本发明专利技术公开一种小分子RNA的应用及Rho激酶抑制剂，所述小分子RNA为miR-223，将miR-223用作Rho激酶制剂，用于制备治疗由Rho激酶信号通路异常激活所引起的疾病的药物。小分子RNA以Rho激酶信号通路中的关键因子RhoB和MLC2为靶点，显著抑制Rho激酶信号通路。小分子RNA可作为一种新的Rho激酶抑制剂用于制备治疗心血管疾病、支气管哮喘、青光眼、勃起功能障碍、神经系统疾病和肿瘤等药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及生物医学领域，尤其设及一种小分子RNA的应用及化0激酶抑制剂，特 别是设及hsa-miR-223-化在制备由化〇8/化〇信号通路异常激活所引起的疾病的药物中的 应用。
技术介绍
化〇/化〇激酶信号通路的关键信号分子包括化0蛋白、化0激酶、肌球蛋白轻链憐 酸酶（MLCP)、肌球蛋白轻链（MLC)等。化0蛋白家族为一类小分子GTP结合蛋白，主要有 化oA、化oB、化oC、Racl、Rac2和Cdc42等。在外界信号的刺激下，化0蛋白从GDP结合的失 活态转变为GTP结合的活化态，活化的化0蛋白再将信号传递给下游效应分子化0激酶，使 化0激酶发生憐酸化而被激活；激活的化〇激酶再将其底物MLCP憐酸化而使之失活；失活 的MLCP不能将MLC脱憐酸化，使胞浆MLC憐酸化水平上升，最终引起细胞肌动蛋白微丝骨 架聚合状态改变，促进应力纤维形成，促进细胞的增殖、迁移、黏附W及对巧离子的敏感性 收缩等。研究发现，化〇/化0激酶信号通路的异常活化，与血管疫李、动脉硬化、局部缺血/ 再灌注损伤、屯、力衰竭、屯、肌梗死、高血压及屯、绞痛等屯、血管疾病的发生及发展关系密切， 被看作是屯、血管疾病治疗的新祀标；另外，还与支气管哮喘、青光眼、勃起功能障碍、神经系 统疾病（如中风、脊髓损伤、阿尔茨海默病等）和肿瘤等有关。 肺动脉高压（pulmonaryarteiThypertension,PAH)是由不同病因导致的W肺血 管阻力和肺动脉压力升高为特征的致命性疾病。PAH素有"屯、血管系统的恶性肿瘤"之称。 目前可行的治疗方法有限、昂贵并伴有明显的副作用。临床数据也表明，化0激酶活性在肺 动脉高压（pulmonaryarte巧hypertension,PAH)患者中明显增高，且与PAH的严重性及 持续时间相关。动物及临床试验发现，使用化0激酶抑制剂，如法舒地尔、Y-27632和西地 那非等，可W降低肺动脉压力，改善右屯、室肥厚指数，抑制PAH的发展。由此可见，化〇/化0 激酶信号通路在PAH形成中具有重要作用。 阳0化]化0激酶抑制剂已成为目前新药研究的热点，为屯、血管等多种疾病的治疗开辟 了 新途径（Duong-如yS,BeiY,LiuZ,Dinh-XuanAT.RoleofMio-kinaseandits inhibitorsinpulmonaryhypertension.PharmacolTher2013)。目前只有盐酉《法舍巧也 尔作为化0激酶抑制剂上市应用于临床，但临床应用化0激酶抑制剂存在很多潜在的不良 反应，原因主要有：化0激酶在组织细胞中广泛分布，并且抑制不同组织细胞的化0激酶会 产生不同的生理作用；现有的化0激酶抑制剂在抑制化0激酶同时，对其他蛋白激酶也有抑 制作用。运就要求在研发化0激酶抑制剂时，要提高其对化0激酶的专属性和对不同组织 细胞的选择性。 因此，现有技术还有待于改进和发展，需研发效果更好的化0激酶抑制剂。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种小分子RNA的应用及化o 激酶抑制剂，将hsa-miR-223-化用作化0激酶抑制剂，用于制备由化oB/化0信号通路异常 激活所引起的疾病的药物，旨在解决现有化0激酶抑制剂的专属性和对不同组织细胞的选 择性有待提高的问题。 阳00引一种小分子RNA的应用，其中，所述小分子RNA为miR-223,将miR-223用作化0激 酶制剂，用于制备治疗由化0激酶信号通路异常激活所引起的疾病的药物；所述小分子RNA 的碱基序列为 5' -UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA-3'。 所述的小分子RNA的应用，其中，所述由化0激酶信号通路异常激活所引起的疾病 包括屯、血管疾病、支气管哮喘、青光眼、勃起功能障碍、神经系统疾病和肿瘤。 所述的小分子RNA的应用，其中，所述由化0激酶信号通路异常激活所引起的疾病 为缺氧性肺动脉高压。 W11] 所述的小分子RNA的应用，其中，所述小分子RNA为化学合成的小分子RNA。 所述的小分子RNA的应用，其中，所述小分子RNA为质粒载体表达的小分子RNA。 阳01引一种化0激酶抑制剂，其中，所述化0激酶抑制剂为小分子RNA，所述小分子RNA为miR-223,其碱基序列为 5' -UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA-3'。 所述的化0激酶抑制剂，其中，所述小分子RNA为化学合成的小分子RNA。[001引所述的化0激酶抑制剂，其中，所述小分子RNA为质粒载体表达的小分子RNA。 所述的化0激酶抑制剂，其中，质粒载体表达的小分子RNA的过程包括W下步骤：a、设计引物，其中，上游引物的序列为 5 ' -CACCTCGAGCTCGGGCTTTACCTGCTTATCT-3 ' 和下游引物的序列为 5'-GAGAATTCTGTATTTCCCTGAGATGCCAC-3' ；b、W人基因组DNA为模板，通过设计的引物进行PCR扩增，回收PCR扩增产物； C、用限制性内切酶化〇1和EcoRI对PCR扩增产物进行双酶切，回收酶切后的PCR 片段作为插入片段；t用限制性内切酶化〇1和EcoRI对PLV4/EGFP慢病毒载体（深圳市盎然生物技 术有限公司）进行双酶切，回收酶切后的载体片段； e、利用T4连接酶连接插入片段与载体片段； f、将连接产物转化感受态大肠杆菌细胞sraL3,培养过夜后，挑取生长情况良好的 单菌落在含有载体相应抗生素的LB培养液中进行扩增； g、提取质粒，进行测序验证，将所得质粒载体转染入细胞，表达miR-223。 有益效果：本专利技术中公开了一种小分子RNA的应用及化0激酶抑制剂，将小分子 RNA作为化0激酶抑制剂，在制备由化0激酶信号通路异常激活所引起的疾病的药物中的 应用。具有W下优点：1、本专利技术发现小分子RNAmiR-223W化oB和MLC2为祀点，通过抑制 化0激酶信号通路中的关键因子从而抑制该信号通路的活性，可作为一种新的化0激酶抑 制剂用于治疗由化0激酶信号通路异常激活所引起的疾病；本专利技术的小分子RNA是人体的 内源性RNA，对人体的毒性较小；本专利技术的小分子RNA经化学合成，可通过静脉注射导入大 鼠体内，对缺氧性肺动脉高压有一定的治疗效果。因此，本专利技术的小分子RNA可作为一种新 的化0激酶抑制剂用于治疗屯、血管疾病、支气管哮喘、青光眼、勃起功能障碍、神经系统疾 病和肿瘤等。【附图说明】 阳02引 图1A~图1D为本专利技术实施例2中结果图，显示了miR-223直接调控化oB和MLC2。 其中，图1A为miR-223与化oBUTR的结合位点；图1B为过表达miR-223对化oB-UTR或 化oB-UTR-mut巧光素酶报告质粒的影响检测结果示意图；图1C为miR-223与MLC2UTR的 结合位点；图1D为过表达miR-223对MLC2-UTR或MLC2-UTR-mut巧光素酶报告质粒的影响 检测结果示意图。 图2A~图2B为本专利技术实施例2中结果图，显示过表达miR-223抑制化oB和MLC2 的蛋白表达，抑制miR-223则促进化oB和MLC2的蛋白表达。其中，图2A为过表达miR-223 时，化oB和MLC2的蛋白表达的检测结果图；图2B为抑制miR-223时本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种小分子RNA的应用，其特征在于，所述小分子RNA为miR‑223，将miR‑223用作Rho激酶制剂，用于制备治疗由Rho激酶信号通路异常激活所引起的疾病的药物；所述小分子RNA的碱基序列为5’‑UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA‑3’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苟德明，康康，张小英，曾艳，陈继栋，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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