶向干扰LINC01420的表达可明显抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移能力。本专利技术为鼻咽癌的治疗提供了新的途径。附图说明图1为荧光定量PCR检测发现LINC01420在鼻咽癌中表达上调情况；实时荧光定量PCR技术验证lncRNALINC01420在鼻咽癌(26例)和慢性炎症鼻咽上皮组织(10例)中的表达情况，LINC01420表达显著上调(P＝0.002)。图2为原位杂交检测LINC01420在鼻咽癌及正常鼻咽上皮中的表达情况；LINC01420在正常鼻咽上皮(NPE)中表达水平较低，42例正常鼻咽上皮中仅有14例(33.3％)中检测到有LINC01420的低表达，在其余28例中检测不到；而在110例鼻咽癌组织中有60例鼻咽癌(54.5％)中检测到有LINC01420的高表达，其余的50例鼻咽癌组织中检测到LINC01420的低表达；P＝0.02。LINC01420在鼻咽癌(NPC)中的表达与患者复发及远处转移密切相关，LINC01420表达高的患者更容易复发，LINC01420表达高的肿瘤远处转移的能力更强。LINC01420在鼻咽癌(NPC)中的表达与患者的性别密切相关，LINC01420表达高的患者男性偏多。图3为鼻咽癌组织中LINC01420高表达患者预后差，更易复发和转移；鼻咽癌中LINC01420的高表达与鼻咽癌患者的不良预后相关，即LINC01420高表达的患者总的生存时间(Over-allsurvival，OS)要明显低于LINC01420低表达或不表达的患者。图4为在鼻咽癌细胞中导入LINC01420的干扰siRNA序列，可显著抑制LINC01420在鼻咽癌细胞中的表达；在鼻咽癌细胞系5-8F中导入靶向LINC01420的siRNA混合物后，实时荧光定量PCR方法检测了鼻咽癌细胞中LINC01420的表达情况，LINC01420的表达均受到明显的抑制。阴性对照(NC)为Scramble干扰siRNA序列。图5为在鼻咽癌细胞中导入LINC01420的siRNA抑制LINC01420表达后，细胞侵袭能力降低；细胞穿膜(transwell)实验证实，在鼻咽癌细胞系5-8F中转入靶向LINC01420的siRNA，抑制LINC01420的表达后，能穿过基质胶膜的鼻咽癌细胞数目显著减少，表明细胞侵袭能力降低。具体实施方式以下结合具体实施方式进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。实施例1，实时荧光定量PCR法检测发现LINC01420在鼻咽癌中表达上调1.材料与方法：收集10例慢性鼻咽上皮组织和26例鼻咽癌组织，抽提总RNA，1μgRNA经逆转录成cDNA后，进行实时荧光定量PCR。LINC01420正向引物为5'-CACTCTACCCTCCGCACC-3'，如SEQNO:2所示，和反向引物'-AGGAAGTGAAATCGTGCTGA-3'。如SEQNO:3所示。用于对照的GAPDH正向引物为5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’如SEQNO:4所示，和反向引物5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’，如SEQNO:5所示。实时荧光定量PCR反应体系实时荧光定量PCR反应步骤反应结束后确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和熔解曲线，各基因的表达强度根据CT值(thresholdcyclevalues)、内参基因(GAPD本文档来自技高网...

【技术保护点】
长链非编码LINC01420的siRNA的应用，其特征在于，利用长链非编码LINC01420的siRNA构建抑制鼻咽癌侵袭与转移的制剂，该长链非编码RNA LINC01420的序列如SEQ NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.长链非编码LINC01420的siRNA的应用，其特征在于，利用长链非编码LINC01420的siRNA构建抑制鼻咽癌侵袭与转移的制剂，该长链非编码RNALINC01420的序列如SEQNO:1所示。2.根据权利要求1所述的长链非编码LINC01420的siRNA的应用，其特征在于，长链非编码LINC01420的siRNA序列为以下三条中的一条或几条：siRNA-1：5'-CAUCUCAGGUCUCUUGGCUUUGCCA-3'，siRNA-2：5'-GCGUUGGGAUUAUCCGGAAGGAACU-3'siRNA-3：5'-CCUCUGAGAUUUAAGGCCAUGCCCU-...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊炜，曾朝阳，李桂源，李小玲，杨丽婷，唐艳艳，何奕，李夏雨，张文玲，周鸣，廖前进，陈攀，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43