双环肽E[c(RGDfK)]2及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种双环肽E[c(RGDfK)]2及其制备方法，该法为：1)将树脂与Fmoc‑Asp‑oall浸于DCM中，加DIEA进行接触反应，进行洗涤；2)将DCM、甲醇和DIEA至体系中封头处理，加哌啶脱保护；3)将G、HoBt、TBTU加入反应体系中接触反应；4)将R、K、f依次加入反应体系中接触反应，接着加Pd(PPh3)4进行丙烯基去除反应，加哌啶脱保护；5)将DIEA、HoBt、HBTU加入体系中接触反应，加水合肼和DMF的混合溶液二次反应，洗涤脱除Dde；6)将Fmoc‑Glu‑OH、HoBt、DMF、TBTU滴加至反应体系中接触反应，洗涤；7)将哌啶加入反应体系中脱保护，通过DMF、DCM、甲醇洗涤，后处理以制得所述双环肽E[c(RGDfK)]2。该双环肽E[c(RGDfK)]2具有优异的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
双环肽E[c(RGDfK)]2及其制备方法
本专利技术涉及环肽，具体地，涉及双环肽E[c(RGDfK)]2及其制备方法。
技术介绍
人们身体内所有器官都是由细胞组成。有序的细胞增长和分化可满足身体需要，维持身体健康。然而，如果细胞持续分裂，不再受身体控制，无限代谢生殖，那么这些额外的大量细胞就形成肿瘤。恶性肿瘤的细胞能侵犯、破坏邻近的组织和器官。而且，癌细胞可从肿瘤中穿出，进入血液或淋巴系统，危及生命。目前已经研发出许多抗肿瘤药物，且都具有有效的药理活性，但是它们的溶解性差，在体内很快会被清除，以及具有一定的毒性和副作用，使得它们的临床应用受到了限制。在药物研发中，多学科交叉越来越重要。高分子材料科学和药物制剂学的发展催生了药用高分子材料学。药用高分子材料直接促进了药物输送系统(drugdeliverysystem)的发展。药用高分子材料为开发缓释制剂、靶向制剂、自调式给药制剂、生物药的非注射给药制剂以及中药制剂的现代化提供了物质基础。两亲性聚合物胶束作为药物载体具有很多优势：(1)提高难溶性药物溶解度。难溶性药物可被包裹于胶束疏水性内核中，难溶药物在其中的分配系数高，具有很高的载药量；(2)提高药物稳定性。药物被包裹后，可避免一些外周环境因素的影响(例如对于一些蛋白药物或者多肽类药物，可以起到保护药物的作用，防止药物被酶解)；(3)提高生物利用度。胶束外壳的亲水段为胶束披上了一层“伪装”，不易被吞噬细胞或蛋白质识别，可避免被内状网皮系统(RES)捕获，延长了胶束在血液和组织的滞留时间，提高药物的生物利用度；(4)靶向作用。被动靶向性或通过引入一些特殊功能基使胶束具有主动靶向性，提高疗效，降低副作用。近年来，肿瘤成像和治疗的目标是αvβ3整合素，因为它在多种癌细胞类型(黑素瘤，成胶质细胞瘤，卵巢，乳腺，前列腺癌等)上过表达。这种整合素在人类肿瘤转移和肿瘤诱导的血管生成中发挥关键作用。Arg-Gly-Asp(RGD)肽序列已被鉴定是选择性识别αvβ3整联蛋白有用的靶向配体。环状RGD五肽不仅对αvβ3具有高亲和力，尤其是环状五肽(Arg-Gly-Asp-Phe-Lys)(c(RGDfK))以高亲和力选择性结合整联蛋白αvβ3。由于环肽比线形肽有更好的刚性强度和更好的特异性，同时，不易被体内氨肽酶羧肽酶等酶切割降解等优点，受到广泛重视。虽然环状RGD五肽具有上述优异的特性，但是其稳定性较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种双环肽E[c(RGDfK)]2及其制备方法，该双环肽E[c(RGDfK)]2具有优异的稳定性且该制备方法条件温和。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种双环肽E[c(RGDfK)]2的制备方法，该备方法包括：1)将树脂与Fmoc-Asp-oall(Fmoc-L-天冬氨酸alpha-烯丙酯)浸泡于DCM(二氯甲烷)中，接着加入DIEA(N，N-二异丙基乙胺)进行接触反应，然后进行洗涤；2)将DCM、甲醇和DIEA加入反应体系中进行封头处理，接着加入哌啶进行脱保护，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；3)将G(甘氨酸)、HoBt(1-羟基苯并三氮唑)、TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸酯)加入反应体系中进行接触反应，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；4)将R(精氨酸)、K(赖氨酸)、f(苯丙氨酸)依次加入反应体系中进行接触反应，接着加入Pd(PPh3)4(四(三苯基磷)钯)进行丙烯基去除反应，然后加入哌啶进行脱保护、洗涤至洗脱废液无色或淡红色；5)将DIEA、HoBt、HBTU(苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯)加入反应体系中进行接触反应，接着加入水合肼(N，N-二甲基甲酰胺)和DMF的混合溶液进行二次反应，然后洗涤脱除Dde直至茚三酮检测为蓝色；6)将Fmoc-Glu-OH(Fmoc-L-谷氨酸/芴甲氧羰基-L-谷氨酸)、HoBt、DMF、TBTU滴加至反应体系中进行接触反应，接着洗涤直至茚三酮检测为无色或者微弱的蓝色；7)将哌啶加入反应体系中进行脱保护，接着依次通过DMF、DCM、甲醇洗涤，然后干燥、加入切割液切割、沉降、纯化以制得双环肽E[c(RGDfK)]2；其中，树脂选自2-cl树脂和Wang树脂中的至少一者。本专利技术还提供了一种双环肽E[c(RGDfK)]2，该双环肽E[c(RGDfK)]2通过上述的制备方法制备而得。在上述技术方案，本专利技术先用固相合成法合成出稳定性能好的双环肽E[c(RGDfK)]2。与现有技术相比，该双环肽E[c(RGDfK)]2能够使得制得的抗癌药物在生物体内具有更优异的稳定性，使其具有较广阔的应用前景。