人巨细胞病毒中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及具有中和hCMV的高效价的中和抗体和其抗体片段，其中所述抗体和抗体片段对于一个、或组合的两个或更多hCMV基因UL产物是特异性的。本发明专利技术还涉及产生这些抗体和抗体片段的永生化B细胞，并且涉及结合这些抗体和抗体片段的抗原表位。另外，本发明专利技术涉及抗体、抗体片段和抗原表位在筛选方法以及疾病诊断、预防或治疗中的应用。

Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and uses thereof

The present invention relates to neutralizing antibodies and their antibody fragments having high efficiency for neutralizing hCMV, wherein the antibodies and antibody fragments are specific to one or more of the two or more hCMV gene UL products. The present invention also relates to immortalized B cells producing these antibodies and antibody fragments, and to the epitope that combines these antibodies and antibody fragments. In addition, the present invention relates to antibodies, antibody fragments and epitopes, in screening methods, and in the diagnosis, prophylaxis, or treatment of diseases.

【技术实现步骤摘要】
人巨细胞病毒中和抗体及其应用本申请是中国专利申请号200980129827.X，申请日2009年7月15日，专利技术名称“人巨细胞病毒中和抗体及其应用”的分案申请(申请号为201410204215.5，分案申请提交日为2014年5月13日，专利技术名称为“人巨细胞病毒中和抗体及其应用”)的分案申请。本申请要求于2008年7月16日提交的美国临时申请No.61/081,334的优先权，其所披露的内容通过引用完整地包含于此。
技术介绍
人巨细胞病毒(hCMV)是一种广泛分布的病原体，其可在有免疫抑制的成人中以及在感染胎儿后导致严重的病理，并参与诸如动脉粥样硬化等慢性疾病。hCMV能感染多种细胞类型，包括成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞和造血细胞[1]。体外培殖的hCMV减毒株正被开发作为候选疫苗，其已经丧失了对内皮细胞的嗜性，但是仍然保留感染成纤维细胞的能力[2]。hCMV的细胞嗜性被认为是由两种病毒糖蛋白复合物调控的。糖蛋白如gH、gL和gO的复合物似乎是感染成纤维细胞所需要的，而gH、gL和由UL131-UL128基因编码的蛋白质的复合物参与内皮细胞、上皮细胞和树突状细胞的感染[2-8]。超免疫球蛋白已经商业化用于预防移植相关的hCMV疾病，并且最近的证据表明它们对妊娠的妇女有治疗效果[9]。该治疗方法受限于低剂量的可以转移的中和抗体，由此，具有高中和能力的人抗体(如人单克隆抗体)的可用性将是非常希望的。尽管一些针对gH、gB以及UL128和UL130基因产物的抗体已经证明具有体外中和活性[7，10，11]，并且一种抗gH的抗体已经在临床实验中进行了评估(由于缺乏治疗效果而终止)，但迄今为止分离的抗体的中和效价不高。当抗体浓度范围是0.5-20μg/ml时可以观察到这些抗体的中和作用。此外，目前的方法通常使用成纤维细胞作为靶细胞测定抗-hCMV抗体的中和效价。然而，已知hCMV通过感染其它细胞类型诸如内皮细胞、上皮细胞以及白细胞也能引起病理。已知的UL128和UL130的抗体显示极低的中和内皮细胞感染的效价[7]，并且似乎没有任何能够以高效价中和非成纤维细胞靶细胞感染的单克隆抗体。因此，人们需要能够以高效价中和hCMV感染，特别是非成纤维细胞靶细胞的hCMV感染的抗体，以及这些抗体结合的靶标的说明。专利技术概述本专利技术部分程度上是基于能够以高效价中和hCMV感染的新抗体以及本专利技术的抗体结合的新抗原表位的发现。因此，一方面，本专利技术包括一种具有中和hCMV的高效价的抗体以及其抗原结合片段。在本专利技术的一外实施方案中，本专利技术包括一种单克隆抗体，或其抗原结合片段，其能够与hCMVUL128蛋白的抗原表位结合，其中该抗体中和hCMV感染。本专利技术的另一实施方案中，本专利技术包括一种抗体，或其抗原结合片段，其能够与由hCMV蛋白gH、gL、UL128和UL130，hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A，或hCMV蛋白UL130和UL131A形成的抗原表位结合，其中所述抗体中和hCMV感染。在本专利技术的又一实施方案中，本专利技术包括一种抗体，或其抗原结合片段，其含有至少一个与SEQIDNOs:188-193,204,205,210,174-177,149,178,65-70,81-86,97-102,129-134,145-150,113,161-164,1-6,17-22,33-38,49-54或114-118中的任一序列至少有95％序列同一性的互补决定区(“CDR”)序列，其中所述抗体中和hCMV感染。在本专利技术的又一实施方案中，本专利技术包含选自SEQIDNOs:188,174,65,81,97,129,145,113,1,17,33和49的重链CDR1；选自SEQIDNOs:189,204,175,66,82,98,130,146,161,2,2,18,34,50和114的重链CDR2；和选自SEQIDNOs:190,205,210,176,67,83,99,131,147,162,3,19,35,51和115的重链CDR3，其中所述抗体中和hCMV感染。本专利技术的又一实施方案中，本专利技术包括一种抗体，或其抗原结合片段，其包含选自SEQIDNOs:191,177,68,84,100,132,148,163,4,20,36,52和116的轻链CDR1；选自SEQIDNOs:192,149,69,85,101,133,5,21,37,53和117的轻链CDR2；和选自SEQIDNOs:193,178,70,86,102,134,150,164,6,22,38,54和118的轻链CDR3，其中所述抗体中和hCMV感染。在本专利技术的另一实施方案中，本专利技术包括一种抗体，或其抗原结合片段，其中该抗体含有一包含SEQIDNO:200所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:201所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:200所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:213所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:208所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:201所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:208所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:213所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:212所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:201所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:212所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:213所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:184所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:185所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:77所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:78所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:93所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:94所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:109所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:110所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:141所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:142所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:157所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:158所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:170所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:171所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:13所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:14所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:29所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:30所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:45所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:46所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:61所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:62所示氨基酸序列的轻链可变区；或一包含SEQIDNO:125所示氨基酸序列的重链可变区和一包含SEQIDNO:126所示氨基酸序列的轻链可变区，并且所述抗体中和hCMV感染。在本专利技术的进一步的实本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合由hCMV蛋白UL130和UL131A形成的表位的第一抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗hCMV感染的药物中的用途，其中所述治疗包括将所述第一抗体与结合hCMV蛋白gB的第二抗体或其抗原结合片段组合施用，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含：a.分别如SEQ ID NOs:49、50和51所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQ ID NOs:52、53和54所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；b.分别如SEQ ID NOs:1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQ ID NOs:4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；c.分别如SEQ ID NOs:17、18和19所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQ ID NOs:20、21和22所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；d.分别如SEQ ID NOs:33、34和35所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQ ID NOs:36、37和38所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；或e.分别如SEQ ID NOs:113、114和115所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQ ID NOs:116、117和118所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。...

