一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法技术

本发明专利技术提供一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，所述保元汤制剂的指标成分包括人参皂苷Rg

【技术实现步骤摘要】
一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法
本专利技术涉及药物分析
，尤其涉及一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法。
技术介绍
保元汤出自明孙志宏编纂的《简明医彀》(1629年)，是古代经典名方，主“元气虚弱，精神倦怠，肌肉柔慢，饮食少进，面青白，睡卧宁静及有杂证，皆属虚弱，宜服”，其组方由人参、黄芪、甘草、肉桂组成，煎煮时加生姜一片。作为中医药传承与发展过程中保留下来的中药方剂杰出代表之一，在现代临床上有着广泛的应用，主要用于冠心病、慢性肾衰、再生障碍性贫血、乙型肝炎、白细胞减少等病证的治疗。但是，目前保元汤的质量控制较为简单，主要采用薄层色谱法对其化合物进行鉴别，或者采用高效液相色谱法对保元汤主要成分中的单个化合物进行含量检测，不能全面反映保元汤的质量。此外，由于地理气候条件、采收时间和预处理方式等方面的差异，不同产区的同种中药其化学成分含量存在较大差异。以多味药材中多种有效成分共同检测是提高中药质量控制标准的必然趋势。因此，开发一种可以同时检测保元汤中多种指标成分的含量测定方法，实现对保元汤中多个指标成分的控制，对今后保元汤的开发和质量控制具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对现有检测方法无法实现保元汤制剂中多个指标成分的同时检测的问题，本专利技术提供一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，所述保元汤制剂的指标成分包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸，在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)供试品溶液和混合对照品工作液的配制：取保元汤制剂制成供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸单铵盐、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸对照品，用溶剂配制成混合对照品工作液；(2)按照下述超高效液相色谱条件对所述供试品溶液和混合对照品工作液进行检测，色谱条件为：色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；DAD检测器，检测波长201-205nm，258-262nm，288-292nm，358-362nm；流动相A：乙腈，流动相B：醋酸铵缓冲溶液；洗脱方式为梯度洗脱。本专利技术中检测波长201-205nm用于检测人参皂苷Rg1/Re、人参皂苷Rb1；258-262nm用于检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸；288-292nm用于检测肉桂酸；358-362nm用于芹糖异甘草苷、异甘草苷。本专利技术所述保元汤制剂包括保元汤的液体制剂和固体制剂，所述液体制剂包括保元汤水煎液和保元汤口服液，所述保元汤固体制剂的剂型包括片剂、粉剂、颗粒剂或胶囊剂等。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸这几种组分的极性不同，对pH的敏感性不同，最大吸收波长也不相同，本专利技术提供的保元汤中多指标成分的检测方法，综合考量了上述多种因素，以十八烷基键合硅胶色谱柱作为检测色谱柱，以乙腈-醋酸铵缓冲液作为流动相，采用特定的梯度洗脱程序，有效克服了保元汤药味繁多、各成分复杂且相互干扰而不能全面、清晰地对保元汤质量进行检测的缺陷。本专利技术通过对高效液相色谱条件的控制，实现了保元汤中多种主要有效成分的同时定量检测，将原本需要多次定量检测完成的测定指标，能够用一次定量检测完成，极大地提高了检测效率；且本专利技术提供的方法经专属性、灵敏度等方法学研究及验证，发现本专利技术的方法灵敏度、准确度、重现性较好，可以实现更加全面有效地对保元汤的质量进行控制。本专利技术中选择甘草酸单铵盐作为甘草酸的对照品，在计算供试品溶液的甘草酸的含量时将对照品溶液中的甘草酸单铵盐折算为甘草酸的含量进行计算。可选的，混合对照品工作液配制中所用溶剂可为甲醇或乙醇，优选为甲醇。优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：0-10min，7％→23.5％流动相A，93％→76.5％流动相B；10-16min，23.5％流动相A，76.5％流动相B；16-18min，23.5％→26％流动相A，76.5％→74％流动相B；18-22min，26％→32％流动相A，74％→68％流动相B；22-27min，32％→52％流动相A，68％→48％流动相B；27-32min，52％→90％流动相A，48％→10％流动相B。优选的梯度洗脱顺序，可以提高各组分峰之间的分离度和检测的灵敏度，使检测结果定量准确，且精密度高。优选的，所述醋酸铵缓冲液的浓度为0.8-1.2mmol/L，pH为4.3-4.7。更优选的，所述醋酸铵缓冲液的浓度为1.0mmol/L，pH为4.5。优选的流动相的浓度、pH值，可以减少谱带拖尾，改善峰形，从而有利于提高各组分之间的分离度。优选的，流速为0.4-0.6mL/min，柱温为25-35℃。更优选的，流速为0.5mL/min，柱温为30℃，进样体积为5μL。优选的流速和柱温，有利于进一步提高各组分之间的分离度，使检测结果的准确度及精密度更高。优选的，检测波长为203nm、260nm、290nm和360nm。优选的检测波长，可尽量避免中药提取物中大量杂质对检测的干扰，提高检测的灵敏度和检测结果的准确性。优选的，所述色谱柱的规格为100*4.6mm，填料直径为2.7μm。更优选的，所述色谱柱为AgilentProshell120EC-C18。优选的色谱柱规格、型号可以使各组分峰形、分离度及检测的灵敏度俱佳，且基线干扰较小。优选的，所述用于保元汤的原料包括人参、黄芪、甘草和肉桂，附加生姜。优选的，所述供试品溶液的配制包括如下步骤：S1，精密量取所述保元汤液体制剂或保元汤固体制剂的水溶液，加入无水乙醇，涡旋，离心，取上清液蒸干后，甲醇溶解定容，过滤，得检测除人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1之外其他指标成分的供试品溶液；S2，精密量取所述保元汤液体制剂或保元汤固体制剂的水溶液加入OasisHLB型固相萃取柱中，以纯净水、38-42wt％甲醇水溶液洗涤样品，然后以58-62wt％甲醇水溶液洗脱样品，收集洗脱液，在惰性氛围下蒸干，甲醇溶解定容，过滤，得检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1三种指标成分的供试品溶液。保元汤水煎液的制备方法步骤如下：将人参3.75g、黄芪7.5g、甘草1.85g和肉桂0.75g混匀，附加生姜1片，加入8-12倍量的水浸泡25-35min，武火煮沸，文火煎煮35-45min，过滤，60℃减压浓缩，加水定容至25mL，得保元汤水煎液。优选的，步骤S1中，无水乙醇的加入量为量取保元汤液体制剂或保元汤固体制剂的水溶液的体积的5.8-6.2倍，将上清液蒸干后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，所述保元汤制剂的指标成分包括人参皂苷Rg

