microRNA‑22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用制造技术

本发明专利技术揭示miR‑22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的作用机制，首次公开了miR‑22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用。同时，首次公开了过表达miR‑22可以诱导脱毛或敲除miR‑22可以拮抗雄激素引起脱发的体内研究方法，所述microRNA‑22的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术实现步骤摘要】
microRNA-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用
本专利技术涉及microRNA的应用，具体地说，涉及microRNA-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用。
技术介绍
病理性脱发是指头发异常或过度的脱落。据统计，在人一生中60-70％的人都会经历过度脱发的烦恼。年龄、激素、紫外线和化学刺激等因素都会造成脱发。病理性脱发中最常见的是雄激素诱导的脱发，称为雄激素源性脱发(AGA)。正常情况下，人85％-90％头发处于生长期，不会脱落，只有少量处于静止期的毛发脱落下来。通常进入静止期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。雄激素源性脱发是因为睾酮在5α-还原酶作用下形成双氢睾酮(DHT)，双氢睾酮在一定的环境下可以诱导毛囊从生长期进入退行期和静止期，从而抑制头部和太阳穴部位的头发生长导致脱发。另一方面，DHT也可以促进腋毛和面毛的生长，这就是雄激素的悖论。在头部，DHT作用于毛囊的真皮乳头，刺激TGFβ1、TGFβ2和Dkk1表达，诱导毛囊从生长期提前进入退化期和静止期。这样，毛囊生长期由正常的数年变为短短的数周或几天，导致毛发脱落。研究表明AGA毛囊干细胞数量没有变化，但是活化的增殖的祖细胞数量明显减少。干细胞的存在使治疗脱发和头发再生成为可能。雄激素受体(AR)的多态性与AGA密切相关。然而，雄性激素源性脱发的分子机制至今仍然没有完全揭示清楚。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是探索雄性激素源性脱发的分子机制，发现了microRNA-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用。本专利技术的技术方案如下：microRNA-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用，所述microRNA-22的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。进一步地，所述应用为雄激素诱导microRNA-22过表达，microRNA-22过表达诱导毛发进入退行期而导致毛发脱落。进一步地，所述应用为通过抑制microRNA-22表达，拮抗雄激素DHT引起的脱发和毛发生长变慢。本专利技术还提供了microRNA-22在制备雄激素诱导脱发的药物中的应用，具体为提供一个具有潜在治疗雄激素诱导脱发的治疗靶点，通过抑制microRNA-22表达，拮抗雄激素双氢睾酮(DHT)引起的脱发和毛发生长变慢。本专利技术利用雄激素双氢睾酮诱导脱毛小鼠模型和miR-22敲除小鼠模型证实miR-22具有介导雄激素诱导脱发的方法，具体如下：1)通过转基因技术获得K14-rtTA/miR-22双转基因小鼠。利用Dox诱导miR-22过表达，发现miR-22过表达可以导致小鼠脱毛。2)H/E染色技术显示miR-22过表达导致毛发从生长期提前进入退化期。3)利用免疫组化技术和BrdU追踪技术证实miR-22可以抑制毛囊角质细胞的分化。4)利用miR-22基因敲除小鼠，发现miR-22缺失可以延缓毛发进入退化期。5)在双氢睾酮诱导脱毛的小鼠模型里，miR-22缺失可以显著加快小鼠的毛发生长。本专利技术的有益效果在于：本专利技术揭示miR-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的作用机制，首次公开了miR-22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用。同时，首次公开了过表达miR-22可以诱导脱毛或敲除miR-22可以拮抗雄激素引起脱发的体内研究方法。通过这种方法可以显著促进在雄激素存在条件下的毛发生长，为治疗雄激素诱导脱发提供了新的解决方案。附图说明图1为本专利技术实施例1中real-timePCR结果图。图2为本专利技术实施例2中Dox饲喂K14-rtTA/TRE-miR-22双阳小鼠和K14-rtTA单阳小鼠在49天对小鼠进行的拍照。图3为本专利技术实施例2中毛囊组织结构的显微镜拍照。图4为本专利技术实施例3中毛囊组织结构的显微镜拍照。图5为本专利技术实施例4中小鼠毛发生长状况拍照。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1Dox在K14rt-TA/TRE-miR-22转基因小鼠皮肤组织中诱导miR-22表达和miR-22的检测1.利用含有2克/升Dox的水去饲喂3周龄的K14rt-TA/TRE-miR-22双阳小鼠，同时饲喂K14rt-TA或TRE-miR-22单阳小鼠作对照。在4周时杀死小鼠取样。2.处死小鼠后，用去RNase酶的手术剪刀以及手术镊子取背部皮肤组织放于经DEPC处理的1.5mL离心管中，向其中加入1mLLysisBindingBuffer，放入匀浆仪匀浆10-15min，直到组织完全裂解后，再向上述匀浆液中添加100μLHomegenateAdditive，轻轻振荡几次，置于冰上10min。3.向上述混合液中添加1mL酚仿抽提液，轻轻振荡1min，10000g离心5min，直到分层。4.将上清液转移至2mL离心管中，向其中添加1.25倍体积的无水乙醇，充分混匀后，室温放置。5.将上述混合液加入到柱子中(每个柱子每次最多只能加入700μL)，10000g离心15s，弃滤液，重复本次操作，直到滤过所有上述混合液。6.向柱子中添加700μLmiRNAWashSolutionI，离心15s(10，000g)，弃去滤出液，并再次向其中加入500μLWashSolution2/3，10000g离心15s，重复该操作一次后，空柱再次离心一次，去除残留液体。7.将柱子转移到2mLCollectionTube中，向其中加入50-100μL经95℃预热的ElutionSolution，10000g离心30s，弃去柱子。使用Nanodrop测离心管底部溶液浓度和纯度，-80℃保存待用。8.反转录miR-22，按下列反应体系加样(15μL)，包括：引物，3.0μL；dNTP，0.15μL；MautiscribeRTenzyme，1.0μL；10xRTBuffer1.5μL；RNaseinhibitor，0.19μL；RNA样品，5.0μL(1-10ng)；DEPC水，4.16μL。反应条件：16℃，30min；42℃，30min；85℃，5min；最后保持在4℃。9.miR-22定量PCR，按照下列反应体系加样(20μL)，包括：TaqManSmallRNAAssay，1.0μL；ProductfromRTReaction，1.33μL；TaqManUniversalPCRMasterMix，10.0μL；DEPC水，7.67μL。反应条件如下：第一步，95℃，10min；第二步，95℃，15s；60℃，1min；重复40次。第三步，4℃，30min。real-timePCR结果如图1所示，显示Dox诱导miR-22在K14-rtTA/TRE-miR-22双阳小鼠的皮肤上显著上调25倍。实施例2miR-22过表达诱导小鼠脱毛1、利用含有2克/升Dox的水去饲喂1周龄的K14-rtTA/TRE-miR-22双阳小鼠诱导miR-22表达，同时饲喂K14-rtTA或TRE-miR-22单阳小鼠作对照。49天对小鼠进行观察和拍照。如图2所示。结果表明，在小鼠出生后开始喂食Dox诱导，K14-rtTA/TRE-miR22双转基因小鼠在第49天出现明显的脱毛表型。2、在小鼠出生后的第9，第17，第30，第35，第42，第46和第50天，取小鼠后背的皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
microRNA‑22在毛发发育和雄激素诱导脱发中的应用，其特征在于，所述microRNA‑22的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.microRNA-22的表达抑制物在制备雄激素诱导脱发的药物中的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：于政权，袁树楷，李菲菲，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11