同时，该制备方法条件温和，进而使得其适用于规模化生产。本专利技术的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是双环肽的化学结构图：图2是检测例1中双环肽的质谱图；图3是检测例2中双环肽的HPLC检测图；图4是检测例3中双环肽对温度稳定性的检测结果图。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。本专利技术提供了一种双环肽E[c(RGDfK)]2的制备方法，该备方法包括：1)将树脂与Fmoc-Asp-oall(Fmoc-L-天冬氨酸alpha-烯丙酯)浸泡于DCM(二氯甲烷)中，接着加入DIEA(N，N-二异丙基乙胺)进行接触反应，然后进行洗涤；2)将DCM、甲醇和DIEA加入反应体系中进行封头处理，接着加入哌啶进行脱保护，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；3)将G(甘氨酸)、HoBt(1-羟基苯并三氮唑)、TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸酯)加入反应体系中进行接触反应，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；4)将R(精氨酸)、K(赖氨酸)、f(苯丙氨酸)依次加入反应体系中进行接触反应，接着加入Pd(PPh3)4(四(三苯基磷)钯)进行丙烯基去除反应，然后加入哌啶进行脱保护、洗涤至洗脱废液无色或淡红色；5)将DIEA、HoBt、HBTU(苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯)加入反应体系中进行接触反应，接着加入水合肼(N，N-二甲基甲酰胺)和DMF的混合溶液进行二次反应，然后洗涤脱除Dde直至茚三酮检测为蓝色；6)将Fmoc-Glu-OH(Fmoc-L-谷氨酸/芴甲氧羰基-L-谷氨酸)、HoBt、DMF、TBTU滴加至反应体系中进行接触反应，接着洗涤直至茚三酮检测为无色或者微弱的蓝色；7)将哌啶加入反应体系中进行脱保护，接着依次通过DMF、DCM、甲醇洗涤，然后干燥、加入切割液切割、沉降、纯化以制得双环肽E[c(RGDfK)]2；其中，树脂选自2-cl树脂和Wang树脂中的至少一者。在在上述制备方法的步骤1)中，各物料的用量可以在宽的范围内选择，但是为了使得制得的双环肽E[c(RGDfK)]2能够更好合成，优选地，在步骤1)中，相对于1g的树脂，Fmoc-Asp-oall的用量为0.5-0.6g，DCM的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双环肽E[c(RGDfK)]

【技术特征摘要】
1.一种双环肽E[c(RGDfK)]2的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：1)将树脂与Fmoc-Asp-oall(Fmoc-L-天冬氨酸alpha-烯丙酯)浸泡于DCM(二氯甲烷)中，接着加入DIEA(N，N-二异丙基乙胺)进行接触反应，然后进行洗涤；2)将DCM、甲醇和DIEA加入反应体系中进行封头处理，接着加入哌啶进行脱保护，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；3)将G(甘氨酸)、HoBt(1-羟基苯并三氮唑)、TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸酯)加入反应体系中进行接触反应，然后洗涤直至反应体系经过茚三酮检测为蓝色；4)将R(精氨酸)、K(赖氨酸)、f(苯丙氨酸)依次加入反应体系中进行接触反应，接着加入Pd(PPh3)4(四(三苯基磷)钯)进行丙烯基去除反应，然后加入哌啶进行脱保护、洗涤至洗脱废液无色或淡红色；5)将DIEA、HoBt、HBTU(苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯)加入反应体系中进行接触反应，接着加入水合肼(N，N-二甲基甲酰胺)和DMF的混合溶液进行二次反应，然后洗涤脱除Dde，直至茚三酮检测为蓝色；6)将Fmoc-Glu-OH(Fmoc-L-谷氨酸/芴甲氧羰基-L-谷氨酸)、HoBt、DMF、TBTU滴加至反应体系中进行接触反应，接着洗涤直至茚三酮检测为无色或者微弱的蓝色；7)将哌啶加入反应体系中进行脱保护，接着依次通过DMF、DCM、甲醇洗涤，然后干燥、加入切割液切割、沉降、纯化以制得所述双环肽E[c(RGDfK)]2；其中，所述树脂选自2-cl树脂和Wang树脂中的至少一者。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤1)中，相对于1g的所述树脂，所述Fmoc-Asp-oall的用量为0.5-0.6g，所述DCM的用量为20-30mL，所述DIEA的用量为1-1.5mL；优选地，在步骤1)中，所述浸泡至少满足以下条件：浸泡温度为20-25℃，浸泡时间为2-5min；更优选地，在步骤1)中，所述接触反应至少满足以下条件：反应温度为20-25℃，反应时间为2-3h。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，在步骤2)中，相对于1g的所述树脂，所述DCM的用量为20-30mL，所述甲醇的用量为1-1.5mL，所述DIEA的用量为1-1.5mL，所述哌啶的用量为15-20mL；优选地，在步骤2)中，所述封头处理至少满足以下条件：处理温度为20-25℃，处理时间为30-50min；更优选地，在步骤2)中，所述脱保护至...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛飞，乔茜茜，陶玉贵，朱龙宝，李婉珍，宋平，江志超，
申请(专利权)人：安徽工程大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34