【技术特征摘要】
1.一种保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，所述保元汤制剂的指标成分包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液和混合对照品工作液的配制：
取保元汤制剂制成供试品溶液；
取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草酸单铵盐、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸对照品，用溶剂配制成混合对照品工作液；
(2)按照下述超高效液相色谱条件对所述供试品溶液和混合对照品工作液进行检测，色谱条件为：
色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；
DAD检测器，检测波长201-205nm，258-262nm，288-292nm，358-362nm；
流动相A：乙腈，流动相B：醋酸铵缓冲溶液；
洗脱方式为梯度洗脱。


2.如权利要求1所述的保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
0-10min，7％→23.5％流动相A，93％→76.5％流动相B；
10-16min，23.5％流动相A，76.5％流动相B；
16-18min，23.5％→26％流动相A，76.5％→74％流动相B；
18-22min，26％→32％流动相A，74％→68％流动相B；
22-27min，32％→52％流动相A，68％→48％流动相B；
27-32min，52％→90％流动相A，48％→10％流动相B。


3.如权利要求1所述的保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，其特征在于，所述醋酸铵缓冲液的浓度为0.8-1.2mmol/L，pH为4.3-4.7。


4.如权利要求1或3所述的保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，其特征在于，所述醋酸铵缓冲液的浓度为1.0mmol/L，pH为4.5。


5.如权利要求1所述的保元汤制剂中多指标成分的同时检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓波，张敏，王梦月，李寅庆，侯金才，秦玉霞，
申请(专利权)人：河北神威药业有限公司，神威药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13