一种同时测定银杏叶提取物及其制剂中多组分含量的方法技术

本发明专利技术涉及药物检测领域，更具体地说，本发明专利技术涉及一种同时测定银杏叶(或其提取物)及其制剂中多组分含量的高效液相色谱法。本发明专利技术建立的方法可同时对银杏叶(或其提取物)及其制剂中14种黄酮苷类化合物以及2种酚酸类化合物的含量进行测定，为市售银杏叶制剂的质量控制提供了新的分析方法及依据。

Method for simultaneous determination of multiple components in Ginkgo leaf extract and its preparation

The present invention relates to the field of drug testing, and more particularly, the present invention relates to an HPLC method for the simultaneous determination of the components of Ginkgo biloba (or its extract) and its preparations. The method of the invention and Ginkgo biloba (or its extract) 14 kinds of flavonoids and its preparation and content of 2 kinds of phenolic compounds were determined, provides a new analysis method and basis for the quality control of commercially available preparations of Ginkgo biloba.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定银杏叶提取物及其制剂中多组分含量的方法
本专利技术涉及药物检测领域，更具体地说，本专利技术涉及一种同时测定银杏叶提取物及其制剂中多组分含量的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
银杏是地球上最古老的植物之一，为银杏科银杏属植物，该树种生命力极强，上千年的树龄并不罕见，堪称植物界的“老寿星”。《本草纲目》中记载，银杏叶可补心养气，益肾润肺，健脑醒神，延年益寿。现代药理学研究表明，银杏叶具有清除氧自由基、降血脂、增强中枢神经系统功能、调节神经递质和激素水平、改善血液流变状态、抗炎、抗过敏等作用。因而用银杏叶研制开发的制剂品种越来越多，临床应用越来越广泛。目前在临床上应用的有斯泰隆、金纳多、天保宁、银可络、舒血宁、络欣通，冠心酮等多种品牌的片剂、颗粒剂、注射剂，主要用于治疗各种心脑血管疾病、糖尿病、神经系统疾病和呼吸系统疾病等。随着对银杏叶制剂作用的研究，银杏叶的各种制剂不仅在心脑血管疾病治疗上得到了大家认可和应用，而且临床也在慢性阻塞性肺疾病等其他疾病中进行应用。随着研究的深入，银杏叶制剂将会在临床上得到更广泛的应用。银杏叶提取物及其制剂中主要有效成分为黄酮苷类和萜类内酯活性物质，到目前为止，国内外关于银杏叶及其制剂的质量控制方法普遍是测定这两类成分的含量。关于银杏叶及其制剂中黄酮苷类和萜类内酯含量测定方法，已经有高效液相色谱法。例如，CN104034826提供了一种使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测银杏叶萜类内酯的方法，采用该方法可以同时检测4种萜类内酯；刘会等公开了一种以HPLC-UV法测定银杏叶提取物中3个黄酮醇苷含量，并以HPLC-ELSD法测定4个萜类内酯含量的方法(中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年2月第30卷第2期，第598～601页)。上述方法是采用不同的检测方法分别检测萜类内酯和黄酮醇苷，缺点是需要采用不同的仪器、不同的样品处理条件分别进样，从而导致操作步骤繁杂，工艺简便性不足。崔大明等公开了一种采用RP-HPLC测定银杏叶提取物类脂质体中的3种银杏黄酮苷(槲皮素、山奈素、异鼠李素)以及4种萜类内酯(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)含量的方法(吉林农业大学学报，2013，35(4):446～449，462)；任艳平等公开了一种采用HPLC－MS同时测定舒血宁注射液中银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)、银杏内酯C(GC)、白果内酯、(BB)以及槲皮素(QCT)、异鼠李素(ISR)和山柰酚(KAE)等7个成分含量的方法(药物分析杂志，2013，33(2)第220～224页)。上述方法能够同时检测黄酮苷和萜类内酯，大大简化了操作流程。在上述的众多检测方法中同时测定多种成分含量时需用到每一种成分的对照品，这样会让多指标综合质量控制在实际生产和检测工作中会因检测成本过高而使质量控制指标减少，不利于药材质量的全面评价。由此可见，尝试引入一测多评方法以实现各类成分的同时检测是规范和完善银杏叶制剂的质量控制的必备之选。张方等公开了一种“一测多评法同时测定舒血宁注射液中6中黄酮类成分”(《中国药师》，2015年第18卷第10期，1652～1656页)的方法；杨艳模等公开了一测多评技术在银杏叶提取物及其金鸡制剂中的应用研究(湖南中医药大学硕士学位论文，2014年)。但是，上述两种方法的可检测的组分较少，且不能同时检测黄酮类和酚酸类成分，因此有必要进行更深入研究，开发更好的检测技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种同时测定银杏叶提取物及其制剂中14种黄酮苷类组分和2种酚酸类组分含量的检测方法。使用这种方法，可以更好的控制制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好地指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能够全面认识产品质地。