【技术特征摘要】
2008.07.16 US 61/081,3341.结合由hCMV蛋白UL130和UL131A形成的表位的第一抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗hCMV感染的药物中的用途，其中所述治疗包括将所述第一抗体与结合hCMV蛋白gB的第二抗体或其抗原结合片段组合施用，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含：a.分别如SEQIDNOs:49、50和51所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:52、53和54所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；b.分别如SEQIDNOs:1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；c.分别如SEQIDNOs:17、18和19所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:20、21和22所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；d.分别如SEQIDNOs:33、34和35所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:36、37和38所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；或e.分别如SEQIDNOs:113、114和115所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:116、117和118所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。2.结合hCMV蛋白gB的第二抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗hCMV感染的药物中的用途，其中所述治疗包括将所述第二抗体与结合由hCMV蛋白UL130和UL131A形成的表位的第一抗体或其抗原结合片段组合施用，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含：a.分别如SEQIDNOs:49、50和51所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:52、53和54所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；b.分别如SEQIDNOs:1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；c.分别如SEQIDNOs:17、18和19所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:20、21和22所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；d.分别如SEQIDNOs:33、34和35所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:36、37和38所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；或e.分别如SEQIDNOs:113、114和115所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:116、117和118所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。3.第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗hCMV感染的药物中的用途，其中所述第一抗体或其抗原结合片段结合由hCMV蛋白UL130和UL131A形成的表位，和其中所述第二抗体或其抗原结合片段结合hCMV蛋白，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含：a.分别如SEQIDNOs:49、50和51所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:52、53和54所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；b.分别如SEQIDNOs:1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:4、5和6所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；c.分别如SEQIDNOs:17、18和19所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:20、21和22所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；d.分别如SEQIDNOs:33、34和35所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:36、37和38所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列；或e.分别如SEQIDNOs:113、114和115所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别如SEQIDNOs:116、117和118所示的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列。4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含：a.如SEQIDNO:61所示的重链可变区序列，和如SEQIDNO:62所示的轻链可变区序列；b.如SEQIDNO:13所示的重链可变区序列，和如SEQIDNO:14所示的轻链可变区序列；c.如SEQIDNO:29所示的重链可变区序列，和如SEQIDNO:30所示的轻链可变区序列；d.如SEQIDNO:45所示的重链可变区序列，和如SEQIDNO:46所示的轻链可变区序列；或e.如SEQIDNO:125所示的重链可变区序列，和如SEQIDNO:126所示的轻链可变区序列。5.根据权利要求4所述的用途，...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·兰扎维奇雅，A·玛卡格诺，
申请(专利权)人：生物医学研究学会，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH