一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法技术

本发明专利技术提供了一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法，该方法按照以下步骤进行：步骤一，将印迹底物加入到磷脂酶D溶液中进行配合，得到酶‑底物配合物溶液(印迹酶)；步骤二，加入沉淀剂沉淀酶‑底物配合物，得到含有酶‑底物配合物聚集体混合溶液；步骤三，向沉淀后的混合溶液中加入水溶性交联剂进行交联反应，得到交联酶‑底物配合物聚集体；步骤四，对交联酶‑底物配合物聚集体进行洗涤，除去底物后得到交联印迹磷脂酶D聚集体。本发明专利技术的方法在磷脂酶D分子与底物分子印迹作用结束后，采用沉淀法“僵化”酶分子的这种“超活化”结构，再加入适当的水溶性交联剂对酶分子进行交联作用，实现了“超活化”结构酶分子的分子间交联和分子内交联，形成交联印迹磷脂酶D聚集体。

Phospholipase D immobilization method for improving synthesis activity of phosphatidyl glycerol

The invention provides a method for increasing the phosphatidylglycerol synthesis reaction activity of phospholipase D immobilization method, this method is carried out according to the following steps: step one, will be added to the substrate imprinted with phospholipase D solution, enzyme substrate complexes have solution (imprinted enzyme); step two, adding precipitant to precipitate the enzyme the substrate complexes containing enzyme substrate complexes aggregates mixed solution; step three, adding to the water soluble crosslinking agent, crosslinking reaction sex mixed solution after precipitation, obtained cross-linked enzyme substrate complex aggregates; step four, washing the cross-linked enzyme substrate complex aggregates, removed after crosslinking imprinting phospholipase D aggregates. The method of the invention at the end of phospholipase D molecule and substrate molecular imprinting effect, by precipitation method \rigid\ enzyme molecules such \super activation\ structure, then add the appropriate water-soluble crosslinking agent for crosslinking effects on the enzyme molecule, to achieve a \super molecular structure of enzyme activation and crosslinking between molecules the formation of cross-linked, crosslinked imprinted phospholipase D aggregates.

【技术实现步骤摘要】
一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法
本专利技术属于磷脂类物质合成领域，涉及磷脂酶D，具体涉及一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法。
技术介绍
近年来，随着人们对磷脂类物质的深入研究，更加明确地认识了磷脂的药用价值和营养价值，并将它广泛的应用到食品、药物及保健品等领域。以磷脂酰甘油(PG)为例，其可降低肺表面张力,稳定肺泡的功能，在肺部疾病的确诊和治疗方面有着广泛的应用。同时，PG由于其独特的结构和理化性质，还是人工合成胡萝卜素类脂的重要中间产物。然而自然界获取的天然PG结构成分复杂，不能满足生产要求和市场需要。因此，需要采取相应手段对天然磷脂进行改性处理，以制备出高纯度，单一组分的磷脂产品。利用磷脂酶D(PLD),在丙三醇存在的条件下，催化自然界含量较高的磷脂(通常是磷脂酰胆碱，PC)发生磷脂酰基转移反应，可以合成高纯度磷脂酰甘油，是目前公认的制备高纯度稀有磷脂最有效的途径。该方法具有操作简单、反应条件温和、催化效率高以及产物收率高的显著优势。而游离磷脂酶D稳定性差、难回收、昂贵的价格却是制约PG大规模工业化生产的主要原因。通过固定化酶技术可以有效提高磷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法，其特征在于，该方法按照以下步骤进行：步骤一，将印迹底物加入到磷脂酶D溶液中进行配合，得到酶‑底物配合物溶液；步骤二，加入沉淀剂沉淀酶‑底物配合物，得到含有酶‑底物配合物聚集体混合溶液；步骤三，向沉淀后的混合溶液中加入水溶性交联剂进行交联反应，得到交联酶‑底物配合物聚集体；步骤四，对交联酶‑底物配合物聚集体进行洗涤，除去底物后得到交联印迹磷脂酶D聚集体。

【技术特征摘要】
1.一种提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法，其特征在于，该方法按照以下步骤进行：步骤一，将印迹底物加入到磷脂酶D溶液中进行配合，得到酶-底物配合物溶液；步骤二，加入沉淀剂沉淀酶-底物配合物，得到含有酶-底物配合物聚集体混合溶液；步骤三，向沉淀后的混合溶液中加入水溶性交联剂进行交联反应，得到交联酶-底物配合物聚集体；步骤四，对交联酶-底物配合物聚集体进行洗涤，除去底物后得到交联印迹磷脂酶D聚集体。2.如权利要求1所述的提高磷脂酰甘油合成反应活力的磷脂酶D固定化方法，其特征在于，该方法具体按照以下步骤进行：步骤一，磷脂酶D的印迹：将印迹底物加入到磷脂酶D溶液中，搅拌30～120min，得到酶-底物配合物，其中：所述的印迹底物为丙三醇或磷脂酰胆碱；所述的磷脂酶D溶液为磷脂酶D的醋酸缓冲液；每1mL含有磷脂酶D浓度为0.05mg/mL的醋酸缓冲液中对应加入0.01～0.1g丙三醇；或者每1mL含有磷脂酶D浓度为0.05mg/mL的醋酸缓冲液中对应加入0.1mL含有磷脂酰胆碱浓度为0.1～1mg/mL的乙醚溶液；步骤二，磷脂酶D-底物配合物的沉淀：向步骤一中得到的酶-底物配合物溶液中滴加无水沉淀剂并搅拌，滴加完毕后，继续在搅拌下沉淀10～30min，得到含有磷脂酶D-底物配合物聚集体混合溶液，其中：每1mL含有磷脂酶D浓度为0.05mg/mL的醋酸缓冲液中对应加入8～10mL无水沉淀剂；步骤三，磷脂酶D-底物配合物聚集体的交联：向步骤二中得到的混合溶液中加入水溶性交联剂进行交联反应60～...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小里，王姣，李冰麟，段丹丹，赵彬侠，董文博，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61