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种采用高效液相色谱法同时测定银杏叶、银杏叶提取物及其制剂中黄酮苷类和酚酸类组分含量的方法，其中所述制剂不包括舒血宁注射液，该法采用的色谱条件为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；柱温33℃～37℃；洗脱流速为0.1～0.5mL/min；流动相A是含质量比为0.1％的甲酸的水溶液；流动相B是甲醇和乙腈的混合溶剂，体积比是1：1；进行梯度洗脱，梯度条件为：采用二极管阵列检测器，采用270nm～290nm范围内的紫外波长检测酚酸类组分，并同时采用350nm～370nm范围内的紫外波长检测黄酮苷类成分。在一些实施方案中，色谱柱优选的柱温为35℃。在一些实施方案中，所述洗脱流速优选0.3mL/min。在一些实施方案中，优选采用280nm的紫外波长检测酚酸类组分。在一些实施方案中，优选采用360nm的紫外波长检测黄酮苷类组分。在一些实施方案中，优选采用280nm的紫外波长检测酚酸类组分，同时采用360nm的紫外波长检测黄酮苷类组分。在一些实施方案中，优选采用外标法计算所述黄酮苷类和酚酸类组分的含量。在一些实施方案中，优选采用一测多评法计算所述黄酮苷类和酚酸类组分的含量，其中黄酮苷类组分以芦丁为内标，酚酸类组分以隐绿原酸为内标。在一些实施方案中，进样体积为1μL。在一些实施方案中，所述色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱。在一些实施方案中，所述色谱柱规格为1.7μm，2.1×150mm。本专利技术所述的2种酚酸类组分分别为原儿茶酸和隐绿原酸；所述的14种黄酮类组分分别为碟豆素、芦丁、异槲皮苷、槲皮素-3-O-葡萄糖基(1→2)鼠李糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、大波斯菊苷、水仙苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-鼠李糖基}-槲皮素、槲皮素、3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-(1-2)鼠李糖基}-山奈酚、山奈酚、异鼠李素。本专利技术的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：(1)本专利技术的方法能在同一个高效液相色谱条件下同时测定银杏叶提取物及其制剂中14种黄酮苷类组分和2种酚酸类组分的含量，避免了在检测中频繁更换液相条件，提高了工作效率，适合工业大生产的要求。(2)本专利技术的方法耐用性好，容易实现，所用仪器设备及试剂均是常规用品，试验参数也是常规参数，无苛刻条件，成本低，大多数实验室的条件均能满足。(3)本专利技术的一测多评法，选取两个廉价、易得、稳定的成分作为内参物完成对其他14种成分的同时测定，解决其他成分对照品不易获得所导致的检测方法难以运用到实际生产的问题。附图附图1：混合标准品溶液在280nm吸收波长的色谱图；附图2：混合标准品溶液在360nm吸收波长的色谱图；附图3：银杏叶提取物在280nm吸收波长的色谱图；附图4：银杏叶提取物在360nm吸收波长的色谱图；附图1至附图4均为：1：原儿茶酸；2：隐绿原酸；3：碟豆素；4：芦丁；5：异槲皮苷；6：槲皮素-3-O-葡萄糖基(1→2)鼠李糖苷；7：山奈酚-3-O-芸香糖苷；8：紫云英苷；9：大波斯菊苷；10：水仙苷；11：异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷；12：3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-鼠李糖基}-槲皮素；13：槲皮素；14：3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-(1-2)鼠李糖基}-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用高效液相色谱法同时测定银杏叶、银杏叶提取物及其制剂中黄酮苷类和酚酸类组分含量的方法，其中所述制剂不包括舒血宁注射液，其特征在于采用的色谱条件为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；柱温33℃～37℃；洗脱流速为0.1～0.5mL/min；流动相A是含质量比为0.1％的甲酸的水溶液；流动相B是甲醇和乙腈的混合溶剂，体积比是1：1；进行梯度洗脱，梯度条件为：

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法同时测定银杏叶、银杏叶提取物及其制剂中黄酮苷类和酚酸类组分含量的方法，其中所述制剂不包括舒血宁注射液，其特征在于采用的色谱条件为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；柱温33℃～37℃；洗脱流速为0.1～0.5mL/min；流动相A是含质量比为0.1％的甲酸的水溶液；流动相B是甲醇和乙腈的混合溶剂，体积比是1：1；进行梯度洗脱，梯度条件为：时间(min)A(％)B(％)0881288515107723157723167624257030266535346535358812采用二极管阵列检测器，采用270nm～290nm范围内的紫外波长检测酚酸类组分，并同时采用350nm～370nm范围内的紫外波长检测黄酮苷类组分。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述柱温为35℃。3.根据权利要求1或2所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：常艳旭，高秀梅，田吉，李晋，王晖，李志刚，张纲，郝福，关秀伟，
申请(专利权)人：河北神威药业有限公司，天津中医药大学，神威药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13